Elaboración de medios de cultivo PDF

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Medios de cultivo...

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1. INTRODUCCIÓN

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Elaboración de Medios de Cultivo Flores Joselyn, Pallo Tannya, Paz Raúl

Escuela Politécnica Nacional, Facultad de Ingeniería Química y Agroindustria, Quito, Ecuador Resumen: un medio de cultivo se puede definir como una mezcla o solución que contiene todos los requerimientos nutricionales necesarios para que un microorganismo pueda desarrollarse. El objetivo de este informe es comparar los métodos de elaboración de medios de cultivo realizados de forma casera y en laboratorio. El medio preparado en casa fue realizado a partir de gelatina sin sabor, caldo de gallina y agua, mientras que el medio de cultivo YPD, utilizado en laboratorios, se realizó a base de extracto de levadura, peptona, dextrosa y agar. Ambos procedimientos fueron realizados de tal forma que se evite la contaminación de los mismos ya que posteriormente servirán para la siembra de levaduras. Se puede concluir que los dos medios servirán para el crecimiento de levaduras, sin embargo, estas tendrán un mejor desarrollo en el medio YPD puesto que en este cuentan con todos los nutrientes que requieren para crecer. Por otra parte, las levaduras podrán crecer en el medio casero pero hasta cierto punto ya que la composición del medio las limitará. Palabras clave: Medio de cultivo, levaduras, gelatina, caldo de gallina, YPD.

Title of Manuscript Abstract: Keywords:Include a list of 3 to 6 words. Un medio de cultivo corresponde a una solución o mezcla de compuestos que tengan un aporte nutricional y energético para los microorganismos, de tal manera que se pueda garantizar el crecimiento y desarrollo de material celular del cual están compuestos los microorganismos. Existen diversos tipos de medios de cultivo, los más generales son los medios complejos y los medios definidos; en un medio definido se conoce la composición exacta sobre los ingredientes que conforman el cultivo, mientras que en un medio de cultivo complejo no se puede determinar su composición de manera precisa debido a que son medios nutritivos formados a partir de productos animales, vegetales o prefabricados (Madigan, 2015).

1Colocar el correo electrónico del autor de correspondencia.

Como objetivo general se tiene la preparación de un medio de cultivo complejo realizado a partir de gelatina sin sabor con cubo de caldo de gallina para el crecimiento de levadura. Cabe recalcar que la gelatina sin sabor contiene alrededor del 92% de colágeno y el restante corresponde a sales minerales (INEN, 2014). Por otra parte, el caldo de gallina es un cubito deshidratado que en composición general contiene grasas, especies, condimentos, sal, verduras y proteínas hidrolizadas en los extractos de carne (Instituto Ecuatoriano de Normalización, 2012). Existe un inconveniente al momento de determinar el crecimiento de un microorganismo en medios complejos que es su eficiencia de crecimiento, se puede garantizar su desarrollo debido a que se aportan los nutrientes elementales que están conformados por C, N y de igual manera con fuentes energéticas y de sales, sin embargo, se desarrollará de manera mucho más lenta de lo que se esperaría al momento de trabajar con un medio definido (Madigan, 2015). El medio de cultivo recomendado e ideal para el desarrollo de levaduras se lo conoce como YPD, extracto de levadura (1% p/v), peptona (2% p/v) y dextrosa (2% p/v) o por sus siglas en inglés (Yeast Peptone Dextrose). Para preparar dicho medio se agregan y se mezclan todos los ingredientes hasta conseguir una solución homogénea (Riera, 2019). Las levaduras necesitan fuentes de carbono orgánico (1844%), nitrógeno (4-8%), potasio (1-3%), fosforo (1-3%), zinc (0.4%) y vitaminas trazas. Como fuente de Carbono tenemos los azucares esenciales como glucosa, el cual se encuentra en la Dextrosa que es similar a un azúcar común hecho a partir de maíz. Como fuente de Nitrógeno óptima tenemos los iones de amonio, sin embargo, se utilizan los péptidos o aminoácidos libres que se encuentran en la peptona. Como fuente de los minerales restantes y vitaminas se utiliza el extracto de levadura (Uribe, 2007). 2. METODOLOGÍA Para los medios de cultivo elaborados en casa primero se pesó 5 gramos de caldo de gallina, 10 gramos de gelatina sin sabor y se midió 150 mL de agua. Con estas cantidades las concentraciones corresponden a 3,33 g/mL para el caldo de gallina y 6,67 g/mL para la gelatina sin sabor. Para la hidratación de la gelatina se agregó 5 mL del volumen total y se agitó manualmente. Posteriormente se agregó el caldo de gallina y se completó con los 145 mL de agua, se mezcló y se colocó en ebullición durante 15 min con una olla tapada. Transcurrido el tiempo, se dejó enfriar la mezcla alrededor de 10 minutos y se procedió a dosificar en las cajas Petri previamente esterilizadas. Se dejó solidificar por una hora aproximada y finalmente se colocó en refrigeración. Por otra parte, para la preparación de 175 mL del medio YPS, se pesó 1,75 gramos de extracto de levadura correspondiente al 1% (p/v) y 3,5 gramos de peptona y dextrosa correspondientes al 2% (p/v) cada una. Luego se colocó en un matraz Erlenmeyer y se calentó y agitó constantemente

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por 10 minutos aproximadamente. Por último, se esterilizó en una autoclave por una hora. 3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Se obtuvieron 2 medios de realizado en laboratorio que segundo una mezcla entre gallina preparado en casa, repeticiones realizadas por presentan en la Figura 2.

cultivo, el primero es un YPC se presenta en la Figura 1 y el gelatina sin sabor y caldo de para este se realizaron varias tres personas, las mismas se

simplemente se conoce que la gelatina es 92% colágeno y 8% de sales, mientras que el caldo de gallina presenta 27.9% de hidratos de carbono, 10 % de proteínas y 8.8% de lípidos, pero esta composición puede variar de acuerdo a la marca, por lo que podría crecer la levadura, pero también cualquier otro microorganismo si no se tiene el respectivo cuidado (Nestlé, 2021). 4. CONCLUSIONES El medio YPD es el mejor medio de cultivo para la levadura, debido a su composición definida, al contrario del medio casero que es una mezcla compleja. La metodología usada para la formación del medio casero fue correcto, pues se obtuvieron medios sólidos, no infectados y con buena consistencia. El crecimiento de las levaduras en el medio casero dependerá, de la técnica aséptica que se maneje durante el cultivo, porque este es un medio complejo fácil de infectarse. REFERENCIAS [1]. INEN. (2014). Postre de Gelatina. Recuperado de https://www.normalizacion.gob.ec/buzon/normas/nte _inen_1521.pdf (Junio, 2021)

Figura 1. Medio YPD

[2]. Instituto Ecuatoriano de Normalización. (2012). Sopas, Caldos y Cremas. Recuperado de https://181.112.149.204/buzon/normas/nte_inen_260 2.pdf (Junio, 2021) [3]. Madigan, M. (2015). Brock, biología de los microorganismos. Madrid, España: Pearson Educación.

Figura 2. Medio de gelatina y caldo de gallina

De acuerdo a lo obtenido se puede observar que los medios de cultivos realizados en casa han mantenido su consistencia sólida, no ha crecido ningún microorganismo a pesar de ser un medio complejo, por lo que se ha practicado correctamente las técnicas asépticas y no se muestran restos de grasa propios del caldo de gallina. Sin embargo, estas muestran unas precipitaciones de “hierbitas” un componente del caldo de gallina, los cuales a pesar de haber pasado por un tamizado no se pudieron separar de la mezcla. Además, se muestran tonalidades diferentes, por ejemplo, en la Figura 2 sección A y B se muestran más amarillas que el C y el medio YPC, pero esta característica no afectará al momento de observar el crecimiento de levadura y esta diferencia se debe al uso de marcas diferentes. El medio YPD es ideal para el cultivo de levadura, por su composición definida de dextrosa, extracto de levadura y peptona, que le darán al microorganismo los requerimientos necesarios para su crecimiento y desarrollo. Al contrario, la mezcla de gelatina y caldo de gallina es un medio complejo, del cual no se conoce exactamente su composición,

[4]. Nestlé, (2021). Caldo de gallina en polvo: Información nutriconal. Obtenido de: https://www.nestleprofessionallatam.com/alimentos/productos-culinarios/maggicaldo-de-gallina-en-polvo (Junio, 2021) [5]. Riera, A. (2019). Serie Didactica de las ciencias Experimentales (primera ed.). Barcelona, España: GRAO. [6]. Uribe, L. (2007). Caracterización fisiológica de levaduras aisladas de la filósfera de mora. Proyecto de titulación previo a la obtención del titulo de Microbióloga Industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá, Colombia. Recuperado de https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/ 10554/8298/tesis276.pdf?sequence=1&isAllowed=y...