Práctica Actividad 4 grupo 2 microscopia, tinción Gram y simple PDF

Preview

Summary

Download Práctica Actividad 4 grupo 2 microscopia, tinción Gram y simple PDF

Description

"Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia"

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE MEDICINA DOCENTE CLAUDIA GIULIANA, LARREA VARGAS

CURSO BIOLOGIA INTEGRANTES ARIANA GRISSEL VELÁSQUEZ ESTRADA SARA ABIGAIL TELLO HUIMAN YURIKO YASMIN RODRIGUEZ FLORES MARCO TRONCOS GARCÍA RUBEN MARCELO VILLAR BURGA MARIANA ALEJANDRA ESPINOZA TRELLES

TEMA INFORME DE PRACTICA N°04

PIURA - 2021

I.-INTRODUCCIÓN: El microscopio es un instrumento que aumenta el tamaño de la imagen de un objeto. Los microscopios ópticos pueden ser simples, formados por una sola lente, ejm. una lupa y compuestos, constituido por dos lentes denominados objetivos y ocular ejm. Microscopio de luz visible, microscopio de contraste de fases, microscopio de luz ultravioleta, etc. El más usado en laboratorio de biología es el microscopio compuesto que usa la luz visible comprendida de los 400 a 750 nm, con el cual podemos observar células eucariotas (10 a 50nm) y con cierta limitación a células procariotas (5 a 10nm). La eficiencia del microscopio está dada por el poder de resolución y la capacidad de aumento de sus lentes. Los organismos vivos están compuestos de células. Los organismos pueden ser unicelulares o multicelulares. La mayoría de las células no son visibles a simple vista. Para observar y estudiar las células y los tejidos, se usan diferentes tipos de microscopios. II.- OBJETIVOS ➢ Identificar cada una de las partes del microscopio óptico. ➢ Conocer los fundamentos de la microscopia óptica. ➢ Aprender el manejo correcto del microscopio óptico.

III.- MATERIAL Y METODOS: 1. El profesor explicará la parte óptica y mecánica del microscopio, así como su uso. 2. El estudiante reconocerá las partes del microscopio que le será proporcionado. 3. Luego el estudian te enfocara una con el microscopio una muestra histológica. 4. Observar a menor y mayor aumento.

IV. RESULTADOS: En el esquema, enumere y coloque las partes del microscopio óptico.

Ocular Tubo

Brazo

Revolver Objetivo

Pinzas Platina Tornillo macrométrico Tornillo micrométrico

Condensador

Condensador

Base

DISCUSIÓN Las partes del microscopio se divide en una parte mecánica, y una parte óptica. En la estructura mecánica del microscopio, encontramos la base, el brazo que sostiene al tubo, platina y las pinzas donde se coloca el preparado o muestra. En la parte óptica, se tienen elementos como: el tornillo macrométrico que permite ajustar la posición vertical de la muestra de forma rápida, el tornillo micrométrico que permite visualizar un objeto con mayor precisión. El reogtato o condensador, el revolver que permite cambiar el objetivo y este a su vez permite enfocar con zoom de 4x, 10x, 40x, 100x. su función es captar la luz procedente de la muestra. El procedimiento se realiza colocando el preparado en la platina y ajustarlo mediante las pinzas, luego regular el reogtato (condensador), regulamos con el tornillo macrométrico, luego enfocamos mirando y ajustando con el tornillo micrométrico, ajustamos con el revolver hasta que haga click y luego ajustar el tornillo micrométrico. Luego procedemos retirando todo, abriendo la pinza, desenfocamos, y limpiamos con eter la muestra, la platina y el objetivo. Regulamos el reogtato, tapamos el microscopio y lo cargamos de forma adecuada para guardarlo en un lugar seguro.

CONCLUSIÓN:

➢ Se identificaron las partes del microscopio óptico. ➢ Se comprende el manejo correcto del microscopio, la forma de colocar muestras,

enfocar, limpiar y guardar.

VI.-PREGUNTAS DE APLICACIÓN:

1. Explique las diferencias entre microscopia óptica y electrónica. Es una lente especialmente diseñada para ser utilizada de este modo. Al incrementar el aumento (las lentes de inmersión tienen aumentos de 90x o 100x) es necesario aumentar el índice de refracción entre el preparado y la lente para lograr la imagen, para esto se utilizan aceites de cedro o sintético y la lente se sumerge en ellos.

2. ¿Qué es objetivo de inmersión?

•

A mediados del siglo XX, el invento del microscopio electrónico constituyó un gran aporte al estudio de la biología celular, ya que permitió conocer la tridimensionalidad de las estructuras celulares, así como la distribución espacial de los componentes moleculares en su interior. Se logró ver, por ejemplo, lo que hay dentro del retículo endoplasmático y descubrir así que las mitocondrias son organelas que están dentro del citoplasma.

3. Explique los aportes del microscopio electrónico a la biología celular y la medicina. •

Permiten realizar un análisis elemental de la muestra que está siendo examinada en el microscopio. La ventaja de este procedimiento es que la muestra que está siendo observada en tiempo real puede ser analizada en su composición química sin ser destruida.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

Por Deborah Fields, B.Sc. Microscopia electronica. NEWS MEDICAL LIFE SCIENCES. 26 de febrero 2019 Disponible en: https://www.news-medical.net/life-sciences/Electron-Microscopy-AnOverview(Spanish).aspx#:~:text=La%20microscopia%20electr%C3%B3nica%20es%20 una,para%20producir%20im%C3%A1genes%20de%20espec%C3%ADmenes. Por Yolanda Smith, B.Pharm. Microscopia óptica. NEWS MEDICAL LIFE SCIENCES.23de agosto 2018. Disponible en: https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Optical-Microscopy-(Spanish).aspx

CÉLULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS I. NTRODUCCIÓN: A principios del siglo XIX, los biólogos alemanes Schleiden y Schwann postularon que todos los seres vivos están conformados por células. Este conocimiento estableció las bases de la "teoría celular": la célula es la unidad básica de estructura y función de todos los seres vivos. Una importante división biológica, separa a las células eucariotas (organismos que contienen un núcleo limitado por una membrana) de las procariotas, en los cuales el DNA no está físicamente separado del citoplasma. La célula procariótica: presenta una estructura simple formada por un solo compartimiento, el citoplasma. La cubierta de la membrana plasmática se encuentra muy diferenciada y se denomina pared celular bacteriana. Los organismos vivos que poseen células procariotas son las bacterias y se denominan organismos procariontes. Las bacterias comprenden, por una parte, especies de importancia médica puesto que producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los animales, pero, por otra parte, una gran mayoría representa beneficios para la agricultura, la industria y la salud humana y animal. Las bacterias de acuerdo a como retiene el colorante cristal violeta, en su pared celular, según la técnica diseñada por el médico danés Hans Christian Gram, se clasifica como: Gram-positivas: Pared celular contiene mureína y ácido teicoico y Gram negativas: La composición de su pared celular es más compleja. Además del peptidoglucano, contiene una asociación de proteínas lípidos y lipopolisacáridos. Célula eucariótica: presenta una estructura compleja formada por varios compartimentos: citoplasma, núcleo y matriz de las organelas. La cubierta de la membrana plasmática tiene diferentes niveles de diferenciación, sólo en las células eucarióticas vegetales la diferenciación de la cubierta es muy marcada y se conoce con el nombre de pared celular vegetal. Las células eucarióticas presentan compartimentos definidos por membranas celulares. El compartimiento más grande recibe el nombre de citoplasma y contiene

las

organelas,

asociaciones

supramoleculares

(ribosomas,

microtúbulos y microfilamentos) y demás moléculas que participan en el metabolismo celular. En el núcleo se encuentra el material genético organizado en cromatina, además se puede observar el nucléolo que es una organización supramolecular ribonucleoproteica. Los organismos que poseen células eucarióticas son llamados eucariontes. Las células pueden ser estudiadas bajo distintos

aspectos,

tales

como

morfológico,

bioquímico

o

fisiológico.

Frecuentemente, los estudios citológicos requieren la aplicación de técnicas de microscopía. Para aumentar el contraste de los componentes celulares, se realizan coloraciones mediante las cuales pueden visualizarse estructuras específicas. En la presente práctica se prepararán de materiales biológicos para su estudio al microscopio:

III. MATERIAL Y METODOS: A. Observación de células procariotas (bacterias): Coloración Gram. 1. Extraer con el hisopo una muestra de sarro dentario y extenderlo (frotis)

sobre el portaobjeto limpio y desengrasado. 2. Fijar el preparado a la llamada del mechero 3. Cubrir con violeta de Genciana por 1 min. 4. Lavar con agua corriente 5. Cubrir la preparación con lugol por 1 min. 6. Lavar con alcohol-acetona hasta que ya no arrastre colorante. 7. Lavar con agua corriente 8. Agregar el colorante safranina por 30 seg. 9. Dejar secar al medio ambiente o con ayuda del mechero 10. Agregar l gota de aceite de inmersión 11. Observar al microscopio a 40X o 10X, luego pasar a 100X.

B. Observación de células eucarióticas animal (células epiteliales)

coloración de azul de metileno. 1. Extraer con el hisopo una muestra de raspado bucal y extenderlo sobre un portaobjeto limpio y desengrasado. 2. Dejar secar a temperatura ambiente 3. Cubrir la lámina con azul de metileno por 3 min. 4. Enjuagar con agua destilada 5. Dejar secar a temperatura ambiente 6. Observar al microscopio a 10X y luego a 40X.

C. Observación de células eucarióticas vegetal (catafilo de cebolla)

coloración de azul de metileno. 1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue

membrana que está adherida por su cara inferior cóncava. 2. Depositar el fragmento de membrana en una lámina portaobjetos con unas

gotas de agua. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas. 3. Escurrir el agua, añadir unas gotas de azul de metileno sobre la

membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. 4. Con el cuentagotas bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte

colorante. 5. Colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio.

6. Observa la preparación a distintos aumentos, empezando por el más bajo

IV.

RESULTADOS:

a. Observación de células procariotas (bacterias): Coloración Gram.

Observación: Bacterias Muestra:

Sarro Dentario

Coloración:

Azul de Metileno gran positiva

Aumento:

1000X

b. Observación de células eucarióticas animal (células epiteliales) coloración de azul de metileno.

Observación: Células Epiteliales Muestra:

Raspado Bucal

Coloración:

Azul de Metileno

Aumento:

1000X

c. Observación de células eucarióticas vegetal (catafilo de cebolla) coloración de azul de metileno.

Observación: Catafilo de Cebolla Muestra:

Hoja interna de la Cebolla

Coloración:

Azul de Metileno

Aumento:

1000X

INTERPRETACION •

Para la observación “a” de células procariotas (bacterias): Coloración Gram se observa que se realiza para distinguir entre el tipo de bacterias con respecto a la pared celular que permite determinar el tamaño, forma, agrupación de las bacterias dependiendo de la coloración de la muestra por lo que, según el procedimiento, hemos colocado azul de metileno y safranina (color azul y rosado respectivamente). Asimismo, observamos en nuestro dibujo que las bacterias optan por un color azul.

•

Para la observación “b” de células eucariotas animales (células epiteliales): Coloración de azul de metileno, se puede observar en el dibujo realizado, que las células presentan núcleo propio de célula eucariota y una membrana que no tiene forma fija, es decir, irregular, que presenta una coloración de azul de metileno.

•

Para la observación “c” de células eucariotas vegetales (catáfilo de la cebolla): Coloración azul de metileno, se puede observar que, a diferencia de las células animales, esta célula vegetal del catafilo de la cebolla presenta pared celular bien definida lo que da un aspecto más estructurado al tejido. Presenta por la tinción simple realizada una coloración azul.

DISCUSIÓN

Efectivamente podemos observar que según la coloración Gram la muestra corresponde a bacterias Gram positivas en el sarro dental, por lo que la pared celular de 40 capas aproximadamente está compuesta por peptidoglicano, que a su vez tiene porcentajes de ácido teicoico, que permite la absorción del color primario colocado (violeta), lo que ocurre también es que estos pigmentos poseen cargas positivas les permite interactuar mejor con las paredes celulares con carga negativa, es por consiguiente, que no se decoloran al entrar en contacto con la acetona y la limpieza, porque ya absorbieron el color violeta, cabe señalar que las Gram negativas ( que no se encuentran en el dibujo ni la observación) presentan una membrana externa que no tienen las positivas, una segunda membrana rica en lípidos que repele el color del pigmento primario (violeta de genciana) al aplicarle la acetona y la limpieza vuelve a ser incoloro, sin embargo como se coloca safranina a ambas muestras solo la Gram negativa se tiñe de color rosa, por lo que la Gram positiva ya absorbió antes el color primario Violeta. Esto nos ayuda a determinar y diferenciar entre ambos tipos de parásitos. Determinamos también en la tinción simple que agregar estos pigmentos nos permite observar de manera óptima las células eucariotas vegetales y animales. CONCLUSIONES -

Determinamos en nuestra observación que la muestra de células procariotas del sarro dentario, pertenece a bacterias Gram positivas con una coloración violeta.

-

Se verificó mediante la tinción simple que, en la observación de las células eucariotas vegetales, en la muestra del catáfilo de la cebolla se determina la forma definida de su pared celular.

-

Se determinó que la tinción simple de color azul de metileno en la muestra del raspado bucal, perteneciente a células eucariotas de origen animal, verificamos que las membranas presentan una forma irregular.

VI.

PREGUNTAS DE APLICACIÓN:

1. Mencione 5 diferencias entre célula procariota y eucariota. DIFERENCIA DE CÈLULA PROCARIOTA Y EUCARIOTA CÈLULA PROCARIOTA CÈLULA EUCARIOTA Núcleo rodeado de membrana Nucléolo Retículo endoplasmático Aparato del Golgi Microtúbulos Orgánulos Microfilamentos

NO

SI

Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente

Presente Presente Presente Presente Presente Presente

2. Explique porqué durante la coloración Gram algunas bacterias se tiñen de color rojo y otras de color violeta si la muestra es sometida a los mismos pasos de la tinción. A que se debería este fenómeno. Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +. Por el contrario, la capa de peptidoglicanos de las bacterias gramc negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicanos unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.

3. Mencione 4 diferencias entre célula animal y célula vegetal. 1.La pared celular Las células eucariotas vegetales tienen pared celular mientras que las células animales no la tienen. 2. Vacuolas Las células animales salvo algunas excepciones no tienen vacuolas mientras que las células vegetales sí las tienen. Cumplen función de almacenamiento de sustancias de reserva, savia, colorantes, venenos y también sustancias de desecho.

3. Cloroplastos Las células vegetales tienen cloroplastos mientras que las células animales no los tienen. Los cloroplastos son el lugar de la célula vegetal donde tiene lugar la fotosíntesis. 4. Glioxisomas Los glioxisomas son un tipo de peroxisomas que se encuentran en la célula vegetal especialmente en los tejidos de almacenamiento de lípidos como las semillas.

4. Explique el fundamento de los colorantes utilizados para la observación de células de la presente práctica. La utilización de los colorantes en los procesos de identificación en microbiología se fundamenta en las propiedades fisicoquímicas de estas sustancias. En el campo de la física, la óptica explica cómo todos los objetos son observables dependiendo de las longitudes de onda que se absorben y se transmiten dentro del denominado “espectro visible”. 5. Defina: Célula somática y célula sexual.: Cite ejemplos para cada uno. células somáticas: son aquellas que constituyen la totalidad de los tejidos y órganos del cuerpo de los organismos pluricelulares, en distinción respecto a las células sexuales o germinales (gametos) y a las células embrionarias (células madre). ✓ Miocitos: Se llama así a las células que componen los diversos músculos del cuerpo, tanto de las extremidades como del tórax e incluso del corazón. ✓ Células epiteliales: Recubren la cara interna y externa del cuerpo, formando una masa denominada epitelio o epidermis, que comprende ciertos segmentos de la piel y las mucosas.

✓ Eritrocitos (glóbulos rojos): Desprovistos de núcleo y mitocondrias en los seres humanos, estas células sanguíneas están provistas de hemoglobina (lo cual le atribuye el color rojo a la sangre) para transportar el oxígeno vital a los distintos confines del cuerpo. ✓ Leucocitos (glóbulos blancos): Células protectoras y de defensa del organismo, encargadas de lidiar con los agentes externos que pudieran ser causantes de enfermedad o infecciones.

✓ Neuronas: Las células nerviosas que integran no sólo el cerebro, sino la médula espinal y las distintas terminaciones nerviosas, son las encargadas de la transmisión de los impulsos eléctricos que coordinan la musculatura del cuerpo y otros sistemas vitales. ✓ Trombocitos (plaquetas): Fragmentos citoplásmicos, más que células, irregulares y sin núcleo, son comunes a todos los mamíferos y cumplen roles vitales en el crecimiento y en la formación de trombos o coágulos. ✓ Condrocitos: Son un tipo de célula que integra los cartílagos, en donde producen colágenos y proteoglicanos, sustancias que sostienen la matriz cartilaginosa. Células sexuales: Reciben el nombre de gametos o células sexuales a un tipo determinado de célula el cual tiene como principal función la de generar un nuevo ser, perpetuando la especie y los genes de los progenitores. ✓ Los espermatozoides: Denominados espermatozoides a las células sexuales propias del género masculino, y las cuales poseen la mitad de la información genética necesaria para formar a un nuevo ser vivo. ✓ Los óvulos: Los óvulos son las células sexuales femeninas, las cuales cargan con la mitad de la información genética necesaria para la génesis de un nuevo ser. ✓ La oósfera: Recibe el nombre de oósfera al tipo de célula sexual femenino de las plantas que tienen la capacidad de reproducirse sexualmente. ✓ El polen: El polen sería el equivalente vegetal de los espermatozoides: la célula sexual masculina de las plantas. Se trata de pequeñas partículas en forma de granos que se forman en los estambres de las plantas.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Alberts, B., et al. Molecular Biology of the Cell,5th ed., Garland Pub., 2007. [Biología molecular de la célula (4ª ed.). Omega, 2004 (2002)] consú...