Coloração de GRAM_ Procedimento Operacional Padrão (POP). PDF

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Objetivo, materiais, métodos, técnicas, características, bactérias positivas e negativas de importância clinica coradas no Gram....

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Disciplina: Estágio supervisionado I.

POP- Procedimento Operacional Padrão

Coloração de Gram → Objetivo: Identificação de bactérias presentes nas amostras biológicas em um curto espaço de tempo. Levando em consideração características tintoriais das bactérias, auxiliando na classificação das bactérias em dois grandes grupos Gram Positivos (roxa) e Gram Negativos (vermelha).

Gram positivas

Gram-negativas

Apresentam uma parede celular rígida e espessa

Parede celular com menos peptideoglicano e uma membrana

constituída basicamente de peptideoglicano, e

externa. O peptideoglicano está ligado à membrana externa,

também apresentam moléculas conhecidas como

formando um espaço entre os dois espaços chamados de

ácido teicoicos, que estão inseridos na camada de

periplasma, que possuem uma alta concentração de enzimas

peptideoglicano, enquanto o ácido lipoteicoico está

digestivas. A membrana externa não fornece seletividade,

ligado à membrana plasmática.

então na parede celular existem proteínas especializadas, as porinas, em controlar o fluxo de moléculas para o metabolismo bacteriano. Além disso, na membrana externa das bactérias Gram Negativas encontramos o lipossacarídeo (LPS), uma estrutura que auxilia no desenvolvimento da infecção com a liberação de endotoxinas.

Qual bactéria é mais resistente Gram positivo ou Gram negativo? As bactérias Gram-negativas apresentam uma resistência maior, devido à presença de uma cápsula protetora, auxiliando contra o processo de fagocitose pelos glóbulos brancos. Esse tipo de bactéria também possui uma membrana externa que libera endotoxinas responsáveis pelo agravamento dos sintomas.

→ Materiais: Lamina; Solução salina; Alça bacteriológica; Bico de Bunsen; Colônia de bactérias; Cristal Violeta, Lugol, Álcool-acetona, Fucsina; Papel filtro; Microscópico. → Técnicas Para realizar a confecção de uma lâmina de acordo com a metodologia de Gram é necessário ter os seguintes reagentes: violeta de genciana, lugol, álcool etílico, fucsina ou safranina. 1) Confeccione o esfregaço com o material biológico. 2) Cubra o esfregaço com violeta de metila e deixe o corante agir sobre a lâmina, durante por 60 segundos. 3) Escorra o corante e em seguida lave em um filete de água corrente. Logo após cubra a lâmina com lugol e deixe agir por 60 segundos. 4) Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente. 5) Adicione à lâmina álcool etílico (99,5º GL), até que saia todo o corante 6) Lave a lâmina em um filete de água corrente. 7) Coloque sob a lâmina fucsina básica 0,1 a 0,2% ou (safranina) até cobrir toda a lâmina, deixe agir por 30 segundos.

8) Lave a lâmina sob um filete de água corrente. 9) Deixe a lâmina secar ou seque delicadamente com o auxílio do papel filtro. 10) Coloque uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço. 11) Leia em objetiva de imersão (100 X).

Bacterias Gram-positivos de importância médica

Clostridium tetani

Staphylococcus aureus

– responsável pelo desenvolvimento do tétano.

– responsável pelo desenvolvimento de infecções nas vias respiratórias.

Streptococcus pneumoniae – responsável pelo desenvolvimento de pneumonia, desencadeando uma infecção pulmonar.

Bacterias Gram-negativas de importância médica

Pseudomonas aeruginosa

Escherichia coli – responsável por infecções urinárias e gastroenterites.

– responsável por infecções urinárias e respiratórias.

Vibrio cholerae – responsável pelo desenvolvimento da cólera.

Haemophilus influenzae – responsável por infecções respiratórias.

Helicobacter pylori – responsável pelo desenvolvimento de infecções gastrointestinais.

A coloração de Gram possui restrições a algumas espécies de bactérias, como é o caso do Treponema pallidum, agente etiológico da sífilis, devido ser é uma bactéria muito fina, dificulta a sua coloração. Vale ressalta as bactérias que não possuem paredes celulares como é dos gêneros Chlamydia, Chlamydophilae mycoplasma. Com relação ao gênero Mycoplasma vale destacar, o seu principal representante que é Mycobacterium tuberculosis, causador da Tuberculose, pois devem ser coradas por soluções contendo ácido, dessa forma utiliza-se o método de Ziehl-Neelsen para corar esse tipo de bactéria....