DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE COLESTEROL PDF

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PRACTICA No 6 DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE COLESTEROL Unidad de competencia: Conocer uno de los métodos utilizados para el análisis de colesterol. Determinar los valores normales y anormales en una muestra tomada en el laboratorio. Introducción: Las concentraciones séricas de colesterol permanecen ...

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PRACTICA No 6 DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE COLESTEROL Unidad de competencia: Conocer uno de los métodos utilizados para el análisis de colesterol. Determinar los valores normales y anormales en una muestra tomada en el laboratorio. Introducción: Las concentraciones séricas de colesterol permanecen en forma notablemente constante de un día a otro en una persona sana, pero tiende a aumentar con la edad y cambia con las poblaciones además de que hay variación amplia entre individuos. La mayor parte de colesterol corporal es producido por síntesis, alrededor de 1 g/ día. Sólo cerca de un tercio de esa cantidad es proporcionada por los alimentos. Aunque hay una proporción inversa de la síntesis a la ingestión oral, la producción endógena no es suprimida del todo por el consumo, ya que sólo se deprime la síntesis hepática. Ningún nivel sérico de colesterol ha sido determinado como valor anormal crítico, sin embargo, en individuos mayores de 30 años, una concentración de colesterol elevada sigue siendo uno de los mejores indicadores de las poblaciones en riesgo para el desarrollo de cardiopatía isquémica (Harvey y colaboradores, 1991). El colesterol es un constituyente primario de las lipoproteínas de baja densidad (LDL, del inglés Low-Density Lipoproteins), pero puede encontrarse también en las lipoproteínas de alta densidad (HDL, High-Density Lipoproteins) y en las de muy baja densidad (VLDL, Very-Low Density Lipoproteins). La medición de colesterol sérico solo tiene valor limitado. Sin embargo, cuando se considera junto con mediciones del complejo lipoproteínas de alta densidadcolesterol (HDL-c), es posible determinar el riesgo de coronariopatía (CRP). Este riesgo aumenta 25 % con cada 5 mg/100 ml que decrece HDL-c debajo de la media. Los riesgos pueden calcularse usando la proporción de HDL- C a LDL-c o al colesterol total. Existe una relación inversa entre HDL-c y la incidencia y prevalencia de CRP. Otro cálculo del riesgo puede hacerse calculando la proporción de HDL-c a LDL-c o al colesterol total. El colesterol de los alimentos se absorbe con facilidad. Los vegetales no contienen colesterol pero poseen otros esteroles, mal absorbidos por el cuerpo, los cuales inhiben l absorción del primero cuando se administran en cantidades abundantes- una base para incrementar los regímenes dietéticos de grasas no saturadas en el tratamiento de hipercolesterolemia ( Howard y Herbold, 1982).

El colesterol y todos los lípidos son digeridos en el duodeno. Después de emulsificación biliar, el colesterol difunde a la sangre y a la linfa. Sólo el hígado se encarga de retirar al colesterol de la circulación. Es secretado directamente en la bilis y tiene una ligera utilización a ácidos biliares. La mayor parte del colesterol de la bilis se reabsorbe del intestino, pero, en las heces se excreta una cantidad pequeña, la cual constituye alrededor de la mitad de todo el colesterol excretado del cuerpo. El colesterol es secretado del hígado a la sangre y a la bilis, incluyendo los ácidos biliares, y el primer paso en la síntesis de esteroides a partir del colesterol tiene lugar dentro del hígado. Alrededor de tres cuartas partes del colesterol esterificado por el hígado es transportado a los tejidos corporales donde penetra a las células y es usado. En la corteza suprarrenal, el colesterol actúa como un precursor para la pregnenolona, que a su vez es precursora de progesterona, testosterona, estrógeno, aldosterona y cortisol. En la piel, el colesterol es precursor de la vitamina D que es activada por la aplicación de la luz ultravioleta. Material:         

3 Tubos de ensayo. 2 pipetas de 1 .0 ml. Una pipeta de 5.0 ml. 1 vaso de precipitado. Termómetro. Suero. Centrífuga. Baño maría. Espectrofotómetro.

Procedimiento: Condiciones del ensayo: 1. Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (500-550) 2. Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz 3. Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC /15-25ºC 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC ó 10 min a temperatura ambiente 5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos. Cálculos: A (Muestra) A (Patrón)

x Conc. Patrón = mg/dL de triglicéridos en la muestra Factor de conversión: mg/dL x 0,0113= mmol/L.

masculino, 17 años, ayuno de 12 horas, peso de 68 kg. 0.382

X 200= 125.8 mg/dL

0.607 Valores de referencia  

Hombres: 40 – 160 mg/dL Mujeres: 35 – 135 mg/dL

Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

Imágenes tomadas sobre la práctica

Actividades:

1. ¿Cuándo se encuentran disminuidas las concentraciones séricas de colesterol? Cuando el organismo no produce suficiente HDL 2. Las concentraciones séricas de colesterol aumentan en: La elevación del nivel de colesterol en la sangre puede ser resultado de diferentes factores. Algunos se atribuyen a condiciones ambientales y son modificables (como el caso de la dieta) y otros se deben a la naturaleza genética de la persona, lo cual no puede modificarse, aunque sus efectos sí sean remediables. Cuando una persona tiene el colesterol alto, lo primero que hace el médico es tratar de definir si las causas son modificables. Causas no modificables La influencia genética que determina la elevación del colesterol por defectos en los receptores de LDL puede ser de dos tipos: cuando está condicionada por genes que la persona haya recibido de sólo uno de sus padres o cuando ambos progenitores le hayan transmitido genes a la vez. Desde luego que es más grave que corra esto último, pero también es mucho menos frecuente. La probabilidad de que una persona pertenezca a este grupo es de una en un millón; en cambio, la probabilidad de que una persona haya heredado de uno solo de sus padres genes defectuosos que afectan a su colesterol es de una en quinientas. Los hombres afectados por esta última

situación genérica a veces desarrollan enfermedad coronaria entre los 30 y 50 años de edad; las mujeres entre los 50 y 60 años.

Bibliografía Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio clínico y pruebas de diagnóstico. Editorial Manual Moderno. Manual departamental. Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de medicina UNAM. Editorial Mc.Graw Hill Montgomery R. Bioquímica Casos y Texto. Quinta edición. Editorial Mosby Year Book Wolfe publishing....