8 Separación de Pigmentos Vegetales por Cromatografía en Columna PDF

Preview

Summary

Reporte Práctica No. 6 Analisis Instrumental QB...

Description

PRÁCTICA No. 8 Separación de Pigmentos Vegetales por Cromatografía en Columna Departamento de fisicoquímica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala, Carrera Química Biológica RESUMEN Durante la práctica se realizo la extraccion y separacion de pigmentos presentes en la muestra vegetal (espinaca), empleando la técnica de cromatografía en columna; se utilizó como fase estacionaria la sílica gel y como fase móvil una mezcla de: hexano, tolueno, acetona, etc. la práctica se llevó a cabo con la finalidad de comprender los fundamentos y procedimientos de dicha técnica y así poder identificar las diferencias cualitativas como polaridad, solubilidad, color y apariencia de los pigmentos obtenidos mediante la separación. Metodología: MATERIALES Y METODOLOGÍA se macero 10 gramos de muestra vegetal Materiales: con 10 ml de metanol, al macerado se le Cristalería: deja reposar por un tiempo y se descarga - probetas de 10,50 ml el exceso de metanol; se le agrega al - beaker de 100, 250 ml residuo de la muestra 3 ml de hexano y se - embudo de vidrio macera dejando reposar por un tiempo y - buretas se le añade 0.5 gramos de sulfato de sodio anhidro. seguidamente se preparó la Instrumentos de laboratorio: columna cromatográfica colocando fibra - papel aluminio de vidrio en la parte inferior y se colocan - marcadores 20 gramos de sílica gel en 100 ml de - fibra de vidrio tolueno/acetona y se introdujo 1 ml de - balanza semi-analitica extracto vegetal. posteriormente se inicia - espátula la elusión utilizando la fase móvil en el - mortero con pistilo siguiente orden; hexano, - pipeta serológica tolueno/acetona, acetona, tolueno/acetona, isooctano/eter/acetona, Reactivos: se deja eluir los pigmentos con la fase - silica gel móvil y se recolecta las fracciones - agua separadas. - hexano - acetona RESULTADOS - sulfato de sodio Cuadro No. 1: Fracciones y pigmentos - tolueno obtenidos durante el proceso - etanol absoluto cromatográfico.

No.

Pigmentación Presentada

Componente presente

1

Verde

Clorofila

2

Amarillo

Carotenoides: Xantofila y bcaroteno

Durante la práctica se utilizó un sistema de fases normal en donde la fase estacionara estaba compuesta por sílica gel la cual funciona como es un adsorbente polar y la fase móvil estuvo compuesta por una serie de solventes apolares para la extracción de pigmentos de una muestra de espinaca

Fuente: Datos experimentales obtenidos en Lab. de Análisis Instrumental, USAC, Zona 12, Guatemala. Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Metodos de Analisis Instrumental, Edificio T-12, USAC Cuadro No. 2 Velocidad relativa de elución de solventes Velocidad

Solvente

15

Hexano (menos polar)

9

Acetona (más polar)

Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Metodos de Analisis Instrumental, Edificio T-12, USAC DISCUSIÓN La cromatografía de columna

es

una

técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una

(Nelson compuesta por mezcla

y

Cox,

2013), está

una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte sólido adsorbente (fase estacionaria: los más utilizados son gel de sílice (SiO2) y alúmina (Al2O3)). La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase móvil) que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna (Harris,

2007).

posee pigmentos que de acuerdo a su estructura poseen diferentes grados de polaridad, siendo esta la clorofila y los carotenoides: b-carotenos y xantofilas (Petiard V, 1987). (Spinacia

oleracea),

la

cual

En la tabla no. 1 se puede observar que la primera extracción presentaba una pigmentación verde (Ver Anexo 1), la cual corresponde a la clorofila de la planta debido a que es el pigmento verde en la mayoría de las plantas que está asociado con la fotosíntesis. Este pigmento absorbe toda la luz de color a excepción de la banda verde, que se refleja para dar a la espinaca el color característico en sus hojas y tallo (ChemicalSafety, S.f). La segunda y última fracción obtenida presentó una pigmentación amarilla, ésta corresponde a los carotenoides presentes en la planta ya que el color de éstos pigmentos, varía desde amarillo pálido, pasando por anaranjado, hasta rojo oscuro, se encuentra directamente relacionado con su estructura: los enlaces dobles carbono-carbono interactúan entre sí en un proceso llamado conjugación (Nelson y Cox, 2013). El orden de elución se debe a que la clorofila es una sustancia formada por moléculas que no se pueden disolver en agua por no presentar ningún radical químico que establezca puentes de hidrógeno con las moléculas de agua del medio, con lo cual la repelen (Ver Anexo 2). Pero sí son solubles en compuestos de

su misma naturaleza química (Nelson y Cox, 2013). Los carotenoides poseen una estructura que está formada por moléculas que se pueden mezclar con las moléculas de agua dado que pueden establecer enlaces de puente de hidrógeno con ellas, al contener grupos radicales con átomos electronegativos. Por lo anterior estos pigmentos no se disolverán bien en disolventes apolares (Nelson y Cox, 2013). CONCLUSIONES ● La primera extracción contenía clorofíla. ● La segunda extracción contenía carotenoídes. ● La clorofila fue más afín a la fase movil por presentar una estructura apolar. ● Los carotenoides fueron más afines a la fase estacionaria por poseer estructuras polares.

Petiard, V. ; Bariaud-Fontanel, A. 1987. El cultivo de células. Mundo Científico 7: 730-736. ANEXOS Anexo 1: Fracciones obtenidas durante la práctica.

Fuente: Imágen obtenida en Laboratorio de Análisis instrumental, USAC. Anexo 2: Estructura de la clorofila

REFERENCIAS Harris, D.C. (2007). Análisis Químico Cuantitativo. México: Editorial Reverté, S.A. Nelson,

D.L. y Cox, M.M. (2013). Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición. España: Ediciones Omega.

ChemicalSafety.(s.f). Cromatografía en Columna. Pigmentos Vegetales. Recuperado de : https://www.chemicalsafetyfa cts.org/es/acetona/

Recuperado de : https://www.emaze.com/@AIRQOQIZ/EST RUCTURA-Y-FUNCIONDE-LA-CLOROFILA...