Emolisi e sensibilità a bacitracina - optochina PDF

Preview

Summary

Download Emolisi e sensibilità a bacitracina - optochina PDF

Description

Determinazione dell’attività emolitica Il tipo di emolisi prodotto su agar sangue è un carattere utile per effettuare una prima identificazione degli streptococchi. Nel valutare l’emolisi è bene sapere che vi possono essere delle variazioni nelle reazioni emolitiche (particolarmente evidenti con gli enterococchi) a seconda della specie animale da cui è stato ottenuto il sangue e del tipo di terreno base usato per la preparazione dell’agar sangue. Il terreno più comunemente impiegato è il Trypticase Soy Agar contenente il 5% di sangue di montone (o cavallo). Si possono distinguere due tipi di emolisi:  e .  emolisi: si intende una emolisi incompleta in cui i globuli rossi che circondano le colonie sono danneggiati solo parzialmente. Il terreno intorno alle colonie assume un colorito verde dovuto all’ossidazione dei derivati emoglobinici che si liberano dalle emazie non completamente lisate. All’esame microscopico nelle zone di -emolisi le membrane degli eritrociti hanno ancora contorni definiti. -emolisi: intorno alle colonie si osserva una zona di trasparenza dell’agar sangue dovuta all’emolisi completa dei globuli rossi. All’esame microscopico nelle zone di  emolisi non sono evidenziabili eritrociti. Sensibilità all’optochina e alla bacitracina L’optochina ha un’azione detergente e a basse concentrazioni ( 5g/ml) inibisce selettivamente la crescita di Streptococcus pneumoniae. L’optochina può inibire altri streptococchi -emolitici, ma a concentrazioni più elevate. Per effettuare la prova vengono utilizzati dischetti imbevuti di optochina che vengono appoggiati sulla superficie delle piastre di agar precedentemente inoculate con il ceppo da saggiare. I ceppi di S. pneumoniae intorno al dischetto vanno incontro a lisi e si osserva così un’area di inibizione della crescita. L’uso di un dischetto contnente basse concentrazioni di bacitracina (0,02-0,04 unità) è il metodo più comunemente impiegato per l’identificazione preliminare degli streptococchi -emolitici di gruppo A (S. pyogenes). Come per il test precedente si tratta di deporre un dischetto di bacitracina sulla superficie di una piastra inoculata. L’alone di inibizione della crescita intorno al dischetto indica la sensibilità del ceppo alla bacitracina. Poiché una certa percentuale di streptococchi -emolitici sensibili alla bacitracina non appartengono al gruppo A, questa prova è utile per uno screening iniziale ma per un’identificazione precisa sono necessarie ulteriori prove (es. test di agglutinazione al lattice). Anche alcuni streptococchi -emolitici sono sensibili alla bacitracina ma in questo caso il tipo di emolisi prodotta dal ceppo isolato è sufficiente per escludere il ceppo in questione dall’appartenenza al gruppo A.

1

SENSIBILIT SENSIBILITA A’ ALL ALL’OPTOC ’OPTOC ’OPTOCHINA HINA E BAC BACITRACINA ITRACINA pneumoniae oniae e S. py pyogenes ogenes ) (Ident (Identificazione ificazione S. pneum Seminare ad isolamento su una piastra di agar sangue ciascuno dei due ceppi emolitici forniti ( e ). Sterilizzare alla fiamma le pinze e farle raffreddare appoggiandole sulla superficie di una piastra non inoculata Con le pinze, deporre il dischetto di optochina (ceppo -emolitico) o di bacitracina (ceppo -emolitico) al centro del primo passaggio La presenza di un alone di inibizione attorno al dischetto di optochina identifica il ceppo come S. pneumoniae; viceversa la presenza di un alone di inibizione attorno al dischetto di bacitracina identifica il ceppo come S. pyogenes .

2...