Protocolo Nº 8 amable figuere Nicole Alexndra PDF

Preview

Summary

PRACTICA Nº 8PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD INVITRO A LOS ANTIMICROBIANOS1. COMPETENCIAS Determinar los principales métodos de susceptibilidad a los antimicrobianos. Seleccionar discos antibióticos para bacterias Gram positivas y Gram negativas. Interpretar antibiogramas. 2. MARCO TEÓRICOEl antibiograma...

Description

PRACTICA Nº 8

PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD IN VITRO A LOS ANTIMICROBIANOS 1. COMPETENCIAS •

Determinar los principales métodos de susceptibilidad a los antimicrobianos.

•

Seleccionar discos antibióticos para bacterias Gram positivas y Gram negativas.

•

Interpretar antibiogramas.

2. MARCO TEÓRICO El antibiograma es el procedimiento que se realiza in vitro mediante el cual se determina la sensibilidad o la resistencia de una bacteria, frente a una concentración en microgramos (No) o unidades (U) de un antibiótico impregnado en un disco de papel filtro, que tratan en lo posible de reproducir las condiciones en que se encuentra el agente infeccioso dentro de los líquidos orgánicos. El laboratorio de Microbiología dispone de métodos que permiten evaluar la actividad in vitro de antibióticos para bacterias aerobias o anaerobias. Uno de los métodos más utilizados es la difusión en agar (disco - placa) según la técnica estandarizada de kirby - Bauer, otros métodos son dilución en caldo y dilución en agar y métodos automatizados. El método de difusión en agar puede realizarse de manera cuantitativa, semicuantitativa y cualitativa, esta última es menos costosa, sencilla y satisfactoria para la práctica clínica que actualmente se realiza según el procedimiento normalizado del Clinical and Laboratory Standars Institute (CLSI, antes NCCLS).

3. ACTIVIDADES MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR •

Material Biológico. Cultivos de bacterias en agar sangre, agar nutritivo y agar Mac Conkey. Suspensión bacteriana (con turbidez equivalente al 0.5 de Mac Farland).

•

Material

de

Laboratorio

y

Equipos. •

Agar Muller-Hinton en placas

•

asa de Kolle,

•

mechero de Bunsen,

•

pinza,

•

discos antibióticos,

•

vernier o regla graduada en

de Petri, •

Caldo tripticase soja en tubos de ensayo,

milímetros y •

hisopos de 6", •

estufa de cultivos.

4. PROCEDIMIENTO •

DIFUSIÓN EN AGAR SEGÚN EL CLSI. A partir de un cultivo puro de ~ bacterias en una placa de agar, se transfiere cuatro a cinco colonias a un tubo que contiene caldo tripticasa se soja (o caldo de Muller-Hinton). Una vez obtenida la turbidez adecuada (equivalente al estándar N° 0.5 de Mac Farland) que corresponde a una concentración aproximada de 10° UFC/ml./B) Embeber un hisopo estéril, sembrar 3 veces, uniformemente toda la superficie del agar Muller-Hinton. Dejar secar la placa en la estufa unos minutos. Colocar con una pinza los discos antibióticos en la superficie del agar, aproximadamente 24 mm uno de otro y a 14mm del borde de la placa. Y presionarlos suavemente contra la superficie del agar. Incubar a 37°C durante a 18 a 24 horas.

Técnica de difusión en agar

•

Medición de los halos de inhibición. Medir el diámetro de los halos de inhibición con el Vernier o una regla graduada en milímetros. Se considera halo de inhibición el círculo claro alrededor de los discos antibióticos, es decir, ausencia del crecimiento bacteriano.

Medición de los halos de inhibición

•

Interpretación de los Resultados. La medición en milímetros de los halos de inhibición informa cuándo la bacteria es sensible (S), resistente (R) o es intermedia (I) a la acción de los antibióticos. Ingresar a la tabla de interpretación de los halos de inhibición estándar del NCCLS y comparar la

medición obtenida de los discos antibióticos, utilizados en el antibiograma con los diámetros estándar (mm). El resultado obtenido para la cepa en estudio puede informarse como resistente (R), intermedio (I) o sensible (S). 5. RESULTADOS •

Esquematizar o pegar las fotografías de los antibiogramas realizados en la práctica.

Procedimiento: 1. Utilizamos antibióticos y los ponemos en 6 vasos con 5ml de suero fisiológico .

2. Enumeramos cada vasito para cada antibiótico , Amoxicilina 1 , Penicilina 2 , Cefalexina 3 , Ciprofloxacino 4 , colutorio 5 , y el ultimo vasito será el inoculo

3. Para preparar el inoculo debemos tomar muestra de un medio de cultivo con bacterias orales con el hisopo y mezclarlo con 5ml de suero que están en el baso .

4. Luego realizamos con el inoculo una cruz , luego una estriación por desgaste de manera que no hayan espacios en ella y luego inversamente 5. Para finalizar debemos poner discos con cada antibiótico en la placa ya enumerada , y esperar para ver el antibiograma y la sensibilidad de cada bacteria frente a cada antibiótico .

Escribe el nombre del disco antibiótico, la sigla, su potencia en µg y escribe la medición del halo en milímetros según corresponda a resistente, intermedio y sensible. Antibiograma para bacterias Gram negativos Nombre del disco

Sigla

antibiótico

Potencia µg

Medición del halo de inhibición en mm Resistente

Intermedio

Sensible

10mm

11-15mm

15 a mas

AMOXICILINA

A

15Ug

7mm

PENICILINA

P

15Ug

9mm

CEFALEXINA

CFX

15Ug

9.5mm

CIPROFLOXACINO

CIP

15Ug

8.5mm

CLORHEXIDINA

CH

0.12%

FOTOS :

15mm

AMOXICILINA

Clorhexidina

Penicilina Ciprofloxacino

CEFALEXINAc

AMOXICILINA

clorhexidina Penicilina Ciprofloxacino

CEFALEXINAc

Antibiograma para bacterias Gram positivas

Medición del halo de inhibición en mm

Nombre del disco

Sigla

Potencia µg

Resistente

Intermedio

Sensible

antibiótico

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

No procede

2. CUESTIONARIO •

¿Qué nos permite conocer un antibiograma?

Nos permite conocer la susceptibilidad , resistencia o sensibilidad de los microorganismos frente a uno o varios antibióticos. •

¿Qué indica la CIM (Concentración Inhibitoria Mínima) y la CBM (Concentración mínima bactericida).

La CIM (Concentración Inhibitoria Mínima) nos permite conocer la medida de sensibilidad de la bacteria frente al antibiótico lo cual impide el crecimiento de la

bacteria

y

nos

indica

la

sensibilidad

de

las

bacterias

S(sensible),I(Intermedio)y R (Resistente) . La CBM ( Concentración mínima bactericida) es la mínima cantidad de antibiótico capaz de destruir el 99.9% de una muestra inoculada en condiciones estandarizadas •

¿Cuál es la importancia de realizar un antibiograma? Son los resultados que este nos da mediante la interpretación la cual nos ayuda a la identificación del microorganismo, análisis del fenotipo, definir el fenotipo , deducir mecanismos bioquímicos de resistencia , su importancia clínica de la resistencia y redefinir las categorías de identificación clínica para una terapia o tratamiento. •

¿Cómo se produce la resistencia adquirida, cromosómica o extracromosómica de las bacterias a los antibióticos?

Se producen a través de mutaciones como son los cambios en la secuencia de bases cromosómicas, y por la trasmisión de material genético extra cromosómico procedente de otras bacterias. •

Resistencia Adquirida: Constituye un problema en la clínica, se detectan pruebas de sensibilidad y se pone de manifiesto en los fracasos terapéuticos en un paciente infectado con cepas de un microorganismo en otros tiempos sensibles

•

Es la mas frecuente , que en un principio eran sensibles a un determinado antibiótico y que, mediante diversos mecanismos, han adquirido la capacidad de ser resistentes a dicho compuesto. Cromosómica: En este caso se producen cambios en la secuencia genómica que posibilitan la resistencia.

Se trata de mutaciones que presentan una transmisión vertical (se transmiten a la descendencia), aparecen de forma espontánea, son irreversibles y aparecen tras la administración del antibiótico. Extracromosómica: se produce la transmisión de material genético extra cromosómico como: Plásmidos: Los plásmidos que transportan los genes de resistencia a los antibióticos se denominan plásmidos R. Transposones: son secuencias presentes en el genoma que muestran una gran capacidad de recombinación y una gran movilidad Integrones: pueden integrar en su matriz los denominados genes casette, que pueden codificar genes de resistencia a los antibióticos Estas secuencias pueden ser transferidas por: • •

•

Transformación : La bacteria capta ADN exógeno desnudo y lo incorpora en su genoma a través de fenómenos de recombinación. Conjugación : produce una transferencia de material genético entre dos bacterias a través de los denominados pili sexuales, túbulos de proteínas que ponen en contacto ambas células. Transducción : la transferencia del material genético entre una bacteria y otra ocurre a través de un fago o virus que infecta a bacterias. Es el mecanismo de transmisión de la resistencia en el caso de las penicilinasas en algunas cepas de Staphylococcus.

3. BIBLIOGRAFÍA PARA CONSULTAR García García, F., Román Ureña, J. y Valero Guillen, P. L. Morfología, Tamaño y Observación de las bacterias. En Liébana Ureña, José. Microbiología Oral. 2a edición. Editorial McGraw-Hill Interamericana. España, 2002. p.19-21. Molgatini, S. y María del Carmen Manto. Normas de Trabajo e Instrumental Básico del Laboratorio Microbiología). En Negroni, Marta. Microbiología Estomatológica. Fundamentos

y Guía Práctica. 2a edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires, Argentina 2009. p.528-531. Negroni, Marta. Microbiología Estomatológica. Fundamentos y Guía Práctica. 2a edición. Editorial Médica Panamericana, Buenos Aires, Argentina 2009. p.533-536. Murray, Patrick R., Rosenthal Ken S., Pfaller Michael A. Microbiológia Médica. 6ta. Edición. Editorial Gea Consultoría. S: L.

BIBLIOGRAFIA: • • •

Rev Cub Med Mil v.8 n.1 Ciudad de la Habana ene.-mar. 2003 https://www.solomamitis.com/tipos-de-resistencia-antibi%C3%B3tica http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/Lab Micro/Antibiograma.html...