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BIOLOGÍA-PRÁCTICA FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

Semestre Académico: Ciclo 2020 - II Informe 10: "Extracción de ADN"

Integrantes 2020154549

CHÁVEZ LLATAS WENDI DE JESÚS

2020131545

DIAZ SILVA ALISON LUCIA

2020131571

ESPINOZA CAMPOS JORGE LUIS

2019205331

GAVIDIA DIAZ ZULY KEILY

2020131632

LLATAS CAMPOS LUIS ANDRES

2020131718

MONTENEGRO ROMERO MARIA FERNANDA

2020154778

MUGUERZA MORALES CARLA NICOLE

2020154792

OLORTE NECIOSUP CAMILA VICTORIA

Docente DRA. LOAYZA ESTRADA, CAROLINA SUSANA

GRUPO N°5 PIMENTEL, PERÚ

2020

I. El

INTRODUCCIÓN ADN

químico

es

el

nombre

la

información

genética en todos los seres vivos. De esta manera, todo organismo

vivo

está

formado por la ampliamente conocida molécula de ADN. Como

sabemos,

todos

procedemos de una única célula

ancestral

llamada

LUCA por lo que todos los seres vivos compartimos incluso más de lo que podríamos llegar a pensar. Algunos conceptos de bioquímica básica respecto a este tópico son la replicación del ADN, la transcripción, traducción, el metabolismo del ADN donde encontramos a la recombinación y la reparación, el metabolismo de la célula como el anabolismo y el catabolismo y la regulación del ciclo celular. La molécula de la herencia fue por primera vez aislada por el biólogo suizo llamado Friedrich Miescher en el año 1869. Luego en los años 20 Phoebe Levene dentro de sus estudios de estructura y función de ácidos nucleicos, determinó la existencia de ADN y ARN. Asimismo, identificó que el ADN está formado por 4 bases nitrogenada que son timina, citosina, guanina y adenina, un azúcar o desoxirribosa y un grupo fosfato llamando a la unidad básica del ADN como nucleótido. Años más tarde en 1928, los hallazgos de Avery, experimentos de Hersey-Chase se especificó que el ADN es el encargado de la herencia. Un año después, Rosalind Franklin y Maurice Wilkins, Francis Crick y James Watson dieron a conocer a través de estudios de difracción de rayos X, la estructura molecular doble hélice del ADN. Actualmente estos avances continúan a pasos gigante con proyecciones a beneficio de toda la humanidad. Para poder estudiar el ADN de manera minuciosa es necesario un conjunto de instrumentos de laboratorio complejos. Por esta razón, a través de la práctica realizada en este informe queremos transmitir un acercamiento simple y sencillo a la técnica de extracción de ADN casero que se puede realizar en cualquier hogar con materiales que usamos en nuestro día a día.

II.

OBJETIVOS DE APRENDIZAJE 1. Utilizar una técnica sencilla para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar. 2. A partir de la longitud enorme de las fibras también confirmar que en el núcleo el ADN se encuentra replegado. 3. Comprobar la movilidad del ADN en un gel de agarosa 4. Analizar la utilidad de esta técnica en ensayos de biología molecular aplicada

III.

CUESTIONARIO

1. Dibuje sus resultados de la extracción de ADN. Para el experimento de la extracción del ADN necesitamos lavavajillas normal y no antibacteriano, agua, sal y alcohol. El procedimiento consistió de los siguientes pasos: a) En primer lugar, para extraer el ADN se colocó una cucharada de agua en un vaso. b) Después, hicimos gárgaras durante medio minuto y luego lo arrojamos al agua. c) Luego, agregamos una cucharada de lavavajillas y tres de agua en el vaso. d) Procedimos a revolver la mezcla. e) De esta manera, tuvimos listos los tres preparados y colocamos una cucharada de cada uno en un vaso. f) Procedimos a la parte más delicada del experimento que fue echar el alcohol de manera lenta y sobre el borde del vaso. g) Es así como el alcohol queda en la parte superior dejando una capa semi transparente y ahí observamos diminutas burbujas e hilitos blancos, eso representaba nuestro ADN. Surgieron las siguientes observaciones: a) Luego de observar las hebras blanquecinas, confirmamos que representaban el ADN. b) A nivel grupal denotamos que como el ADN no es soluble en alcohol, este forma un sólido en la interfase de la capa de alcohol y la mezcla de agua con sal. Es ahí, donde la mayor parte de las partes de las células de las mejillas fueron vistas disueltas en el agua con sal y las

cadenas blancas forman parte de las miles de moléculas de ADN que están unidas unas con las otras constituyendo grumos. c) Asimismo, investigamos que, en la boca, además de encontrarse nuestras células, están presente las bacterias por lo que aislamos el ADN de las células y bacterias.

Se presenta la fotografía de un gel de agarosa con muestras de ADN. En el gel aparecen 3 carriles o calles, cada uno con una muestra distinta (M, 1 y 2). Los pocillos son hechos en el gel para introducir ahí la muestra de ADN.

a) ¿Qué hay en el primer carril? En el primer carril encontramos que la banda que se encuentra localizada en la parte del medio, tiene un aspecto más grueso que la que se encuentra en los

extremos, la explicación de esto es porque existe moléculas de ADN que a pesar de que tiene un mismo peso molecular a las otras, presenta una conformación estructural distinta. Es importante conocer que, en la electroforesis, los plásmidos migran de forma no uniforme y posteriormente se dispersan en la matriz de agarosa con la finalidad de dar impresión de modo a que tenga apariencia de una molécula con un diferente peso molecular. La banda que representa el fragmento más largo será la más cercana a la parte superior del gel. Esta banda se encuentra en el carril 1. b) En la muestra 1, ¿qué tamaño aproximado tienen las bandas de ADN? En la muestra 1 encontramos las siguientes bandas con sus respectivas medidas: Banda 1: 6,6 kpb. Banda 2: Su valor oscila entre 6,6 y 6,5 kpb. Banda 3: Su valor oscila entre 4,4 y 4,2 kpb. ¿Por qué aparece RNA en algunas muestras y por qué aparece tan abajo, comparado al ADN? Es importante conocer que el objetivo del presente estudio fue la obtención de ADN en forma purificada. No solo encontraremos ADN sino también habrá presencias de otras sustancias. La aparición del ARN y la cantidad tan baja en que aparece, se debe a presencia del etanol, el cual se encarga no solo de precipitar al ADN, sino también que precipita al ARN. Esto se debe a que son polímeros similares, cuando sucede aquello se coloca un ARNasa, una enzima que rompa al ARN con la finalidad de dejar pasar únicamente al ADN. La enzima de ARN sufre una inactivación por el calor y después se suspende el ADN por medio de agua con extrema pureza, todo esto con la finalidad de poder ser mejor manipulado. Para finalizar, se va utilizar un espectrofotómetro con el objetivo de conocer la cantidad tanto de ADN o ARN en nuestra muestra biológica. c) ¿Qué significado tiene que algunas bandas sean más gruesas que otras? Las proteínas forman bandas, para esto se toma en cuenta el tamaño. si se corre una muestra con proteínas de tamaño conocido se puede determinar el tamaño de la proteína, la cual es estudiada por la distancia recorrida en el gel. Las

proteínas de mayor t amaño se localizan en la parte superior, las de menor tamaño en la parte inferior y por ultimo las de tamaño medio se localizarán entre las demás. El groso de la banda dependerá de la cantidad de proteína que se haya sembrado, esto quiere decir que cuanto mayor sea la cantidad de proteínas lógicamente más gruesa será la banda.

d) ¿Qué hubiera esperado encontrar si corría un gel con su ADN recién extraído? Dibuje. Nosotros

como

grupo

pensamos

que

encontraríamos fragmentos cortos de ADN que viajan de una forma muy rápida a través de los poros de la matriz del gel a diferencia de los fragmentos más grandes. También se podría observar después del recorrido del gel, que los fragmentos más cortos de ADN se van a encontrar más cerca del extremo positivo del gel a diferencia de los más largos que se encontraran

cerca

de

los

pozos.

Los

fragmentos de ADN muy pequeños podrían correr de tal modo que pueden llegar a salirse del gel, esto se daría si lo dejamos correr por demasiado tiempo. IV. •

CONCLUSIONES En la extracción del ADN del tejido animal recalcamos que las fibrillas de su ADN empezaron a salir de un color blanco precipitado por sobre la mezcla heterogénea y para conservarlo puede dejarse secar en un papel filtro.

•

Concluimos que el ADN se encuentra en el interior del núcleo celular de manera dispersa, replegado y unido a proteínas constituyendo la denominada cromatina.

•

Determinamos que el ADN se moviliza en un gel de agarosa a una velocidad que es dependiendo del tamaño de dicho gel. Es decir, a mayor fragmento de ADN el movimiento será más retardado en el gel.

•

La extracción del ADN enfocado en el impacto de biología molecular ayuda al dinamismo en los laboratorios clínicos con el diagnóstico molecular.

V.

BIBLIOGRAFÍA

(1) Vidal A. Manual de procedimientos de electroforesis para proteínas y ADN, Instituto Nacional de Salud[internet]. 2003 Lima [Citado 3 diciembre 2020].

Disponible

en:

https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLICA/NOR_TEC/38.pdf (2) Checa A. Extracción de ADN, Conogasi [internet]. 2018 [Citado 3 diciembre 2020]. Disponible en: http://conogasi.org/articulos/extraccionde-adn-2/ (3) Ministerio de Educación. Separación de ácidos nucleicos y proteínas. Electroforesis en gel. Para Educar [internet]. 2020 [Citado 3 diciembre 2020].

Disponible

en:

http://www.aportes.educ.ar/sitios/aportes/recurso/index?rec_id=107598& nucleo=biologia_nucleo_tic (4) Electroforesis en gel. Khan Academy [internet] 2018 [Citado 3 diciembre 2020].

Disponible

en:

https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dnasequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-electrophoresis (5) Sabadell M. Extracción de ADN. [video en internet]. YouTube. 2012. [Citado

3

diciembre

2020].

Recuperado

a

partir

de:

https://www.youtube.com/watch?v=oJsOC03th2A&ab_channel=MuyInter esante...