SDS: proces samenvatting PDF

Preview

Summary

samenvatting van het te kennen proces van SDS-page: gelelektroforese (practicum + examen)...

Description

SDS-page: extra info Gel electroforese is vaak gebruikte techniek  laat onderzoekers toe om eiwitten in complex mengsel te visualiseren (hoeveel verschillende, hoe zuiver is een bepaald eiwit,…) Elektroforese in DNA-moleculen, voor eiwitten is dat een polyacrylamide gel. Gevormd door polymerisatie van acrylamide (structuur niet vanbuiten te kennen, zit al een beetje cross linker in). De polymerisatie-reactie waarbij een polyacrylamide ontstaat met cross linkers  ontstaan van een soort net. Heeft eigenschappen van een zeef voor eiwitsegregatie op basis van MM. nog 2 katalysatoren toegevoegd: TEMED en persulfaat. In practicum: kijk ook is naar alle bufferelementen, probeer dat in vraag te stellen! Eiwitstaal wordt opgelost in loading buffer (bevat SDS  gaat niet-covalente interacties in eiwitten doorbreken, waardoor alle eiwitten gaan ontvouwen worden terug lange slierten; en een reducerend agens  gaat disulfidebruggen verbreken Dit betekent dat eiwit niet alleen ontvouwen is, maar dat er om de 2 AA’s een SDS gebonden zal zijn. Hierdoor is het een soort negatief geladen sliert (er is zodanig veel SDS aan gebonden). Alle eiwitten in het staal gaan een negatieve lading hebben. Hoe groter eiwit hoe meer SDS-bindingsplaatsen, hoe groter de negatieve lading zal zijn. Nadien zullen eiwitten onder spanningsveld (elektrisch veld) geplaatst worden, waardoor er beweging ontstaat van de eiwitten. We laden het in verschillende slotjes met pipetten. Aan de bovenkant zit er een anode, aan de onderkant is er een kathode, dus de eiwitten gaan migreren naar de positieve kathode. Zo krijgen we een scheiding op basis van hun grootte (de polyacrylamide was een soort zeef), waardoor kleine eiwitjes veel sneller door gel zullen kunnen gaan.  grootste eiwitten vanboven, kleinste eiwitten vanonder. Nadien zal er kleuring toegevoegd worden, waardoor eiwitten gevisualiseerd kunnen worden. Er is een verband tussen MM en de migratie van het eiwit. Op basis daarvan kan er een schatting gemaakt worden van MM. Om dit te kunnen doen, is er een standaard nodig (mengsel van eiwitten met gekend MM)....