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Alumna: Aguilar Fuentes Camila16 de agosto de 2019

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PATAGONIA SAN JUAN BOSCO FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y CIENCIAS DE LA SALUD.

GENÉTICA – MEDICINA TRABAJO PRACTICO N°1

2) Los ácidos nucleicos son moléculas tamaño variable y poseen carga, lo que le confiere capacidad de migrar en un campo eléctrico, ser separados y estudiados mediante la electroforesis. Su carga negativa dada por los grupos fosfatos les permite migrar hacia el polo positivo, es decir, parten desde el cátodo hacia el ánodo. 3) El estudio de ácidos nucleicos mediante electroforesis es útil para determinar el tamaño de la molécula y para purificar fragmentos en caso de realizar futuras manipulaciones con el mismo. 4) La migración de los ácidos nucleicos en un gel de agarosa depende de: a) Concentración de agarosa: Una molécula de ADN migrará de modo diferente a medida que varíe la concentración de agarosa. A mayor concentración de agarosa, menor diámetro del poro y menor movilidad. b) Tamaño del ADN: Generalmente la tasa de migración de ADN es inversamente proporcional al log10 del numero de pares de bases que conforman la molécula. Cuanto mayor sea el fragmento de ADN, más lento es su migración a través del gel. c) Conformación del ADN: Existen moléculas de ADN que a pesar de presentar el mismo peso molecular adoptan conformaciones diferentes. La velocidad de migración para el ADN lineal > superenrollado > circular cortado > cortado cerrado. Cuando se trata de estructuras circulares, la movilidad aumenta con el grado de enrollamiento, es decir, cuando más compacto es, atraviesa mejor el gel y tiene mayor migración. d) Voltaje aplicado: En general los fragmentos de ADN migran a través del gel de agarosa a una tasa proporcional al voltaje aplicado. Sin embargo, si se incrementa el voltaje, los fragmentos grandes cambian su movilidad electroforética, sin que está guarde relación con su tamaño. En general, la separación de fragmentos grandes es mejor a bajos voltajes, aunque esto incremente el tiempo de electroforesis. e) Buffer: Los dos más usados son TAE y TBE. 5) En un gel de agarosa al 1% migrará más un fragmento de ADN de 500pb que uno de 1000 pb, y uno de 600pb migrará a la misma vez que uno de 605pb por la similitud del tamaño.

Alumna: Aguilar Fuentes Camila16 de agosto de 2019 6) En un gel de agarosa al 1% migrará más un fragmento de ADN de 0.5kb que uno de 500pb. En el mismo gel de agarosa un fragmento de 1kb migrará más que uno de 600pb. 7) El fragmento de ADN de 300pb migrará más en un gel de agarosa al 1% que al 2% porque cuando menor concentración de agarosa, mayor será el diámetro del poro y, por lo tanto, habrá mayor movilidad. 8) Un fragmento de ADN de 300 pb en un gel al 2% por 1 hora a 120 V migra más que otro fragmento de igual tamaño en un gel de 1% por 10 minutos a 60 V porque en la concentración del 2% se le ejerce el doble del voltaje que en el del 1% y además se le da más para que este migre, siendo de esta forma mayor su movilidad. 9) Si se corren muestras de ADN a elevados voltajes o por demasiado tiempo puede alterar la integridad de las muestras, así como su migración, y producir bandas muy débiles. 10)

l

Chart Title 3.5 f(x) = − 0.16 x + 4.01 R² = 0.97

3 2.5 2 1.5 1 0.5 0

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Alumna: Aguilar Fuentes Camila16 de agosto de 2019 y= -0,1622*8,7+4,0112= 2,60006 antilog 2,60006= 398 PM y= -0,1622*6,3+4,0112= 2,989343 antilog 2,989343= 975 PM

Banda Incógnita A Incógnita B

PM (pb) 398 975

Distancia (cm) 8,7 6,3

11) Posibles problemas en el gel de agarosa realizado en el tp: 

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La concentración del gel puede causar muestras incorrectas corriendo demasiado rápido o no en absoluto. Hay que asegurarse de utilizar una concentración correcta y orientada hacia los tamaños generales de la muestra que se está tratando de medir. La adecuada preparación del gel es importante. Por lo tanto, hay que asegurarse de que el gel no tenga cortes ni burbujas antes de cargas las muestras, ya que esto puede afectar a los resultados En el momento de cargar las muestras en las calles/Wells, hay que tener cuidado de no colocar la muestra fuera de este ya que puede producir impurezas. Cargar las calles con demasiada o poca muestra podría causar bandas más grandes o pequeñas de lo que realmente son, o incluso ser imposible de ver.

12) Las bandas correspondientes a los ácidos nucleicos de las muestras en el gel son detectadas por un marcador fluorescente, en este caso bromuro de etidio, que al ser expuesta bajo la luz UV a través de un transiluminador ultravioleta se comprueba la presencia de estas. Cuidados que se deben tener en cuenta durante la revelación del gel: El uso adecuado de guantes durante el manejo del bromuro de etidio es sumamamente importante dado que este se comporta como un agente mutágeno y cancerígeno. Realizar la visualización del ADN con gafas, guantes y mantener los antebrazos cubiertos adecuadamente, ya que la radiación UV utilizada, puede provocar importantes lesiones en la piel y en los ojos....