Relatorio Tecnicas de isolamento e semeadura de micro-organismo PDF

Preview

Summary

Download Relatorio Tecnicas de isolamento e semeadura de micro-organismo PDF

Description

Universidade Federal do Recôncavo da Bahia Centro de Ciências Agrárias, Ambientais e Biológicas Curso de Bacharelado em Biologia

Aula Prática Técnicas de isolamento e semeadura de microorganismos

Cruz das Almas-BA 2018

Introdução O isolamento consiste na obtenção de uma cultura pura e geralmente tem como finalidade a identificação de um microrganismo. A maioria dos materiais •

infecciosos, bem como amostra de solos, água ou alimento, contem diversos tipos de bactérias. Quando é feito a semeadura desses materiais na superfície de meio sólido, as colônias formam copias exatas do organismo original. Acredita-se que uma colônia visível provavelmente vem de um único esporo ou célula vegetativa ou de um grupo dos mesmos micro-organismos juntos em agregados ou cadeias. As colônias microbianas frequentemente tem aparência diferente, o que permite distinguir um micro-organismo do outro. Para que essas colônias possam ser separadas umas das outras, as bactérias devem ser espalhadas de maneira suficientemente ampla na placa. A maioria dos trabalhos de microbiologia requer culturas puras ou clones da bactéria. O método de isolamento mais comumente utilizado para obter culturas puras é o método de esgotamento por estrias. Uma alça de inoculação estéril é mergulhada dentro de uma cultura mista, contendo mais de um tipo de micro-organismo, e é semeada em estrias na superfície de um meio nutritivo. Ao longo da estria, as bactérias são depositadas quando a alça entra em contato com o meio. As últimas células depositadas na alça são afastadas o suficiente para crescer em colônias isoladas. Essas colônias podem ser retiradas com uma alça de inoculação e transferidas para um tubo de ensaio com meio nutritivo para a obtenção de uma cultura pura contendo somente um tipo de bactéria. O método de esgotamento por estrias funciona bem quando o organismo a ser isolado está presente em grande numero em relação à população total. Contudo, quando o micro-organismo a ser isolado esta presente em um numero muito pequeno, sua quantidade pode ser aumentada por enriquecimento seletivo antes do isolamento com o método de esgotamento por estrias. Outra técnica bastante utilizada é a semeadura por espalhamento em placa, onde um inóculo é adicionado a superfície de um meio de ágar previamente solidificado. O inoculo é então espalhado de modo uniforme com um bastão de vidro em L esterilizado. Esse método espalha todas as colônias na superfície, portanto as células só irão crescer na superfície do meio, podendo ser feita a identificação de colônias isoladas. •

Objetivos • Aprender as principais técnicas de semeadura; • Conhecer os materiais utilizados para isolamento de microrganismos; • Aprender as boas práticas de manipulação dos materiais.

•

Materiais e métodos A aula prática da disciplina Microbiologia sobre técnicas de isolamento e

semeadura de microrganismos foi realizada no dia 12/06/2018, por volta das 16horas da tarde, no laboratório A1, na Universidade Federal do Recôncavo da Bahia, Campus Cruz das Almas. Foram realizados 3 procedimentos: Semeadura por estrias, isolamento direto de fungos e semeadura por espalhamento. 3.1. Semeadura por estrias Foi feita a identificação da placa com meio ágar nutriente (AN), utilizado para crescimento de bactérias, com nome da equipe e data. Posteriormente a alça de platina foi flambada até o rubro na chama da lamparina e esperou-se que a mesma esfriasse, feito isso utilizamos a mesma para tocar uma colônia de bactéria com a alça e estriar a bactéria no meio de cultura estéril. Ao final vedamos a placa de Petri com plástico filme e a incubamos em BOD por 24 horas. 3.2. Isolamento direto de fungos Identificamos a placa com meio ágar batata dextrose (BDA), utilizado para o crescimento de fungos, com nome da equipe e data. A agulha de platina foi flambada na chama da lamparina até o rubro e, quando esta esfriou, utilizamos para tocar uma colônia e em seguida tocar em 3 pontos do meio de cultura estéril. Vedamos a placa com plástico filme e a incubamos em BOD. 3.3 Semeadura por espalhamento Nesse procedimento utilizamos duas placas de Petri, uma contendo meio AN e outra meio BDA, identificamos as respectivas placas com nome da equipe e data. Com auxílio da micropipeta , pegamos um volume de 100ul (0,1ml) de uma suspensão de solo e depositamos nos meios de cultura. Depois, flambamos a alça de drigalski com álcool, esperamos a mesma esfriar e, com a ajuda dela, espalhamos a amostra no meio de cultura até secar. Vedamos a placa com plástico filme e a incubamos em BOD. Resultados e Discussão No teste utilizado semeadura por estrias, após o período de incubação, observamos que ocorreu o crescimento de colônias isoladas de bactérias. •

Geralmente, após o crescimento, as colônias são repicadas em tubos contendo meio, que futuramente serão utilizados para manutenção e testes bioquímicos e

morfológicos. Na placa de Petri que foi utilizado para fazer o isolamento direto de fungos, houve crescimento em toda superfície do meio. No procedimento semeadura por espalhamento, em que foram utilizadas duas placas de Petri, analisamos que o crescimento da colônia se deu em toda superfície do meio. •

Conclusão Ao final da aula prática, concluímos que o método por isolamento nos

permite através de técnicas eficientes, a obtenção de culturas puras, que por sua vez, auxiliam na identificação do micro-organismo trabalhado. O que é um grande passo para estudos microbiológicos. •

Referências

TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 10. ed. Porto Alegre: Artmed, 2012.

QUESTIONÁRIO SOBRE A AULA PRÁTICA: TÉCNICAS DE ISOLAMENTO E SEMEADURA DE MICRO-ORGANISMOS 1. O que é uma cultura pura? É quando apenas um tipo de micro-organismo está presente. Em outras palavras, é uma cultura de células geneticamente e morfologicamente iguais. 2. Quais as principais técnicas de semeadura?

Semeadura por espalhamento, semeadura por estrias e semeadura em profundidade. 3. Qual a importância dos meios de cultura para o isolamento de microrganismos? Meios de cultura fornecem nutrientes necessários para o crescimento e o desenvolvimento de colônias....