Determinação da curva padrão de corante PDF

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Determinação de curva padrão ou curva de calibração do corante alaranjado de metila....

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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA PARA ALUNOS NOME DO PROFESSOR(A): Analía Verónica Gómez DISCIPLINA: Bioquímica dos Alimentos

TURMA: EAL5 Aluno: Emily da Silva Vaculik Aluno: Fernanda Alves de Souza Aluno: Gabrielle Nycolle G S de Oliveira Aluno: Geovana Façanha da Silva Aluno: Giovanna Raminelli Aluno: Noemi Brito dos Santos

RA: 052180002 RA:052180033 RA: 052180010 RA: 052180037 RA: 052180039 RA: 052180027

TÍTULO:

Determinação da curva padrão de corante

OBJETIVO:

Construir a curva padrão de corante, utilizando os dados de absorbância obtida em espectrofotômetro.

MATERIAIS (MATÉRIAS PRIMAS, REAGENTES, VIDRARIAS E EQUIPAMENTOS):

•

Espectrofotômetro

•

Balança semi analítica

•

Cubetas

•

Balão volumétrico

•

Béquer

•

Pipeta

•

Corante

PROCEDIMENTO:

Ligar o espectrofotômetro com 15 min de antecedência para que seja estabilizado. Calibrar o equipamento de acordo com o procedimento descrito no manual. Preparar 250 mL de uma solução padrão de corante com concentração conhecida e realizar pelo menos 4 diluições. Fazer a leitura no espectrofotômetro no comprimento de onda de absorção máxima do corante. Resultados e discussão Construir uma curva padrão a partir dos resultados de absorbância em função da concentração do corante. Explicar a importância de se obter curvas de calibração e quais os cuidados que devem ser tomados para que a equação obtida possa ser utilizada na quantificação do composto de interesse.

BIBLIOGRAFIA:

MARZZOCO, A. ; TORRES, B. B. Bioquímica Básica. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara/Koogan, 2016. CISTERNAS, J.R. & VARGAS, J. M. O. Fundamentos de bioquímica experimental. 2 ed. São Paulo: Atheneu, 1999. COELHO, Maria Alice Zarur; SALGADO, Andrea Medeiros; RIBEIRO, Bernardo Dias. Tecnologia enzimática. Rio de Janeiro: FAPERJ, 2008. BRADCHT, T.; ISHII-IWAMOTO, E.L. Métodos de Laboratório em Bioquímica. São Paulo: Manole, 2003

Cálculos das concentrações dos padrões de alaranjado de metila: 𝑽𝟏 𝒙 𝑪𝟏 = 𝑽𝟐 𝒙 𝑪𝟐

C1: V1= 2 ml; C0= 0,2%; V2= 200ml 2 × 0,2% = 200 × C1 C1 = 0,002% = 20 mg/L = 0,02 g/L C1 = 20 ml/L ou 0,002% P1: P1 = C2 V1= 10 ml; C1= 0,002%; V2= 100ml 10 × 0,002% = 100 × C2 C2 = 0,0002% = 2 mg/L = 0,002 g/L C2 = 0,002 g/L ÷ 327,33 g/mol = 6,11×10^-6 P1 = 0,00000611 mol/L

P2: P2 = C2 V1= 10 ml; C1= 0,002%; V2= 50ml 10 × 0,002 = 50 × C2 C2 = 0,0004% = 4 mg/L = 0,004 g/L C2 = 0,004 g/L ÷ 327,33 g/mol = 1,22×10^--5 P2 = 0,0000122 mol/L P3: P3 = C2 V1= 30 ml; C1= 0,002%; V2= 100ml 30 × 0,002 = 100 × C2 C2 = 0,0006% = 6 mg/L = 0,006 g/L C2 = 0,006 g/L ÷ 327,33 g/mol = 1,83×10^-5 P3 = 0,0000183 mol/L

P4: P4 = C2 V1= 40 ml; C1= 0,002%; V2= 100ml 40 × 0,002 = 100 × C2 C2 = 0,0008% = 8 mg/L = 0,008 g/L C2 = 0,008 g/L ÷ 327,33 g/mol = 2,444×10^--5 P4 = 0,0000244 mol/L

P5: P5 = C2 V1= 25 ml; C1= 0,002; V2= 50ml 25 × 0,002 = 50 × C2 C2 = 0,001% = 10 mg/L = 0,01 g/L C2 = 0,01 g/L ÷ 327,33 g/mol = 3,05×10^-5 P5 = 0,0000305 mol/L

P6: P6 = C2 V1= 30 ml; C1= 0,002; V2= 50 ml 30 × 0,002 = 50 × C2 C2 = 0,0012% = 12 mg/L = 0,012 g/L C2 = 0,012 g/L ÷ 327,33 g/mol = 3,67×10^-5 P6 = 0,0000367 mol/L

concentrações (mg/L) 2

absorbância

4

0,293

Curva padrão de corantes

0,147 0,437

8

0,577

10

0,719

12

0,854

X

0,603

Absorbância

6

1 y = 0,0708x + 0,0092 R² = 0,9999

0,8 0,6 0,4 0,2 0 0

2

4

6

8

10

12

14

Concentrações (mg/L)

Curva padrão de corantes

Concentrações (mol/L)

absorbância

0,00000611

0,147

0,0000122

0,293

0,0000183

0,437

0,0000244

0,577

0,0000305

0,719

0,2

0,0000367

0,854

0

X

0,603

1 y = 23149x + 0,0098 R² = 0,9998

Absorbância

0,8 0,6 0,4

0

0,00001

0,00002

0,00003

0,00004

Concentrações (mol/L)

Para descobrir O valor da concentração referente a 0,603 de absorbância podemos fazer uma simples interpolação entre os valores mais próximos ou utilizar a equação que o gráfico nos forneceu. •

Método da interpolação:

•

Método usando a equação do gráfico:

Notamos que ambos os valores deram praticamente o mesmo, a pequena diferença entre eles se dá pelo fato de a equação ser algo estimado a partir da equação da reta, por ser estimado o seu R²= 99,99% nos informa a confiabilidade de usar esta equação. Assim podemos admitir o valor da concentração sendo igual a 0,0000255 mol/L ou 8,366 mg/L aproximadamente, para um valor de absorbância igual a 0,603.

RESULTADOS E DISCUSSÃO A importância de se obter a curva de calibração é que com ela é possível calcular o valor de concentração de uma amostra incógnita por interpolação. Ela representa a relação gráfica entre os valores de absorbância e concentração do composto de interesse. A curva de calibração pode ser definida como uma relação funcional do sinal observado (y) dada uma certa quantidade de analito (PORTAL ACTION, s.d), ou seja, a partir do gráfico conseguimos analisar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão dos valores de absorbância em concentração. Para isso, é necessário utilizar calibradores de concentrações conhecidas, para que seja possível determinar as absorbâncias dos compostos. Os cuidardes que devermos tomar para realizar a curva de calibração são os mesmo que para a curva de absorção como exemplo: escolher o comprimento de máxima absorbância, ajustar a concentração da amostra para que a absorbância fique na faixa de 0,4< a...