Práctica 1 Micropipetas PDF

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CARRERA DE MEDICINA GUÍA PRÁCTICA DE LABORATORIO BIOLOGÍA CELULAR NOMBRES Y APELLIDOS: PRIMER AÑO PARALELO: 021 FECHA: 09/09/20

PRÁCTICA N°1 TEMA: INSTRUMENTACIÓN Y MANIPULACIÓN: MICROPIPETAS, USOS Y CUIDADOS INTRODUCCIÓN.Las micropipetas son dispositivos que se utilizan para medir o tomar volúmenes pequeños de hasta 1 ml y con gran precisión. El diseño y el funcionamiento de las micropipetas varían según el fabricante (Fig. 1-4), así mismo se destacan porque existen de volumen fijo y variable, las cuales en general disponen de controles mecánicos. También se han introducido recientemente en el mercado micropipetas manuales y electrónicas. Para utilizar una micropipeta se debe seleccionar el volumen que necesita, ya que estas pueden tener rangos variables, por ejemplo, 0,5 – 10ul, 0,2 – 20ul, 10 – 100ul, 20- 200ul, 5 – 50ul, 100 – 1000ul o 200 a 1000 ul. Según las recomendaciones dadas por la OMS, los laboratorios deben llevar a cabo la verificación inicial del equipo volumétrico y luego hacer chequeos regulares, que permitan asegurar que el equipo se desempeña dentro de las especificaciones requeridas. El equipo volumétrico se debe chequear en cuanto a la precisión del volumen entregado en función del volumen definido. El creciente aumento en las enfermedades de alto riesgo (VIH, Hepatitis B, etc) hace necesario que el personal que trabaja en los laboratorios tome muy en serio las recomendaciones dadas en el manual de bioseguridad de la OMS, sobre todo en la descontaminación de dispositivos después de terminado el trabajo para ello se usan micropipetas que puedan ser autoclavadas.

Fig. 1 Micropipeta

monocanal manual

Fig. 2 Pipeta monocanal electrónica E4 XLS+ Gracias a la pipeta monocanal electrónica E4 XLS+ de Rainin, METTLER TOLEDO ha establecido el estándar de simplicidad y rendimiento en el pipeteo electrónico.

Fig. 3 Pipeta multicanal electrónica E4 XLS+ Los modos de multidosificación y mezcla, entre otros, integrados en la pipeta multicanal E4 XLS+ son fáciles de usar y minimizan el tiempo de configuración para trabajar a pleno re...

Fig. 4 Pipeta multicanal electrónica con espaciador ajustable E4 XLS Le permitirán reducir hasta el 98 % de los pasos del proceso de pipeteo cuando transfiera varias muestras entre distintos microtubos, placas u otros recipientes.

Fig. 5 Puntas de micropipetas

OBJETIVOS.   

Reconocer las partes de la micropipeta. Demostrar el correcto uso de la micropipeta. Conocer las diferentes técnicas de pipeteo para diferentes fluidos. Correlacionar el diámetro con el volumen establecido cuando se coloca el colorante en el papel filtro.

FUNDAMENTO.Las micropipetas son dispositivos de extensa utilización en las diferentes áreas de los laboratorios de docencia, clínicos, moleculares e investigación exclusivamente para tomar y transferir cantidades exactas de fluidos. MATERIALES.-

    

Micropipeta 0,5-10 ul Puntas Papel filtro Violeta de genciana o azul de metileno Microtubo 1,7 ml

PROCEDIMIENTO.PARTE A: PARTES, TÉCNICA, CUIDADO Y MANTENIMIENTO DE UNA MICROPIPETA.

Partes de una micropipeta de rango variable Ej: 20 ul a 200 ul

1. EMBOLO 2. EYECTOR 3. AJUSTE DEL VOLUMEN 4. VENTANA DEL VOLUMEN

Técnica de pipeteo para líquidos: a. Se presiona el botón superior (pulsador) suavemente hasta el primer tope. b. Se sumerge la punta, en la solución que se necesita pipetear estando seguros que la punta este bien colocada y que no haya ningún tipo de residuos entre la punta y el cuerpo de la pipeta. c. Mantenga la pipeta verticalmente mientras toma la solución.

d. Para descartar la solución de la punta presione el botón (pulsador) hasta el segundo tope. e. Descarte las puntas utilizando el expulsor. Técnica de pipeteo para líquidos con alta viscosidad: a. Presione el botón superior hasta el segundo tope. b. Sumerja la punta en la solución (2-3 mm) y suelte el botón despacio. La punta tiene que estar bien llena. c. Descarte el líquido de la punta presionando suavemente el botón superior (pulsador) hasta el primer tope.

Cuidados y mantenimiento del equipo a. Iniciar el día limpiando la parte externa de las pipetas de polvo o suciedad. b. Use solamente ethanol al 70% para la limpieza de la micropipeta. Otro tipo de solvente no es aconsejable. c. Utilizar las puntas adecuadas a las pipetas y a la cantidad de solución que se va a medir. d. El pistón y el cilindro pueden ser chequeados dos veces al año si la pipeta es usada diariamente. PARTE B: ADQUISIÓN DE DESTREZA PARA MANEJO DE UNA MICROPIPETA TOMANDO DIFERENTES VOLUMENES. a. Al momento de tomar la solución, la micropipeta debe estar verticalmente (en un ángulo de 90°). b. Aprender a evitar que se formen burbujas de aire. c. Identificar las puntas adecuadas de acuerdo a la micropipeta. e. Aprender a trabajar con líquidos y líquidos con alta viscosidad. f. Antes de empezar la práctica, limpiar la micropipeta de cualquier contaminación que pueda afectar nuestra muestra. RESULTADOS.X(ul) 0.5

Y(mm)

1 1.5 2 3 4 CONCLUSIONES.Tal como lo hemos revisado, las micropipetas son dispositivos de gran ayuda al momento de realizar análisis en laboratorios. Por ello, es importante que al momento de usarlas, lo hagamos correctamente y con conocimiento, diferenciando los tipos de líquidos que vamos a usar, los tipos de micropipetas que existen y sus puntas, como ha sido enseñado en esta práctica. Aplicar lo aprendido de manera correcta, nos va llevar a tener resultados confiables.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.1. Johnson TR, Case CL Laboratory Experiments in Microbiology. 10th ed. Pearson Education; 2013. 2. Buenas prácticas de la OMS para laboratorios de microbiología farmacéutica. Red PARF Documento Técnico Nº 11. Enero de 2013, Washington, DC. Disponible...