Separación de Pigmentos Vegetales mediante Cromatografía en columna PDF

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de los pigmentos de una hoja mediante en columna. Universidad de Guanajuato e instrumentales de Pigmentos Vegetales mediante en Stefania OBJETIVO: se utiliza para la de una mezcla formada por dos o compuestos diferentes sean de origen o natural. en es una para separar una mezcla de dos o compuestos ...

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Se p a r a c i ó nd el o sp i g me n t o sd eu n ah o j ame d i a n t ec r o ma t o g r a f í ae nc o l u mn a .

Universidad de Guanajuato Métodos analíticos e instrumentales

“ Se pa r a c i ónd ePi g me n t o sVe ge t a l e sme d i a nt e Cr o ma t o gr a f í ae nc ol u mna ”

Stefania Ramírez

20/04/2016

OBJETIVO:

INTRODUCCIÓN: Cromatografía se utiliza para la separación de una mezcla formada por dos o más compuestos diferentes sean de origen sintético o natural. Cromatografía en columna es una técnica para separar una mezcla de dos o más compuestos de polaridad diferente por distribución del soluto entre dos fases, una estacionaria que corresponde al adsorbente y el otro móvil que es el eluyente. Es una técnica basada en la adsorción y la solubilidad constituyendo ambas un equilibrio. Eluyentes más comunes para cromatografía en capa fina - éter de oetróleo - cloruro de metileno - n-hexano - acetato de etilo

- ciclohexano

- acetona

- tolueno

- iso-propanol

- dietil-éter

- etanol

- f-butil-éter

- cloroformo

- metanol

- ácido acético

Reveladores más comunes para cromatografía en capa fina Las manchas de color son inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: a) Luz UV b) La introducción de la placa en vapores de yodo c) El rocío con una solución de agua/H2SO4 Adsorbentes más comunes para cromatografía en capa fina. a) Gel de sílice (se utiliza en el 80% de las separaciones) b) Oxido de Aluminio c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) d) Poliamidas Para la selección del adsorbente se deben tomar las siguientes consideraciones: a) Polaridad b) Tamaño de partícula c) Diámetro d) Área Superficial

e) Homogeneidad f) Pureza

La clorofila La clorofila es un componente básico de las plantas y algas, dado que es el pigmento verde que interviene en la fotosíntesis. La clorofila natural consta de dos componentes:  

La clorofila a (verde azulada): más habitual ya que las ¾ partes de clorofila verde presentan este tipo. La clorofila b (verde amarillenta que la acompaña en muy pequeña cantidad.

Los otros tipos de clorofila son menos frecuentes, como la clorofila C1 y la C2 que aparecen en las algas rojas y en algunas algas primitivas. La clorofila d es aún más exclusiva apareciendo en las cianobacterias y un alga marina. 

Estructura de la clorofila

La diferencia entre los dos tipos de clorofila es que la clorofila b tiene un grupo formilo (-CHO) en lugar de un grupo metilo de la clorofila en uno de los carbonos del anillo de porfirina.

Un pigmento sustancia que de un resultado de reflejada (no clorofila, el todas las fotosintéticas, longitudes de visible excepto el verde.

es cualquier absorbe luz. El color pigmento es el la longitud de onda absorbida). La pigmento verde de células absorbe todas las onda de la luz

Los pigmentos accesorios actúan como antena, conduciendo la energía que absorben hacia el centro de reacción. Una molécula de clorofila en el centro de reacción puede transferir su excitación como energía útil en reacciones de biosíntesis. Los carotenoides absorben la longitud de onda azul y un poco en el verde, estos pigmentos tienden a ser rojos, amarillos o anaranjados. La clorofila b absorbe en el azul, y en el rojo y anaranjado del espectro (con longitudes de ondas largas y baja energía). La parte media del espectro compuesta por longitudes de onda amarilla y verde es reflejada y el ojo humano la percibe como verde. La distribución de los organismos fotosintéticos en el mar se debe a esto. La longitud de onda corta (más energética) no penetra más allá de 5 metros de profundidad. La habilidad de absorber parte de la energía de longitud de onda larga (menos penetrante) debe haber sido una ventaja para las algas fotosintéticas primitivas, que eran incapaces de encontrarse todo el tiempo en la zona superior (fótica) del mar. Las algas verdes y pardas se instalan en la zona litoral superior, en tanto que en la zona profunda predominan las algas rojas. METODOLOGIA: 1. En un soporte universal colocamos una pipeta de pascal que esta ya estaba adicionada con un filtro en la parte inferior así que ya no fue necesario poner algodón. 2. En ¾ de la pipeta de pascal colocamos gel sílice, compactando. 3. Agregamos agua destilada al gel sílice poco a poco abriendo la llave de la pipeta para que pasara por todo el gel sílice. 4. Cerrando la llave agregamos hasta casi llenar la pipeta de agua destilada.

5. Revolvimos el gel de sílice con el agua destilada hasta que se formara una mezcla homogénea. 6. Agregamos 1ml de la mezcla a separar (alcohol concentrado con plantas) en la parte superior de la pipeta colocándolo cuidadosamente (resbalando por la pared). 7. Abrimos la llave haciendo que pase la mezcla a separar por la fase estacionaria (gel sílice). 8. Agregamos alcohol etílico como disolución para que no se secara el gel sílice de ml en ml. Fueron 41ml lo que se agregaron. 9. En cuanto salía cada fase cambiamos de vaso precipitado así como mediamos su volumen. OBSERVACIONES: Muestra

Columna

Columna c/silica-gel

OPERACIONES Y RESULTADOS: Datos: Longitud de la columna sin agua: 14.5 Longitud de la columna con el agua: 16.5 Volumen total de agua destilada: 24ml Volumen de la primera mancha: 7.2ml Volumen de la segunda mancha: 3.2ml

Volumen de Elución = Todo el etanol agregado = 41 ml

Clorofila a y b

# de platos teóricos (N) =

l ( longitud de lacolumna ) 14.5 cm = =24.14 h .6 cm

* La medida cuantitativa de la eficiencia es el número de platos teóricos n, el cual en términos de tiempos de retención es:

Eficiencia = # de platos teóricos Efciencia =24.14

Tiempo de Retención

∴

24.14= (41ml/Wh) ^2

√24.14 = √(41ml /w h)2 4.913 = 41ml/wh 41ml/4.913 = 8.34

t R=

√ 2

(40.97)2∗24.14 = 14.89s 5.54

Vm (volumen muerto) = Vo – Vfagua destilada = 24ml – 12.1ml = 11.9 ml

Coeficiente de Partición K=

V S 14.5 ml = =1.218 V M 11.9 ml

*Los Rf no son calculables debido a que no se realizó cromatografía en capa fina.

Conclusión: Pudimos separar los pigmentos vegetales mediante la cromatografía en columna. Así como los diferentes parámetros que implica, comprobando las bases teóricas adquiridas anteriormente en clase. El número de platos teóricos demostró que es eficiente la columna.

Bibliografia:...