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Caso de bioquímica...

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UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO FACULTAD DE MEDICINA HUMANA ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

BIOQUÍMICA PRÁCTICA – LABORATORIO SEMANA 07

NRC: 2858 HORARIO:

9:40am – 12:25pm DOCENTE: Cecilia Bardales ALUMNO: Mendoza Duque Elida Dayana

2021 Piura – Perú

LABORATORIO N° 7 CUANTIFICACIÓN DE GLICEMIA 1.

Introducción La glucosa es degradada por la vía glicolítica o almacenada como glucógeno en el hígado, músculo y otros tejidos, siendo exclusiva fuente de energía para el cerebro (salvo en ayuno de tres días que puede usar cuerpos cetónicos) y los glóbulos rojos, de ahí la importancia de mantener la glicemia entre ciertos límites que no afecten a esos tejidos. Esta regulación la realizan órganos como el hígado y riñón, que liberan glucosa en ayuno, o la conservan como glucógeno en el postprandial(hígado principalmente); por hormonas hipoglicemiantes como la insulina que actúa en el postprandial e hiperglicemiantes o antinsulínicas como el glucagon, hormona de crecimiento, cortisol, catecolaminas, ACTH que son hormonas del ayuno o del stress. La hiperglicemia se observa principalmente en la Diabetes mellitus y la hipoglicemia en diversas entidades como insulinoma, tratamiento con insulina o hipoglicemiantes, recién nacidos ,etc. La determinación de la glucosa sanguínea es el análisis bioquímico más frecuente en el laboratorio clínico. Se puede realizar en condiciones basales o ayunas de 8 horas, o en cualquier instante (al azar) , durante una tolerancia a la glucosa o 2 horas después de los alimentos (postprandial) Indicaciones: Su indicación y su aplicación más importante es el diagnóstico y evaluación de la diabetes mellitus (DM) en pacientes con síntomas o pacientes con factores de riesgo de DM, o en programas de despistaje de DM en la población general o en el riesgo quirúrgico. Igualmente en neonatología en la evaluación metabólica del RN. La diabetes mellitus afecta al 5 % de la población y aumenta con la edad. Se reconocen cuatro tipos de acuerdo a la OMS: •

DM tipo 1 por menor secreción de insulina que puede ser secundario a problemas inmunitarios o ser idiopática. Afecta generalmente a niños • DM tipo 2: varía entre resistencia a la insulina predominante con déficit relativo de insulina y defecto secretor de insulina predominante con resistencia a la insulina. Es la más frecuente, afecta generalmente a adultos

Otros: A. Defectos genéticos de la función de las células beta: MODY 1-6, DNA mitocondrial, subunidades de conducto de potasio sensible al ATP B: Defectos genéticos en la acción de la insulina C: Defectos de páncreas exocrino D: Endocrinopatías E: Fármacos F: Infecciones G: Formas infrecuentes H: Otros síndromes genéticos.

•

• 2.

DM gestacional.

Fundamento. El esquema de reacción es el siguiente: GOD glucosa + O2 + H 2 O --------ácido glucónico + H 2O2

POD 2 H2O2+ 4-AF + 4-hidroxibenzoato ------quinonimina roja GOD: glucosa oxidasa POD: peroxidasa 3.

Muestra Suero. En ayunas de 8 horas (basal) o en cualquier momento (al azar) o muestras del test de tolerancia a la glucosa o después de dos horas de comida (postprandial)

4.

Reactivos. Materiales Estándar : solución de glucosa 100 mg/dl (1 g/l). Reactivo A: solución conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4hidroxibenzoato en las siguientes concentraciones: GOD (microbiana) ≥ 10 kU/l POD (rábano) . ≥ 1 kU/l 4-AF 0,5 mmol/l Fosfatos 100 mmol/l, pH 7,0 Hidroxibenzoato 12 mmol/l

5.

Procedimiento Blanco Estandar

Standard 10 ul

Muestra Reactivo

Desconocido

10 ul 1 ml

1 ml

1 ml

Incubar 5 minutos a 37 ° en baño maría Luego leer a 505 nm en espectrofotómetro llevando a cero con el blanco 6.

Resultados Paciente 1 Absorbancia del Blanco: 0,00 Absorbancia del Estándar= 0,250 Absorbancia del Desconocido= 0, 400 Cálculos: Factor= 100 mg/dl 0,250 Factor= Concentración de glucosa del paciente = 0,400 x factor Concentración de glucosa del paciente= mg/dl Paciente 2 Absorbancia del Desconocido= 0, 300 Concentración de glucosa del paciente:

7.

Interpretación Paciente 1: Paciente 2

8.

Valores de referencia Una glicemia basal o en ayunas se considera normal de acuerdo al ADA de 70 a 99 mg/dl, en cambio la OMS señala de 70 a 110 mg/dl. • Alteraciones: alteración de la glicemia basal de acuerdo al ADA de 100 a 125 mg/dl y en la OMS de 111 a 125 mg/dl y diabetes si >=126 mg/dl. •

•

La glicemia al azar, es decir en cualquier momento del día, sin ayunas, según la ADA el único criterio es >=200 mg/dl

Curva estándar de glucosa. PROCEDIMIENTO 1)

Acceda al programa Physio Ex, mediante el siguiente enlace:

https://media.pearsoncmg.com/bc/bc_0media_ap/physioex/10/ex4/act2 2)

Pulse en la pestaña Experimento (Experiment) para comenzar, hasta que en

la pantalla aparezca el equipo para el trabajo. 3)

Arrastre un tubo de ensayo hasta la ranura (1) de la unidad de incubación, los demás tubos se colocan automáticamente.

4)

Arrastre el tapón cuenta gotas del frasco de la solución de glucosa estándar

(Glucose standard) hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añada una (01) gota. El tapón cuentagotas añadirá automáticamente la solución de glucosa a los restantes tubos de la unidad de incubación. (Fíjese en que cada tubo reciba una

gota más que el tubo anterior). 5)

Arrastre el tapón cuentagotas del frasco de agua destilada (Deionized Water) hasta el primer tubo de la unidad de incubación y dispense 4 gotas. El tapón cuentagotas dispensará automáticamente agua destilada a los restantes tubos de la unidad de incubación. (Fíjese en que cada tubo reciba una gota más

que el tubo anterior). 6)

Pulse en Mezclar (Mix) para mezclar el contenido de los tubos.

7)

Pulse en Centrifugar (Centrifugate) para centrifugar el contenido de los tubos. Cuando haya finalizado el proceso, los tubos subirán automáticamente. 8) Pulse en Eliminar precipitado (Remove Pellet) para eliminar el precipitado formado, puesto que puede contener restos de reactivos y residuos del ambiente del laboratorio.

9) Arrastre el tapón cuentagotas del frasco del Reactivo enzimático de color (Enzime

Color Reagent) hasta el primer tubo de la unidad de incubación y dispensa cinco (05) gotas cada uno de los cinco tubos 10)Pulse en Incubar (Incubate) para incubar el contenido de los tubos. La plataforma agitará suavemente los tubos de manera uniforme, mezclando así su contenido a lo largo de la incubación. 11)

Pulse en Ajustar (Set Up) en el espectrofotómetro para calentarlo y dejarlo listo para las lecturas de las muestras.

12)

Arrastre el tubo 1 hasta el espectrofotómetro.

13)

Pulse en Analizar (Analize) para analizar la muestra. Aparece un punto en

la pantalla que representa los valores de densidad óptica y concentración de glucosa en la muestra. Estos valores también aparecen en los indicadores de densidad óptica (Optical Density) y de glucosa (Glucose mg/deciliter).

14) Pulse Guardar Datos (Record Data) para mostrar los

resultados en la pantalla; el tubo se colocará automáticamente en el lavador de tubos de ensayo. Se analizarán las muestras en los tubos restantes siguiendo el mismo procedimiento. 15) Pulse en Gráfica de Glucosa Estándar

(Graph Glucose Stándar) para que aparezca la curva de glucosa estándar en la pantalla. Utilizarás esta gráfica en el

procedimiento 2

: Determinación de los Niveles de Glucosa Plasmática en ayunas. PROCEDIMIENTO 1)

Arrastre un tubo de ensayo hasta la ranura (1) de la unidad de incubación, los

demás tubos se colocan automáticamente. 2)

Arrastre el tapón cuenta gotas del frasco de la muestra de sangre del primer

paciente hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añade tres gotas. Las otras gotas de cada una de las muestras se colocan automáticamente. 3)

Arrastre el tapón cuentagotas del frasco de agua destilada (Deionized Water)

hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añada cinco gotas en cada uno de los tubos. 4)

Arrastre el tapón cuentagotas del frasco de hidróxido de Bario hasta el primer

tubo de la unidad de incubación y añada cinco gotas en cada uno de los tubos. 5)

Arrastre el tapón cuentagotas de heparina hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añada una gota en cada uno de los tubos. 6)

Pulse en Mezclar (Mix) para mezclar el contenido de los tubos.

7)

Pulse en Centrifugar (Centrifugate) para centrifugar el contenido de los tubos, Cuando haya finalizado el proceso de centrifugación, los tubos subirán automáticamente.

8)

Pulse en Eliminar precipitado (Remove Pellet) para eliminar el precipitado que se ha formado durante el proceso.

9)

Arrastre el tapón cuentagotas del frasco del Reactivo enzimático de color

(Enzime Color Reagent) hasta el primer tubo de la unidad de incubación y añade cinco gotas a cada uno de los tubos. 10)

Pulse en Incubar (Incubate) para incubar el contenido de los tubos. La plataforma agitará suavemente los tubos de manera uniforme, mezclando así su contenido a lo largo de la incubación.

11)

Pulse en Ajustar (Set Up) en el espectrofotómetro para calentarlo y dejarlo listo para las lecturas de las muestras.

12)

Pulse en Gráfica de Glucosa Estándar (Graph Glucose Stándar) para que

aparezca en pantalla la curva de glucosa estándar obtenida en el procedimiento 1. 13)

Arrastre el tubo 1 hasta el espectrofotómetro.

14)

Pulse en Analizar (Analize) para analizar la muestra. Aparece una línea

horizontal en el monitor para mostrar el valor de densidad (Optical Density) de la muestra. Este valor también aparece en el indicador de densidad óptica). 15)

Arrastre la regla móvil (línea roja vertical en el extremo derecho del monitor) hasta el lugar donde se cruzan la línea amarilla horizontal (densidad óptica de la muestra) y la curva de glucosa estándar. Observe lo que ocurre en el

indicador de Glucosa (Glucose) a medida que se mueve la regla. La glucosa plasmática en ayunas de este paciente será la concentración de glucosa que corresponda a la intersección de las líneas. 16)

Pulse Guardar Datos (Record Data) para mostrar los resultados en la

pantalla; el tubo se colocará automáticamente en el lavador de tubos de ensayo y el monitor se borrará (a excepción de la curva estándar de glucosa que permanece en la pantalla).

Se analizarán las muestras en los tubos restantes siguiendo el mismo procedimiento. 17) Pulse en Gráfica de Glucosa Estándar (Graph Glucose Stándar) para que aparezca la curva de glucosa estándar en la pantalla. Repite este paso hasta que

analice los cinco tubos.

9.

Cuestionario

1. ¿Cómo se obtiene el suero de un paciente para las pruebas bioquímicas? Análisis de sangre Conservación de la muestra Se pasa por la centrífuga Se va a diferenciar el suero y las células sanguíneas Se precipitan las células sanguíneas y el líquido que corresponde al plasma y al suero ascienden. 2. ¿Cuáles son las vías principales del metabolismo de la glucosa? La Glucólisis es la ruta metabólica mediante la que se degrada la glucosa hasta dos moléculas de piruvato, a la vez que se produce energía en forma de ATP y de NADH. Es una ruta metabólica universalmente distribuida en todos los organismos y células. Glucogenólisis Glucogenogénesis Vias del piruvato

3. ¿Cómo afecta el ayuno o el estado postprandial a las vías metabólicas de la glucosa? •

El ayuno produce que los procesos metabólicos vayan cambiando en sus características cualitativas y cuantitativas, de manera que se modifican los productos energéticos consumidos (glucosa, ácidos grasos libres y cuerpos cetónicos), disminuyendo globalmente su oxidación.

•

En el ayuno, se invierten los cambios metabólicos postprandiales que son: hiperglucemia, hipertrigliceridemia, aumento de los ácidos grasos libres circulantes, modificaciones hemodinámicas y aumento del estrés oxidativo. Tendiendo a la hiperglucemia y el organismo tiene que echar mano de sus reservas para obtener la energía necesaria para sobrevivir.

•

Cuando el organismo entra en fase de ayuno, el descenso adicional de la concentración de la glucosa plasmática motiva que las células a de esta glándula secreta glucagón.

•

Como respuesta, ante el aumento de glucemia con la comida, el organismo incrementa la síntesis y secreción de insulina, al tiempo que disminuye la de glucagón, para restaurar la normoglucemia a través de dos mecanismos: Disminuyendo la producción de glucosa hepática al disminuir la glucogenólisis y la gluconeogénesis; e incrementando la metabolización periférica de glucosa en el músculo esquelético (gluconeogénesis muscular) y en el tejido adiposo (uso de la glucosa para fabricar glicerol, que se usará en la producción de triglicéridos que se almacenan). 4. ¿Qué hormonas regulan la glicemia?

La epinefrina, el cortisol y la hormona de crecimiento son otras hormonas que ayudan a mantener los niveles de azúcar en sangre. Ellas, junto con el glucagón (ver arriba) se llaman hormonas del “estrés” o “contrarreguladoras de la glucosa”, lo que significa que hacen que se eleve el azúcar en sangre. Insulina: Función anabólica e incrementa el almacenamiento de glucosa, ácidos grasos y aminoácidos. Somatostatina: Inhibe la secreción de insulina y glucagón. 5. ¿Cuál es el valor normal de glicemia basal? Si se realiza en ayunas, es decir, al menos ocho horas después de la última comida, los valores de normalidad se sitúan entre los 70 y los 110 miligramos por decilitro de sangre. En los niños pequeños estos valores se sitúan entre 40 a 100 mg/dl. Es lo que se conoce como glucemia basal. 6. ¿Qué es la alteración de la glicemia basal? Las alteraciones de la glucemia basal se producen cuando este nivel sale del rango normal (70-140 mg/dl). Cuando la glucemia basal se sitúa entre los 140 y los 199 mg/dl se considera que existe una alteración de los niveles de glucosa en el organismo de tipo prediabético. Esto implica un riesgo latente de desarrollar una diabetes mellitus o diabetes tipo 2.

7. ¿Qué es la prediabetes? ¿Cuáles son sus componentes? La prediabetes significa que tienes un nivel de glucosa sanguínea más alto de lo normal. pero aún no es lo suficientemente alto como para ser considerado como

diabetes tipo 2, pero sin cambios en el estilo de vida, los adultos y niños con prediabetes son más propensos a desarrollar diabetes tipo 2 Componentes: Intolerancia a la glucosa Glucosa en ayunas alterada

8. ¿Qué es la diabetes y cuáles son sus tipos? Es una enfermedad crónica e irreversible del metabolismo en la que se produce un exceso de glucosa en sangre y orina. Existen 3 tipos: • • •

Diabetes tipo 1: Es la reacción auto inmunitaria que impide que el cuerpo produzca insulina. Diabetes de tipo 2: Es cuando el cuerpo no usa la insulina adecuadamente y no puede mantener el azúcar en la sangre. Diabetes gestacional: Afecta a mujeres gestantes y estas personas son más propensas a sufrir DM 2 más adelante.

9. ¿Cuál es la prevalencia de la diabetes y prediabetes en el Perú y otros países? La tasa de prevalencia por diabetes mellitus tipo 2 y prediabetes en Perú durante el periodo 2005 a 2018 en menores de 30 años se incrementó en más de 10 veces a partir de 2,1 a 22,1 casos por cada 100 000 habitantes. La tasa de prevalencia para el sexo femenino fue superior en todo el periodo de estudio, incrementándose de 5,3 en 2005 a 58,0 casos por 100 000 habitantes en 2018. 10. ¿Cuáles son los factores de riesgo para DM?¿Qué es el tamizaje de DM? Factores de riesgo para diabetes de tipo 1: Los antecedentes familiares Factores ambientales La presencia de células del sistema inmunitario que causan daños Factores de riesgo para diabetes de tipo 2: El peso Antecedentes familiares Edad Diabetes gestacional

Niveles anormales de colesterol y triglicéridos 11. ¿Qué es la diabetes gestacional? ¿Qué pruebas bioquímicas se realizan? La diabetes gestacional es un tipo de diabetes que aparece por primera vez durante el embarazo en mujeres embarazadas durante el segundo y tercer trimestre y que nunca antes padecieron esta enfermedad. En algunas mujeres, la diabetes gestacional puede afectarles en más de un embarazo. Al igual que con otros tipos de diabetes, la diabetes gestacional afecta la forma en que las células utilizan el azúcar (glucosa). La diabetes gestacional causa un alto nivel de glucosa sanguínea que puede afectar tu embarazo y la salud de tu bebé.

10.

Referencias Bibliográficas 1. Rodwell V, Bender D, Botham K, Kennelly P, Bioquímica Ilustrada, 31 ed, 2018, 185-194

Weil P.Harper.

2. ADA, estándares para Diabetes 2020 . Diabetes Care 3. Kasper D , Fauci A, Hauser S, Longo D, Jameson L, Loscalzo J. Ed, Harrison, Principios de Medicina Interna, Ed19 ed, 2016, McGraw Hill Interamericana Ed, Mexico, pg 2399-2422 4. Vademecum Wiener Lab, Rosario, Argentina 5. Huamán-Saavedra J. Laboratorio clínico. Procedimiento interpretacion , 2 edición Edit. Universitaria . Trujillo, 2018

e

6. Zao P, Stabler T, Smith L, Lokuta A, E Griff. Physio ExTM 9.0 Simulaciones de Laboratorio de Fisiología, España 2012.

Video: https://www.youtube.com/watch?v=vLOAQRxcWYs...