OBSERVACIÓN DE MITOSIS EN CÉLULAS VEGETALES PDF

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El objeto de la presente práctica es identificar las células que se encuentran en mitosis y las distintas fases de esta mediante la tinción y observación de meristemos de raíz. ...

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OBSERVACIÓN DE MITOSIS EN CÉLULAS VEGETALES GENÉTICA MOLECULAR

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA SAN JOSÉ DE CÚCUTA 2018

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INTRODUCCION La división celular es un proceso por el cual a partir de una célula madre se producen dos células hijas que genética, estructural y fundamentalmente son iguales entre si e iguales a la propia célula madre. Para estudiar los parámetros del ciclo celular se utilizan tejidos en constante renovación (tejidos en proliferación), en los que la duración total del ciclo con determinadas condiciones es constante. En las plantas la mitosis se produce sobre todo en los meristemos, que son los tejidos que permiten el crecimiento de la planta y que se encuentran, entre otros lugares, en los extremos de los tallos y de las raíces. El objeto de la presente práctica es identificar las células que se encuentran en mitosis y las distintas fases de esta mediante la tinción y observación de meristemos de raíz. OBJETIVOS   

Identificar los principales cambios morfológicos que se presentan durante la profase, metafase, anafase, telofase y citocinesis en células meristemáticas de raíces de cebolla. Evaluar la importancia de la división celular en el desarrollo y crecimiento de un organismo. Identificar mediante observación microscópica las diferentes fases de la mitosis en raíz.

MATERIALES            

Raíces de cebolla o frijol Viales Portaobjetos y cubre objetos Papel filtro Hojilla o tijeras Pinzas Agua destilada Colchicina 0,05-0,5% Solución fijadora: Carnoy Solución de hidrolisis Orceina-acetica Aceite de inmersión y papel para lentes

EQUIPOS 

Microscopio

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PROCEDIMIENTO

OBSERVACIÓN DE MITOSIS EN CELULAS VEGETALES

1.PRETRATAMIENTO

1. Usando una pinza de punta bien fina se colectan las raíces aprox 2cm de longitud.

2. FIJACIÓN

1.Se fijan en Etanol 3p Acido acético y se deja a temperatura ambiente por 10 minutos.

2. Se lavan con agua destilada. 3. Se coloca en frascos o viales conteniendo Colchicina durante 30min.

3.HIDRÓLISIS

4. Luego eliminar la solución.

4. COLORACIÓN Y APLASTADO

1. Se colocan las raíces en un portaobjetos.

1. Se colocan las muestras en solución de hidrólisis ácido acético al 45% y ácido clorhídrico a 50°C. 2. En una incubadora liberando la tensión superficial para que por medio del aplastamiento se consiguen laminas muy finas del tejido. 3. Lavar con agua destilada.

2. Se agrega orceína-acética durante 15 minutos. 3. Se procede al aplastamiento o squash de forma suave evitando movimientos del cubre objetos.

5. OBSERVACIÓN EN EL MICROSCOPIO OBJETIVO DE 40X

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RESULTADOS Se observaron al microscopio las diferentes células y las fases de la mitosis mostrando a continuación separadas por sus fases así:

Figura 1. Células en telofase. En la figura 1 se evidencia con círculos células que se encuentran en telofase, los cromosomas alcanzan los polos opuestos y el huso comienza a dispersarse. Luego se forman sendas envolturas nucleares que se vuelven a formar alrededor de los dos conjuntos de cromosomas, que una vez más se vuelven difusos. En cada núcleo reaparecen los nucléolos.

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Figura 2. Células en anafase. Anafase, la etapa más rápida de la mitosis, los centrómeros se separan simultáneamente en todos los pares de cromátidas.

Figura 3. Células en metafase. Los pares de cromátidas se mueven dentro del huso, aparentemente conducidos por las fibras del huso, como si fueran atraídos por un polo y luego por el otro.

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Figura 4. Células en profase. En la profase los centriolos se separan. Entre los pares de centriolos, formándose a medida que estos se separan, están los micros túbulos que se transforman en las fibras polares del huso.

DISCUSIONES En este laboratorio se estudió el ciclo celular, además de esto se explicaron los procesos que tienen lugar en este ciclo; como son la interfase y la mitosis. La interfase se subdivide en tres fases que son: la fase G1, fase S y la fase G2. Y la mitosis donde ocurre cuatro sub etapas que son: profase, metafase, anafase y telofase. Para poder dar como resultado dos células hijas. Para comprobar las fases de la mitosis, se colocó previamente una cebolla en un vaso con agua, luego de dos o tres días la cebolla tenía unas raíces las cuales utilizamos para evidenciar la mitosis. A estas raíces se le hicieron unas preparaciones para su mejor observación al microscopio.

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Al agregar el ácido clorhídrico y se deja actuar para que rompiera el núcleo y aparecieran los cromosomas. La orceina-acetica fija o detiene la mitosis y también colorea las raíces de la cebolla para ser llevadas al microscopio, además, esta misma ablanda los tejidos de las raíces, facilitando el aplastamiento del tejido de las raíces y permite que se disgregue el materia. (López, et al. 1983). En las muestras que realizamos obtuvimos unos resultados de poca calidad y una de las razones que probablemente afectaron nuestros resultados, fue que el colorante que se utilizo pudo estar viejo y no coloreo de la forma esperada a las células, ya que el grupo de la tarde obtuvo resultados similares (poca coloración) incluso habiéndolo dejado más tiempo que nosotros. Por otro lado, no se obtuvo buenas muestras debido a que el tamaño de la muestra de las raíces de la cebolla era más grandes de lo requerido; ya que, según como se indica en la guía de laboratorio de Biología Celular de la Ing. Diana Cárdenas de la universidad Francisco de Paula Santander indica que son 0,5cm de largo para poder encontrar células maduras que apenas estén iniciando su ciclo de división celular. Aunque el corte de la raíz de cebolla captura muchas células en diferentes fases del ciclo celular, hay que tener presente que el ciclo celular es un proceso continuo. Los científicos han dividido el proceso en 5 fases ya mencionadas, cada una caracterizada por importantes eventos, pero estas divisiones son arbitrarias. Por esto, en las observaciones al microscopio, no se logró captar todas las etapas, pero logramos concluir que en nuestra práctica de laboratorio la fase con mayor porcentaje de visualización fue la etapa de la interfase y profase.

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CONCLUSIONES 

De esta práctica se puede concluir que la mayoría de células observadas estaban en interfase y esto concuerda con la teoría debido a que normalmente el 90% de las células se encuentran en esta fase

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Logramos identificar todas las fases a pesar de que la muestra no estaba muy buena y el resultado no fue el esperado.

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También podemos concluir que el éxito de esta práctica depende de la calidad de la muestra, la buena preparación de esta y el colorante a usar....