Tema 8.3. - cultivo prolongado de embriones PDF

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En este año académico, la asignatura solo se ofertaba en castellano. Pero es el mismo temario en ambos idiomas...

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TEMA 8.3.: TÉCNICAS AVANZADAS EN EL LABORATORIO DE EMBRIOLOGÍA CLÍNICA CULTIVO PROLONGADO DE EMBRIONES Cultivo largo Consiste en el cultivo del embrión hasta el quinto o sexto día de desarrollo, lo cual nos dará una mayor información y podremos realizar una mejor selección embrionaria. Por lo tanto, se usa para hacer una selección más estricta de la calidad del embrión (o embriones) a transferir. Se suele realizar cuando en día 3 se tienen entre 3-4 embriones de buena calidad (A y B). En este tipo de cultivo, el embrión debe llegar hasta el estadío de blastocisto. Hay una serie de cambios continuos que se clasifican en estadíos que muchas veces solapan o son de difícil interpretación. Tendremos una serie de estadíos:  

Mórula: es un embrión de 16 células sin compactar del todo. Presente en día 4. Mórula compacta: embrión en el que no se distinguen las células entre sí. tampoco se distingue el blastocele (cavidad) o las células de trofoectodermo. Presente en día 4 o 5.

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Blastocisto temprano: se distinguen células planas del trofoectodermo (TF) en la superficie del embrión y una cavidad menor al 50% del volumen del embrión. Presente en día 4 o 5. Blastocisto cavitado: se distingue claramente el trofoectodermo y un blastocele que ocupa el 50% o más del embrión. El diámetro del embrión sigue siendo el mismo hasta este momento, de aproximadamente unas 140 micras. No siempre se distingue la masa celular interna (MCI). Estadío típico de día 5.

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Blastocisto expandido: se distingue el trofoectodermo, la cavidad y la masa celular interna. El diámetro es mayor de 150 micras y la zona pelúcida se vuelve más fina. Se aprecia en día 5 o 6.

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Blastocisto iniciando eclosión (BHi): es un blastocisto expandido en el que se distingue una hernia por donde está comenzando la eclosión. Presente en día 6.

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Blastocisto eclosionado (BH): el blastocisto está totalmente fuera de la zona pelúcida. Normalmente, ocupa un diámetro de unas 300 micras o más. Este es el estadío más tardío que se puede mantener in vitro, está presente en el día 6.

En resumen, los estadíos pueden ser: en día 4, tendremos mórula compacta, aunque también podremos tener mórula (va lenta) o un blastocisto temprano (va rápido). En día 5, tendremos blastocisto cavitado o expandido, aunque si va lento podemos tener un blasto temprano, y si va rápido, un blasto eclosionando. En día 6, tendremos un blastocisto iniciando la eclosión o uno ya eclosionado, aunque si va lento podremos tener un blasto expandido.

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Masa celular interna y trofoectodermo La morfología de la masa celular interna y del trofoectodermo se usa como criterio de calidad del embrión. En el caso de la masa celular interna: A: células muy compactas B: hay compactación, pero se distinguen las células, que están agrupadas. C: hay pocas células o la masa celular no es visible D: hay células degeneradas

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En el caso del trofoectodermo:    

A: hay muchas células y el epitelio está tabicado y compacto B: hay pocas células, de distinto tamaño (hay calvas en el trofoectodermo) y el epitelio es compacto C: hay pocas células y el epitelio está suelto. D: hay células degeneradas

La calidad final del embrión corresponde a la letra más baja.

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La implantación fisiológica es en el día 7 ± 1, por lo que solo en casos excepcionales se espera hasta el día 6 para realizar la trasferencia. Legalmente, el máximo de días que se puede cultivar un embrión humano son 14 días. Métodos de cultivo largo Pueden realizarse dos métodos diferentes de cultivo largo: medios secuenciales o cocultivo. 

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Medios secuenciales: tienen en cuenta el hecho de que el embrión atraviesa distintos ambientes desde que es fecundado en la trompa de Falopio hasta que alcanza el útero. Los medios secuenciales se componen de tres tipos de medios: un medio para la preparación de los gametos (medio simple), otro para el desarrollo hasta el día 3 (medio G1) y un tercero para alcanzar la fase de blastocisto (medio G2). Estos medios están optimizados para el desarrollo de los embriones hasta blastocisto pero son más sensibles a la temperatura, y por lo tanto más inestables. Por lo tanto, tienen a favor que son sencillos, pero tienen en contra que la variabilidad y la inestabilidad del sistema. Cocultivo sobre monocapa de células endometriales: tienen a favor que son estables y en contra que son laboriosos y tienen un alto riesgo de contaminación, ya que necesitan de un cultivo previo de la monocapa endometrial.

Ventajas e inconvenientes del cultivo largo Las ventajas de este método son: 

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Permite seleccionar mejor al embrión: cuanto más largo sea el cultivo, más podremos seleccionar, pero siempre existe el riego de que nos quedemos sin transferencia (sin embriones). Es más adecuado el momento y el lugar de la transferencia La tasa de implantación es mayor (mayor al 50%) Recomendado para la transferencia de embrión único Mientras que las desventajas son:

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Riesgo de bloqueo embrionario: se recomienda que haya al menos 3 embriones de buena calidad en día 3 para seguir. Lo más habitual es que los embriones pierdan calidad a lo largo del cultivo, es muy raro que la adquieran. Menos embriones supernumerarios o congelables Riesgo de comprometer la viabilidad del embrión en el laboratorio

Transferencia La transferencia se hace en día 5 si hay embriones de buena calidad (A o B) o se llevan a día 6 si no tenemos embriones de buena calidad. Para que no haya problema de implantación, cuanto más tarde se transfiera en día 5, mejor. O cuanto más temprano en día 6.

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Si en día 5 nos quedamos sin embriones en fresco y se descongelan embriones de día 3, cuando esos embriones lleguen a día 5, el útero de la paciente ya estará en día 7, por lo que habrá una desincronización.

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