TP1 sur les sucres et protéines du lait PDF

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TP sur les sucres et protéines du lait. (Recopier bêtement ne vous aidera pas à comprendre)...

Description

L1 Sciences de la Vie – Semestre 2 UE Molécules du vivant 2

Compte rendu de Travaux Pratiques de Biochimie TP1 Etude des constituants du lait : Dosage des protéines et test du pouvoir réducteur des oses du lait (Sur 14 points) Série :

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1- But du TP (1 point) Étudier le dosage des protéines du lait et caractériser le pouvoir réducteur des glucides du lait. 2- Principe du TP (4 points) Séparer les protéines des glucides par précipitation avec un acide. Faire réagir les protéines du lait avec le réactif de Gornall pour réaliser des mesures d'absorbance et déterminer les concentrations de protéines dans le lait avec une courbe étalon. Faire réagir les sucres du lait avec la liqueur de Fehling afin de tester leur pouvoir réducteur.

3- A quoi sert la courbe d’étalonnage construite avec les tubes 1 à 5 du protocole ? (0,5 points) Cette courbe d'étalonnage permet de relier concentrations en protéines de lait et valeurs d'absorbance. Ainsi à partir d'une mesure d'absorbance, on peut, par simple lecture graphique, lire la concentration en protéine de lait correspondante.

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L1 Sciences de la Vie – Semestre 2 UE Molécules du vivant 2 Gamme étalon n° des tubes 1 2 3 4 5 Volume de solution mère d’albumine de sérum bovin 2,0 1,5 1,0 0,5 0 -1 à 6 g.L (mL) Eau distillée (mL) 0 0,5 1,0 1,5 2,0 Réactif de Gornall (mL) 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0 Concentration massique en 0 1,5 0,5 1 protéines dans chaque tube 2 -1 (g.L ) 0,308 0,229 0,150 0,092 0 Absorbance à 530 nm

Essais Volume de solution sodique de protéines du lait (mL) Eau distillée (mL) Réactif de Gornall (mL)

6

7

0,8

1,5

1,2 8,0

0,5 8,0

0,6

1,25

0,098 0,194

4- Déterminer la concentration massique en protéines dans le tube 6 et dans le tube 7, et

Afin de déterminer les concentrations massiques en protéines de lait dans les tubes 6 et 7 on réalise une courbe d'étalonnage avec nos données expérimentales. Puis on trace la courbe de tendances. Ensuite par lecture graphique on relie les mesures d'absorbance des tubes 6 et 7 à leur concentration. Ainsi, pour le tube 6 on a A = 0,098 ce qui correspond à une concentration de 0,6 g.L-1. Pour le tube 7, A = 0,194 ce qui correspond à 1,25 g.L-1.

540nm

reporter les dans le tableau. Expliquer la méthode utilisée. (1 point)

5- En déduire la concentration massique en protéines dans l’échantillon initial de lait en tenant compte des dilutions successives. Expliquer votre calcul et comparer votre résultat à la concentration annoncée sur la bouteille de lait. (2 points) Pour chaque tube on a eu 2 dilutions : d'un facteur 5 pour la première (FD1) des deux tubes. Et d'un facteur 12,5 pour la deuxième dilution (FD2) pour le tube 6 et 6,6 (FD2') pour celle du tube 7. Ainsi la concentration initiale en protéines du lait est égale à la moyenne des produits des facteurs de dilution et de la concentration de leur tube correspondant :

C = ((FD1xFD2xC6) + (FD1xFD2'xC7) )/2 C= ((5x12,5x0,6) + (5x6,6x1,25))/2 = 39,4 g.L-1 Ce qui est au dessus de la valeur attendue de 32g.L-1 mais dans la fenêtre entre 20 et 40 g.L-1. Cela s'explique par les manœuvres plus ou moins précise lors du TP.

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L1 Sciences de la Vie – Semestre 2 UE Molécules du vivant 2

6- Synthétiser les résultats observés pour les tests sur les glucides puis conclure sur le pouvoir réducteur de chacun des glucides étudiés. Vous justifierez ces résultats en vous appuyant sur la structure de chacun des oses étudiés. (2 points) Tube H2O : On observe aucun changement de couleur, la solution reste bleu. Il n y a donc pas de contamination par d’éventuels oses réducteurs. Tube saccharose : La solution reste bleue, le saccharose n'a pas réagit avec la liqueur de Fehling. Il n'est donc pas réducteur. En regardant la structure du saccharose on observe que les deux hydroxyles anomériques des monomères le constituant sont liés l'un à l'autre, ils ne peuvent donc pas interagir avec la liqueur de Fehling. Tube glucose : on observe une forte coloration orangée, ce qui s'explique par une réaction avec la liqueur de Fehling. Donc le glucose est réducteur. Il est réducteur car son hydroxyle anomérique est libre. Tube protéines du lait : On observe une coloration orangée plus faible. Donc certains oses du laits sont réducteurs, mais d'autres ne le sont pas, alors la coloration est présente mais moins intense. On peut alors faire l'hypothèse qu'il n y a pas que des monomères de sucres dans le lait. Pour conclure : >Le glucose est réducteur >Le lait contient des oses réducteurs (mais pas uniquement) >Le saccharose n'est pas réducteur.

Pour aller plus loin : 7- Une solution de saccharose est hydrolysée en présence d’acide chlorhydrique 1M (incubation de 30 minutes à 37°C). Ecrire la réaction équilibrée d’hydrolyse du saccharose en utilisant la représentation de Hayworth (1,5 points).

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L1 Sciences de la Vie – Semestre 2 UE Molécules du vivant 2 8- Le pouvoir réducteur du saccharose est testé avant et après hydrolyse. Expliquer les résultats expérimentaux attendus toujours en relation avec la structure des molécules. (2 points) Avant l’hydrolyse la solution est censée rester bleue après réaction avec la liqueur de Fehling, en effet il s'agit d'une solution de saccharose, le saccharose est un dimère où les deux groupements hydroxyles anomériques sont en relation l'un avec l'autre et ne peuvent donc pas intéragir avec la liqueur de Fehling.

Après l'hydrolyse la solution est censée prendre une teinte orangée car il y a séparation du glucose et du fructose qui ont désormais chacun leur hydroxyle anomérique de libre, alors capable d'intéragir avec la liqueur de Fehling.

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