Práctica 6 IM - PRACTICA 6 INMUNO PDF

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PRACTICA 6 INMUNO...

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ESCUELA NACIONAL DE MEDICINA Y HOEMOPATÍA INMUNOLOGÍA MÉDICA LABORATORIO Práctica 6 TECNICAS INMUNOLÒGICAS I OBJETIVO GENERAL. Reconocer la importancia de las técnicas inmunológicas básicas (aglutinación y precipitación) en el diagnóstico inmunológico, a través del análisis de las características de la reacción antígeno-anticuerpo y de las diferencias de las técnicas que les permitan ser utilizadas en diferentes pruebas diagnósticas. MARCO TEÓRICO (INTRODUCCIÓN). Precipitación: Se produce cuando el antígeno (Ag) es soluble (no partículado). Se emplea como ensayo cualitativo o semicuantitativo para medir la cantidad de anticuerpo (Ac). Existen dos tipos: a) Inmunoprecipitación en medio líquido y, b) Inmunoprecipitación en medio sólido. Este último se divide en: a) inmunodifusión simple en tubo, b) doble en placa y c) simple en placa.

a. Inmunoprecipitación en medio líquido:

Efecto prozona: ausencia de reacción inmune cuando hay altas concentraciones de anticuerpo. Efecto postzona: ausencia de reacción inmune cuando hay altas concentraciones de antígeno.

Zona de equivalencia: Todo el Ag y Ac se encuentran formando complejos macromoleculares insolubles (teoría del retículo). Consecuencias biológicas: sólo se dan determinadas actividades (p.ej. fagocitosis) cuando hay un equilibrio entre las concentraciones de Ag y de Ac (en la zona de equivalencia). b. Inmunoprecipitación en medio sólido: Utiliza un soporte sólido gelificado en el que difunden el Ag y Ac. Se agrupan dentro de dos categorías: inmunodifusión y técnicas inmunoelectroforéticas. b.1. Inmunodifusión: Utiliza un soporte de agar en el que difunden el Ag y Ac. Donde se establece el equilibrio entre las concentraciones de Ag y de Ac se observa una banda de precipitado. La difusión puede realizarse en una o dos dimensiones y además en tubo y en placa: • Doble en placa: Ac y Ag difunden en el gel. Pueden observarse 3 patrones:

b.2 Inmunodifusión simple en placa (radial): El Ac es incorporado en el gel de agar. El Ag de los pocillos difunde formando “anillos” de precipitación:

Difusión simple en tubo: Se establece un gradiente de concentración sólo para uno de los reactivos (Ej. Ac). • Difusión doble en tubo: El gradiente de concentraciones es para el Ac y el Ag.

Aglutinación: Más sensible que la precipitación. Se utiliza cuando el Ag es particulado (ej. bacteria). En el caso concreto de Ag ligados a eritrocitos, se habla de hemoaglutinación. Además, algunos virus pueden aglutinar específicamente eritrocitos de mamíferos y aves, lo que puede usarse para su identificación. La aglutinación puede utilizarse como ensayo cualitativo o semicuantitativo de la cantidad de Ac. a. Test de aglutinación cualitativa (aglutinación rápida): Consiste en mezclar Ag y Ac y observar la aglutinación. Ej. Prueba de aglutinación rápida para la brucelosis, test de determinación de grupos sanguíneos, test de Coombs para la anemia hemolítica autoinmune, etc. b. Test de aglutinación cuantitativa (aglutinación lenta): Para la “titulación” de un suero: se diluye el suero y se enfrenta a una cantidad fija de Ag. TITULO: corresponde a la máxima dilución del suero en el que la aglutinación es positiva. Efecto Prozona: Debido al exceso de Ac no se forma la red que permite la aglutinación. Puede también deberse a la presencia de Ac “no aglutinantes”. Efecto postzona: ausencia de reacción inmune cuando hay altas concentraciones de antígeno

c. Aglutinación pasiva: Conversión de una prueba de precipitación en una de aglutinación, uniendo químicamente Ag solubles a partículas inertes como bacterias, látex o eritrocitos (se habla de hemaglutinación pasiva). d. Inhibición de la hemaglutinación: Algunos virus pueden aglutinar glóbulos rojos (p.ej. los de la gripe o el de Newcastle). Para evidenciar su presencia se añaden Ac específicos para los mismos y se determina la inhibición de la hemaglutinación por bloqueo de los virus. También se pueden emplear para titular sueros.

PROCEDIMIENTO La práctica se llevará a cabo en dos partes. La primera en el laboratorio (con docente) y la segunda, en trabajo de equipo (sin docente) extraclase. Se realizará una búsqueda de fuentes bibliográficas, para ejemplificar las pruebas diagnósticas que tienen como fundamente la precipitación o la aglutinación, por ejemplo Anticuerpos heterofilos, Proteína C Reactiva, Factor Reumatoide,

Reacciones Febriles, Fijación del Complemento, VDRL, Grupo Sanguíneo, Antiestreptolisinas, entre otras. Indicando sus valores de referencia y para el diagnóstico de que padecimientos se les considera.

RESULTADOS Indicar los nombres de las pruebas diagnósticas con fundamento de precipitación o aglutinación, así como sus valores de referencia y para que se usan.

ANÁLISIS DE RESULTADOS Explicar los fundamentos de cada una de las pruebas anotadas

CONCLUSIONES

REFERENCIAS • Abbas, A., et al. (2012), Inmunología celular y molecular. Barcelona, España; Elsevier. CUESTIONARIO No. 6 1.- ¿Cuál es la diferencia entre aglutinación activa y aglutinación pasiva? 2.- ¿En qué consiste la técnica Outcherlony? 3.- ¿Cuál es el fundamento de la técnica de inmunoprecipitación y sus variantes de contra inmunoelectroforesis y de inmunoelectroforesis en cohete?...