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MEDIOS DE CULTIVO Magdall Desiree Noj Moreno

AGAR SELECTIVO CLOSTRIDIUM USO: El ClostridIum Difficile Selective Agar, es un medio selectivo y diferencial para aislamiento primario de Clostridium difficile de muestras fecales . FORMULA: La formulación del presente medio, permite las mayores recuperaciones de C. difficile y la inhibición de la flora acompañante, con respecto al original CCFA. La presencia del Rojo neutro, en el crecimiento del C. difficile permite ponerlo de evidencia por un cambio de pH y por tanto cambio de color a amarillo. Este medio consigue estimular el crecimiento del C. difficile mediante las fuentes de nitrógeno de las peptonas y de azúcares del Manitol. Los aminoácidos presentes en el medio son utilizados por el C. difficile se incrementa el pH , pasando el medio y las colonias de rosa a amarillo. La Cefoxitina y la Cicloserina, son agentes inhibidores de la flora fecal normal, con actividad frente a aeróbicos, anaeróbicos y anaeróbicos facultativos. CARACTERISTICAS y LIMITACIONES DE USO: Las colonias de C. difficile pueden presentar una zona alrededor de la colonia de color amarillo de dos a tres milímetros dependiendo del tamaño de la colonia y el tiempo de incubación. Cuando las colonias se exponen a la atmósfera normal, puede cambiar el color a rosa y disminuir su fluorescencia a la luz ultravioleta. Algunos microorganismos anaeróbicos facultativos pueden producir reacciones similares al C. difficile, de forma que se aconseja realizar un cultivo en paralelo en un medio adecuado en condiciones aeróbicas , con el objeto de asegurar que las colonias aisladas corresponden a un anaerobio estricto. Para la completa identificación del C. difficile son necesarias pruebas complementarias, tinción de Gram, análisis de morfología celular, sensibilidad al oxígeno, sensibilidad a antibióticos. Bartlett, J.G., T.W. Chang, M. Gurwith, S.L. Gorbach, and A.B. Onderdonk. 1978. Antibiotic-associated pseudomembraneous colitis due to toxin-producing clostridia.

AGAR SANGRE KANAMICINA-VANCOMICINA USO: El Agar Schaedler Kanamicina-Vancomicina con 5% de sangre de carnero, es un medio muy nutritivo y selectivo para el aislamiento de micocroorganismos exigentes anaeróbicos Gramnegativos, incluidos Bacteroides y especies de Prevotella.

Formula: La base del A.S.K.V.S es el agar Schaedler, medio altamente nutritivo desarrollado para obtener crecimientos de anaerobios estrictos, la presencia de Hemina y Vitamina K1 aporta factores de crecimiento conjuntamente con la sangre de carnero al 5% para el crecimiento de los anaerobios Gram negativos. La combinación de los antibióticos Kanamicina y Vancomicina, descrito por primera vez por Finegold y cols., permiten un aislamiento selectivo de los anaerobios estrictos Gram-negativos, la Kanamicina inhibe los bacilos anaeróbicos facultativos y la Vancomicina inhibe a las bacterias Gram positivas. La peptonas presentes , de tres orígenes, son fuentes de nutrientes, la Glucosa aporta la fuente energética inmediata, la presencia del buffer está justificada para evitar las disminuciones de pH durante la fermentación de la glucosa. El extracto de levadura es fuente de vitaminas y el cloruro sódico aporta los electrolíticos necesarios. La selectividad del medio gracias a la presencia de los antibióticos, permite el aislamiento selectivo de anaerobios estrictos Gram negativos como son el Bacteroides y la Prevotella. Finegold, S.M., A.B. Miller, and D.J. Posnick. 1965. Further studies on selective media for Bacteroides and other anaerobes. Ernährungsforschung 10:517-528.

AGAR CHOCOLATE USO: El Agar Chocolate es un medio no selectivo para cultivo y aislamiento de microorganismos exigentes, especialmente de Neisseria y Haemophilus spp de muestras clínicas FORMULA: Carpenter y Morton describieron un medio para el aislamiento de gonococcus en veinticuatro horas. La base del Agar Chocolate contiene caseína y peptonas seleccionadas como fuentes de nitrógeno, con un pH controlado , la hemoglobina aporta la hemina (factor X) y el suplemento vitamínico que aporta entre otros el factor V ( nicotinamida adenina dinucleótido), esencial para las diferentes especies de Haemophilus, además de vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa, factores esenciales para el crecimiento de Neisserias patógenas y otros microorganismos exigentes. Carpenter, C.M., and H.E. Morton. 1947. An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27:58-60 .

AGAR CHOCOLATE CON ISOVITALEX Y BACITRACINA USO: El Chocolate Agar con Isovitalex y Bacitracina, es un medio moderadamente selectivo para el aislamiento y cultivo de Haemophilus influenzae originario de muestras clínicas del aparato respiratorio. EL H. influenzae es sensible a las condiciones ambientales adversas , por lo que deben usarse medios de transporte adecuado, y sembrar los medios antes de 24 horas, teniendo en cuenta de mantener la muestra a 20 – 25ºC, y no refrigerar. Las pruebas bioquímicas o serológicas adicionales son necesarias para la definitiva identificación de este microorganismo aislado en este medio. Este medio no debe utilizarse para el aislamiento primario de H. influenzae de muestras de fluido cerebroespinal. Aunque posee los inhibidores de flora de la muestra, no se inhibe el crecimiento completamente de algunas especies de Neisseria orales, asi como de Actinobacillus actinomycetemcomitans y algunos Staphylococcus. PRINCIPIO: Muchas especies de Haemophilus forman parte de la flora respiratoria normal en el ser humano, pero algunos serotipos, sobre todo el “b” y “f” pueden ser causantes de meningitis, sepsis y otras importantes infecciones. El H. influenzae es uno de los tres agentes causantes más importantes de las meningitis bacterianas a nivel mundial. Los medios para el crecimiento de Haemophilus, requieren sangre de carnero, además de los factores X ( hemina) y V ( NAD). La base de este medio es el GC Chocolate Agar base. La presencia de Bacitracina, consigue la inhibición de la mayor parte de la flora acompañante, mientras que el Haemophilus es resistente a este agente selectivo. Downes, F.P., and K. Ito. 2001. Compendium of methods for the microbiological examination of foods. 4th edition. American Public Health Association (APHA). Washington, D.C. USA .

AGAR DESOXICOLATO CITRATO

USO: Medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella y Shigella. El desoxicolato sódico inhibe o suprime considerablemente el crecimiento de coliformes y

bacterias Gram positivas. Sin embargo, en ocasiones crecen coliformes, y cuando se encuentran en grandes cantidades producen ácido a partir de la lactosa, precipitan la sal biliar y dan un medio rojo que hace difícil la detección de patógenos. Incluye rojo neutro como indicador. Las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras. AGAR CIN USO: (agar selectivo para Yersinia BD: agar CIN [Cefsulodina-Irgasan-Novobiocina]) es un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento de Yersinia enterocolitica y BD Aeromonas Yersinia Agar (agar para Aeromonas y Yersinia BD) es un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento de Yersinia enterocolitica y Aeromonas spp. A partir de diversas muestras clínicas y no clínicas. PROPIEDADES: BD Yersinia Selective Agar fue descrito por primera vez por Schiemann como una alternativa al agar MacConkey y otros medios comúnmente utilizados para el aislamiento de Yersinia enterocolitica, un agente causante de gastroenteritis Se ha determinado que este medio es superior a los agares MacConkey, SS, CAL y Y favorece el crecimiento de no sólo la especie Yersinia enterocolitica sino también de Aeromonas (que también puede causar enteritis) dado que presenta un contenido reducido de cefsulodina. La fermentación de manitol en presencia de rojo neutro crea el aspecto característico de “ojo de toro” de las colonias de Y. enterocolitica incoloras con centros de color rojo en ambos medios. La inhibición selectiva de organismos gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal violeta, desoxicolato sódico y los agentes antimicrobianos: cefsulodina, Irgasan (Triclosan) y novobiocina Schiemann, D.A. 1979. Synthesis of a selective agar édium for Yersinia enterocolitica. Can. J. Microbiol. 25:1298-1304.

AGAR BCYE USO: Agar de carbón tamponado y extracto de levadura, se utiliza especialmente para la detección de Legionella. Medio rico suplementado con L-cistina y pirofosfato férrico que permite el crecimiento y enriquecimiento de especies de Legionella. Cuando se le añade polimixina B, vancomicina y anisomicina es selectivo para Legionella y Nocardia, ya que inhibe bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente . Diagnostico microbiológico bayles y scott’s

AGAR BHI USO: BD Brain Heart Infusion (BHI) Agar es un medio de uso general adecuado para el cultivo de una amplia variedad de tipos de organismos, incluidos las bacterias, levaduras y hongos filamentosos, a partir de muestras clínicas. Este medio se utiliza para el aislamiento y cultivo de una amplia variedad de hongos, incluidos los causantes de micosis sistémicas, Actinomycetales aerobia (por ejemplo, Rhodococcus y Tsukamurella), además de determinadas bacterias exigentes2,3,5. No se recomienda utilizarlo como medio de uso general para bacterias y hongos. Debido a la naturaleza no selectiva de BD Brain Heart Infusion (BHI) Agar, las muestras con un alto nivel de contaminación de flora normal también deben extenderse en medios selectivos apropiados para evitar el crecimiento excesivo de los organismos contaminantes Si se sospecha la presencia de organismos exigentes cuya necesidad de sangre para crecer es conocida, debe utilizarse BHI Flores, M., and D. Welch. 1992. Section 6. Mycology: culture media, p.6.7.1-6.7.3. In : H.D. Isenberg (ed.), Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

AGAR COLUMBIA CON SANGRE DE CABALLO BD Columbia Agar with 5% Horse Blood es un medio muy nutritivo de uso general para el aislamiento y el cultivo de microorganismos exigentes y no exigentes a partir de muestras clínicas. La sangre de caballo permite detectar las reacciones hemolíticas y suministra el factor X (hemo) y el factor V (nicotinamida adenina dinucleótido, NAD), necesarios para el crecimiento de numerosas especies bacterianas, incluido Haemophilus influenzae, que requiere ambos factores, X y V. El agar sangre Columbia posee un contenido relativamente elevado de carbohidratos y, por tanto, los estreptococos beta-hemolíticos pueden producir una reacción hemolítica verdosa que se podría confundir con una alfahemólisis. El agar Columbia suplementado con sangre de caballo proporciona una beta-hemólisis más definida de estreptococos que el agar Columbia con sangre de carnero. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45: 502-504.

AGAR COLUMBIA Es una excelente base para el crecimiento de microorganismos exigentes y para la buena visualización de hemólisis con el agregado de sangre. Incluye peptona, tripteína, extracto de levadura y extracto de corazón que favorecen el desarrollo de microorganismos exigentes. El almidón incrementa el desarrollo de neiserias y las reacciones de hemólisis de algunos estreptococos. Tiene la ventaja de permitir la adición de sangre o de antibióticos entre otras cosas, obteniéndose así un medio más enriquecido o selectivo de acuerdo al aditivo. Examinación de productos no esteriles. Examen para microorganismos específicos ( farmacopedia de estados unidos ESP 31)

AGAR BHI CON SANGRE DE CARNERO Estos medios se utilizan en procedimientos cualitativos para el aislamiento y el cultivo de hongos patógenos y no patógenos a partir de muestras clínicas y no clínicas. El agar infusión cerebro-corazón con 5-10% de sangre de oveja adicionado de cloranfenicol y gentamicina inhibe el crecimiento de bacterias, pero permite el crecimiento de hongos, incluso de los más exigentes. Este agar se emplea como medio de aislamiento primario para el crecimiento de hongos, ya que permite una mejor recuperación de patógenos que el agar glucosa de Sabouraud Koneman, E.W., S.D. Allen, W.M. Janda, P.C. Schreckenberger, and W.C. Winn, Jr. 1997. Mycology, p. 983-1069. Color atlas and textbook of diagnostic microbiology, 5th ed. LippincottRaven Publishers, Philadelphia.

AGAR CAMPY CON SANGRE Medio selectivo para el aislamiento de especies de Campylobacter. El medio está suplementado con sangre y con cefoperazona, vancomicina y anfotericina B para inhibir el desarrollo de la mayoría de las bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente. Se trata de un medio estándar para el aislamiento de Campylobacters resistentes a la cefalotina, a partir de muestras fecales como C. jejuni, C. coli, y C. lari

AGAR CHOCOLATE CON ISOVITALEX Y VANCOMICINA Medio selectivo modificado para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis a partir de muestras clínicas que contienen microbiota mixta de bacterias y hongos. La vancomicina es activa frente a bacterias Gram positivas. BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin contiene hemoglobina, que suministra hemo y BD IsoVitaleX, que aporta NAD (nicotinamida adenina dinucleótido) y otras vitaminas. La base de agar chocolate GC II proporciona nutrientes generales Kilian, M. 2003. Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

AGAR MACCONKEY Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se observa fácilmente en el medio por la aparición de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes BD MacConkey II Agar es un medio de diferenciación selectivo para el aislamiento y la diferenciación de Enterobacteriaceae y diversos otros bacilos gram negativos a partir de muestras clínicas. MacConkey, A.T. 1900. Note on a new medium for the growth and differentiation of the Bacillus coli communis and the Bacillus typhi abdominalis. The Lancet, Part II:20.

AGAR SANGRE (AS Ó BA, BLOOD AGAR) Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos con importancia clínica excepto el de los más exigentes. Se prepara añadiendo un 5% de sangre desfibrinada (oveja, caballo, conejo, etc.) a un agar base rico (agar Columbia, por ejemplo). Se utiliza también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos, por lo que se considera un medio diferencial. Ciertas bacterias producen enzimas extracelulares que actúan sobre los glóbulos rojos. Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que poseen: alfa, beta o gamma. Para leer con exactitud la hemólisis producida, se debe levantar la placa de agar sangre y observarla contra la luz. La hemólisis de tipo alfa es una hemólisis incompleta, caracterizada por la destrucción parcial de la membrana de los eritrocitos y pérdida de algo de hemoglobina en el agar. A simple vista este tipo de hemólisis se detecta por la aparición de una coloración verdosa alrededor de la colonia. La beta-hemólisis se caracteriza por la destrucción total de la membrana por lo que se detecta por la aparición de un halo transparente alrededor de la colonia. Cuando los microorganismos no producen ningún tipo de hemólisis se dice que son gammahemolíticos. Revista Britania, medios de cultivo, referencia b1240427

AGAR SANGRE CON DISCO DE BACITRACINA Se utiliza para la identificación de estreptococos beta-hemolíticos del grupo A de Lancefield ya que estos son sensibles a la bacitracina a la concentración que se encuentra en los discos (0,04 U). El antibiótico no inhibe el desarrollo de otros estreptococos betahemolíticos. Sobre la placa de agar sangre se coloca un disco con bacitracina y tras la incubación se observa la presencia de halo de inhibición (estreptococos beta-hemolíticos presuntamente del grupo A) o la ausencia del mismo (estreptococos beta-hemolíticos que presuntamente no pertenecen al grupo A). Revista Britania, medios de cultivo, referencia b1240427

AGAR SANGRE CON ESTRÍA ESTAFILOCÓCICA Muchas bacterias y levaduras sintetizan y secretan NAD (factor V) durante el crecimiento, tal es el caso de Staphylococcus aureus. En cultivos mixtos, las especies de Haemophilus que requieren este factor pueden crecer como colonias puntiformes alrededor de las colonias de estos otros microorganismos (satelitismo). Esto proporciona una técnica para detectar especies de Haemophilus en muestras mixtas y una prueba presuntiva para la identificación del género. La técnica consiste en sembrar una posible colonia de Haemophilus en estría (como un césped) en agar sangre. Posteriormente, se hace una única estría sobre la placa con un cultivo de S. aureus. A las 24 horas pueden observarse las pequeñas colonias grises de Haemophilus dentro del área hemolítica adyacente al crecimiento de los estafilococos. Baron, E.J., L.R. Peterson, and S.M. Finegold. 1994. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 9th ed. Mosby-Year Book, Inc., St. Louis.

AGAR CON SANGRE ESTRICTO PARA ESTREPTOCOCOS agar selectivo BD para estreptococos del grupo A con sangre de carnero al 5%) es un medio selectivo para uso en el aislamiento e identificación presuntiva de estreptococos del grupo A a partir de cultivos faríngeos y otras muestras clínicas. La infección con estreptococos del grupo A Lancefield ( Streptococcus pyogenes) puede dejar secuelas graves tales como fiebre reumática y glomerulonefritis aguda. Por tanto, son importantes la detección e identificación tempranas. Debido al crecimiento excesivo de la flora presente en las muestras de cultivo faríngeas colocadas en placas de agar sangre comunes, se han añadido elementos selectivos al agar sangre de carnero para favorecer la detección de los estreptococos del grupo A. La evaluación de diversos agentes antimicrobianos en nuestros laboratorios dio como resultado una combinación con mejor selectividad, en comparación con otros medios selectivos analizados. Este medio (ssA) permite la identificación presuntiva de los estreptococos del grupo A, según la sensibilidad a la bacitracina y beta-hemólisis, dentro de las 24 h siguientes a la inoculación con la muestras cuando el medio es incubado en atmósfera enriquecida con dióxido de carbono Evans, G.L., and T.E. O’Neill. 1984. Development of an improved selective medium for the isolation of group A streptococci from throat cultures, Abstr. C-136, p. 259. Abstr. 84th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1984.

AGAR MANITOL SALADO BD Mannitol Salt Agar se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos y para la detección de Staphylococcus aureus a partir de muestras clínicas El agar sal manitol en una fórmula diseñada por Chapman para la diferenciación de estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) de los estafilococos negativos a la coagulasa. Este agar se utiliza para el aislamiento de estafilococos a partir de muestras clínicas, de cosméticos y de pruebas de límite microbiano. El agar sal manitol contiene peptonas y extractos de carne bovina, que suministran los nutrientes esenciales. Una concentración de cloruro sódico de 7,5% tiene como resultado una inhibición parcial o completa de los organismos bacterianos diferentes de los estafilococos. La fermentación de manitol, indicada por el cambio del indicador de rojo fenol, facilita la diferenciación de la especie de estafilococos. Los estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aure...