Escala de Mc Farland - Nota: 10 PDF

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escala de McFarland...

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UTI LID AD L a final idad

ESCA

Microbiología farmacéutica

Farmacia Y Bioquímica

PRACTICA N° 09 ESCALA DE MC FARLAND OBJETIVOS 

Realizar comparaciones con cultivos inoculados con microorganismos



Calcular a partir de un método indirecto el número de bacterias presentes en un caldo de cultivo

FUNDAMENTO TEÓRICO La finalidad, es establecer una relación entre una precipitación química y una suspensión bacteriana. Creamos 10 estándares (en la tabla aparece la composición de estos) y por espectrofotometría, creamos una recta patrón, de forma que vamos a poder detectar la concentración de nuestras diluciones bacterianas (de manera aproximada, ya que depende de factores como el tamaño de la bacteria, la formación de agregados,...). La escala se basa en la capacidad de precipitación del cloruro de bario en presencia de ácido sulfúrico Se trata de un recuento indirecto de bacterias. Se compara la turbidez de las muestras con los tubos de la escala McFarland PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO Los estándares originales fueron hechos con cantidades específicas mezcladas de cloruro de bario y ácido sulfúrico. La mezcla de ambos componentes forma un precipitado de sulfato de bario el cual causa una turbidez en la solución. Estos estándares son comparados visualmente con una suspensión de bacterias en solución salina o caldo nutritivo. Si la suspensión bacteriana es más turbia, se puede diluir con más diluyente (solución salina o caldo nutritivo). Si la suspensión no tiene la suficiente turbidez, puede adicionarse más cantidad de colonias. El patrón de McFarland más utilizado es al 0.5 y corresponde aproximadamente a una suspensión homogénea de 1.5 x 108 células bacterianas por ml.

Q.F Giancarlo Gutierrez Chavez

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Microbiología farmacéutica

Farmacia Y Bioquímica

PARTE PRÁCTICA MATERIALES:            

Tubos de ensayo Matraz Placa Petri Papel kraft Algodón Mechero Asa de siembra Autoclave Agua de peptona Muestras Celdas de cuarzo Gradilla

REACTIVOS  

BaCl2 H2SO4

EQUIPOS 

Espectrofotómetro

PREPARACIÓN Preparación del estándar de turbidez. a. Agregar 0,5 ml de una solución de BaCl2 0,048 M (BaCl222H2O al 1,175% P/V) a 99,5 mL de una solución de H2SO4 0,18 M (0,36 N) (1% V/V) en constante movimiento para mantener la suspensión. b. Verificar la densidad correcta del estándar usando un fotocolorímetro ó espectrofotómetro, cuya absorbancia a 625 (560) nm es 0,08 a 0,10 para el estándar 0,5 de Mc. Farland. c. Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapón de jebe, similares a los que se usarán para preparar el inóculo. d. Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura ambiente y anotar la fecha de preparación. e. Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estándar de preferencia, en un agitador mecánico. Q.F Giancarlo Gutierrez Chavez

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Farmacia Y Bioquímica

f. Verificar mensualmente la densidad de los estándares de sulfato de bario, y reemplazarlo cuando sea necesario. g. Preparar una secuencia de tubos y leer las absorbancias respectivas

RESULTADOS, DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES CUESTIONARIO: 

¿Es posible realizar una regresión lineal con los datos obtenidos?



De la pregunta anterior, ¿de ser factible cual es el propósito de realizar dicha operación?



¿Se puede trabajar con un densitómetro, sí o no, porque?



¿Cuánto tiempo de vigencia tiene esta escala y porque?



¿Por qué es necesario contrastar estos resultados de acuerdo a la norma CLSI?



Aplica para todo tipo de microorganismos?



Consultar métodos de medida de crecimiento: Citometría de flujo, espectrofotometría (como funciona un espectrofotómetro), recuento en placa, NMP, filtración por membrana, luminiscencia, impedancia eléctrica



Ventajas y desventajas de la escala de Mc Farland

Q.F Giancarlo Gutierrez Chavez

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