Practica No 6 Determinación de Bilirrubina en suero y fosfatasa alcalina PDF

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Dra. Isabel Rocha...

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Practica No. 6 Determinación de Bilirrubina en suero y fosfatasa alcalina Introducción La bilirrubina es un producto del metabolismo de la hemoglobina. Cuando los eritrocitos se degradan liberan hemoglobina que se metaboliza en el grupo hemo, posteriormente se transforma en biliverdina y ésta en bilirrubina (no conjugada) con ayuda de la albumina pasa al hígado para convertirse en bilirrubina conjugada y después ser excretada por la bilis. La fosfatasa alcalina (FA) es una enzima que está en todo el cuerpo, pero se encuentra principalmente en el hígado, huesos, riñones y el aparato digestivo. Niveles elevados de fosfatasa alcalina puede indicar un daño en el hígado. La fosfatasa alcalina es útil para el diagnóstico de obstrucciones de los conductos biliares y de la vesícula biliar. La determinación de bilirrubina en sangre es importante, ya que, el incremento de ella en la sangre puede provocar ictericia, por lo que, esta prueba es recomendable para corroborar la presencia de esta enfermedad. Esta prueba se divide, según sea su origen (elevación de bilirrubina indirecta –hígado- , y elevación de bilirrubina directa –vías biliares-) y la suma de las dos anteriores (bilirrubina total).

Objetivos 

Conoce las diferentes pruebas hepáticas que se utilizan en la clínica.



Analizar las causas de aumento y disminución de la fosfatasa alcalina y las bilirrubinas en el suero.

Planteamiento del problema Determinar mediante una muestra de sangre obtenida por dos de nuestros compañeros los niveles de fosfatasa alcalina (FA), y bilirrubinas (directa, indirecta y total).

Hipótesis Por medio de los procesos para obtener los valores de FA y de las bilirrubinas los alumnos saldrán con los niveles dentro del rango de normalidad.

Material y/o equipo Para la fosfatasa alcalina (FA) 

Reactivo de trabajo (RT)



Suero

Bilirrubina total 

Agua destilada



Suero



Solución patrón (SP)



Reactivo (RA)



Reactivo de trabajo (RT)

Bilirrubina directa 

Agua destilada



Suero



Reactivo (AD)



Reactivo de trabajo

Procedimientos establecidos en la práctica Para sacar el valor de la FA mezclamos 1000 µl del reactivo de trabajo (RT) y 20µl de suero. Después, se calibro el espectrofotómetro con agua destilada para poner en la celdilla e iniciar a contar el tiempo con un cronometro, cuando el cronometro marcó el primer minuto leímos la primera absorbencia (A1), el procedimiento se hizo igual en el segundo minuto y el tercer minuto. Con los resultados que obtuvimos en las lecturas determinamos el incremento de absorbencias por minuto (a/min). Dando en la 1ra toma: 2.072; 2da toma: 2.109; y en la 3ra toma: 2.140.

Se restaron los resultados de A2 y A1, y de A3 y A2, después se sumó el producto y se dividió 2, que fueron los intervalos de tiempo para después, multiplicarlo por 2764 arrojando un resultado de 93.9764 U/L. En la bilirrubina total, mezclamos en el tubo blanco reactivo (BR), 1000µl de agua destilada y 1000µl de reactivo de trabajo. En el blanco muestra (BM) incorporamos 1000µl de suero y 1000µl de reactivo (AT); con el tubo problema (TP) se añadió 1000µl de suero y 1000µl de reactivo de trabajo. Y en el tubo patrón (P) 100µl de solución patrón y 1000µl de reactivo de trabajo. Después los dejamos reposar durante dos minutos a temperatura ambiente. Por consiguiente, se leyó la absorbencia del BM a 540 nanómetros frente a agua destilada. En seguida la absorbencia del tubo problema y del tubo patrón a 540 nanómetros frente al blanco reactivo.

Presentación de los resultados Estos fueron los valores que obtuvimos en cada lectura: BM—0.082 TP—0.150 P—0.108 bilirrubina total= B.T=

a del problema− A delblanco muestra ×C patrón A patrón

0.150− 0.002 0.148 =1.37 = 0.108 0.108

B . T =1.37 ×0.108=0.148 mg / dl

Para sacar la bilirrubina total restamos la absorbencia del tubo problema con la absorbencia del blanco muestra y dividimos el total con la absorbencia patrón, luego lo multiplicamos con la concentración patrón, dando una bilirrubina total de 0.148mg/dl. Con la bilirrubina directa mezclamos en el tubo blanco reactivo (BR) 100µl de agua destilada y 1000µl de reactivo de trabajo (RT), en el blanco muestra (BM) 100µl se suero y 1000µl de reactivo (AD); y en el tubo problema (TP) 100µl de suero y 1000µl de reactivo de trabajo. Lo dejamos reposar durante cinco minutos a 37°C.

Con el espectrofotómetro leímos la absorbencia del blanco muestra a 540 nanómetros frente a agua destilada y también la del tubo problema a 540 nanómetros frente a blanco reactivo dando los valores de 0.023 para BM, 0.061 para el TP y 0.008 para el BR. Bilirrubina Directa=

B . D .=

A del problema− A del blanco muestra × C patrón A patrón

0.061−0.025 =4.75 ×0.008=0.038 Mg/dl 0.008

El procedimiento para calcular la bilirrubina directa fue el mismo que utilizamos para la determinación de la bilirrubina total, en donde se dio como resultado de 0.038mg/dl.

Conclusión Los resultados que obtuvimos en las muestras de sangre que se les pidió a nuestros compañeros están en el rango de los valores de normalidad. Por lo que no se halla una elevación ni una deficiencia de bilirrubina y de fosfatasa alcalina en sangre. De lo anterior se puede concluir con que, la bilirrubina es una sustancia de color amarillo que se encuentra en el hígado producto de la síntesis del grupo hemo, en el hígado se procesa para ser excretada por la bilis al intestino. Si hay una elevada concentración de esta sustancia se puede decir que el hígado no funciona muy bien y pueda causar enfermedades. De igual forma, cuando hay una deficiencia de la producción de bilirrubina en el hígado o que en la síntesis de grupo hemoes insuficiente también podrá provocar daños en la salud. Por estas razones, es muy importante conocer los riesgos que tienen tanto una deficiencia como un incremento de bilirrubina en nuestro cuerpo. Algunas de las enfermedades que puede causar es la ictericia (directa o indirecta), que ese caracteriza por la coloración amarillenta de la piel, mucosa u ojos. También, hay enfermedades que provocan el aumento de la bilirrubina como la cirrosis, hígado graso, hepatitis o la anemia. Estas pruebas son de gran importancia en la práctica médica a la hora de diagnosticar una enfermedad, saber cuáles son los valores normales que debe de tener una persona y si en caso de que se registraran síntomas poder descartar o evaluar un mal funcionamiento en el hígado y posteriormente dar un tratamiento.

Mediante esta práctica, el equipo adquirió nuevos aprendizajes para determinar los niveles de bilirrubina y de la enzima fosfatasa alcalina; con distintos procedimientos y ecuaciones que nos ayudaron a obtener los resultados que esperábamos, puesto que los valores de las muestras fueron normales y no se encontró ninguna deficiencia o aumento de bilirrubina y fosfatasa alcalina....