Tecnicas DE Esterilización Y Medios DE Cultivo PDF

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Tecnicas de esterilizacion y su uso en laboratorio microbiologico...

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“TECNICAS DE ESTERILIZACIÓN Y MEDIOS DE CULTIVO” Gerardo Cabrera Arroyo

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN La esterilización es un proceso a través del que se logra la destrucción total de los microorganismos viables presentes en un determinado material. Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo microbiológico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilización de materiales estériles. CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

Los métodos mediante los cuales se realiza la esterilización pueden ser clasificados de dos tipos: Físicos y Químicos, en dependencia de que el agente utilizado para ello.

MÉTODOS FÍSICOS. Calor seco (estufa u horno): La esterilidad se consigue por las altas temperaturas del aire. Es un método muy usado en Estomatología. Consisten en el aprovechamiento de calor que produce una resistencia eléctrica dentro de un recipiente herméticamente cerrado o cuba, entrepaños para colocar instrumental, termostato, y un regulador automático de temperatura. Calor húmedo (Autoclave): Es el medio más práctico y eficaz para la esterilización en el consultorio estomatológico. La esterilización se logra por el vapor de agua supercalentado y mantenido a presión, que provee una caldera de metal de paredes resistentes y tapa de cierre hermético. Se compone de un cilindro de cobre, con una tapa en su parte anterior, la que cierra herméticamente. En su interior hay varias divisiones donde se coloca el material a esterilizar. En su parte inferior hay un recipiente que se llena de agua, la que al recibir el calor de un serpentín de gas o eléctrico, entra en ebullición y produce el vapor de agua necesaria para la esterilización. Radiaciones Ionizantes:  Rayos gamma. Son radiaciones ionizantes que se usan en la industria de artículos médicos, odontológicos y farmacéuticos.

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Se caracterizan por una alta energía y gran penetración. Es un método costoso. Rayos beta. Se usan principalmente en la industria. Su poder de penetración es menor que el de las radiaciones gamma Rayos ultravioleta. Son radiaciones no ionizantes. No tienen efecto esterilizante sobre algunos microorganismos. Son de baja energía y escasa penetración. Su acción es superficial y se usan para mantener una baja tasa de microorganismos en el quirófano y para mantener estéril el instrumental una vez que ha sido ya esterilizado.

Ondas Supersónicas: (microondas odontológico) Este aparato está formado por un foco emisor de alta frecuencia que causa vibraciones en las moléculas de los microorganismos. Dichas vibraciones se transforman, por fricción interna, en calor y de esta forma se altera y se desactiva todo tipo de estructura viva. Filtración Es un proceso que impide el paso de microorganismos de un ambiente a otro. Se utiliza en la industria farmacéutica, en soluciones termolábiles que no pueden sufrir la acción del calor. Actualmente este método se usa en los compresores de aire que utilizan filtros coalescentes que filtran partículas hasta 0,001 μm (99,9 % de pureza). Ebullición Se pueden usar 2 tipos de líquidos: agua y aceite: 

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Agua en ebullición. El agua hierve a 100ºC, este sistema ofrece todas las garantías de esterilización siempre y cuando se cumpla el tiempo en que el material debe permanecer en ebullición, para lograr la muerte de las bacterias no así las de las esporas que aún siguen resistentes. Aceite en ebullición. Para esto se utiliza un aceite especial volátil, aprovechando la ventaja de que el aceite hierve a una temperatura mayor que la del agua, la que puede llegar a 300ºC.

Flameo Se trata del calor que produce una llama de gas o alcohol; es un procedimiento de emergencia y consiste en colocar directamente en la llama el objeto que se desea esterilizar. Con la llama se consigue una temperatura muy alta que puede exceder, en la de gas, los 1000ºC. Esta temperatura tan elevada deteriora el instrumento, y para evitarlo, se debe colocar por encima de la llama a fin de que no reciba directamente el calor de esta.

MÉTODOS QUÍMICOS: Este tipo de esterilización se utiliza para algunos instrumentos muy delicados, cuyo temple y filo conviene proteger del calor. Los productos químicos que se utilizan son bactericidas o desinfectantes. Tales productos, en unos casos destruyen la bacteria, actuando como desinfectantes y en otros impiden su desarrollo por lo que se denominan antisépticos. Óxido de etileno Se utiliza en la industria de productos médicos y odontológicos para esterilizar productos termolábiles como plástico, drogas, equipamiento electrónico, etc. La razón de su uso es la capacidad que tiene de esterilizar a temperatura ambiente. Su poder de penetración es alto. Su mecanismo de acción es la alquilación de la pared celular del microorganismo Plasma de peróxido de hidrógeno. Consiste en un conjunto de iones, electrones y partículas atómicas neutras que se produce mediante temperaturas altísimas o fuertes campos electromagnéticos. Es un método reciente de esterilización rápida, a baja temperatura, baja humedad y sin residuos tóxicos pues sus residuos finales son oxígeno y agua). Soluciones químicas (esterilización en frío): El uso de soluciones salinas para la esterilización consiste en la inmersión del instrumental en desinfectantes de alto nivel, los cuales tienen acción bactericida, virucida, fungicida y esporicida. Las soluciones químicas conocidas como esterilizantes son:  Glutaraldehído al 2 %  Formaldehído al 38 %  Peróxido de hidrógeno al 6 %  Ácido paracético del 0,2 al 30 %

MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio con el objetivo de hacer crecer un microorganismo como bacterias, virus y hongos, aunque también se utilizan para el crecimiento de células o tejidos. Principalmente consta de una superficie sólida, semisólida o de una solución liquida con nutrientes y condiciones favorables de pH y temperatura para el crecimiento de lo que queramos. También es necesario controlar la presencia o no de oxígeno o el grado de humedad. Una curiosidad es que, si queremos “cultivar” virus, necesitaremos células vivas para que estas puedan infectarlas y multiplicarse. En la gran mayoría de cultivos sólidos se utiliza el Agar como agente gelificante, ya que no es reactivo con otros compuestos químicos y la gran mayoría de microorganismos no son capaces de degradarlo.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Según su consistencia Sólido Contiene Agar a concentración 1.5 – 2%. Es la forma más conocida de medio de cultivo, que se pone en las Placas de Petri . Es común utilizar este tipo de medio para aislar colonias o analizar las características de las colonias.  Semisólido  Contiene Agar al 0.5% o menos. Tienen una consistencia como de crema y son útiles para cultivos de microaerófilos o para determinar motilidad.  Líquido (Caldo)  Acostumbran a tener gran variedad de nutrientes y no tienen agentes gelificantes. Se utilizan para hacer crecer los microorganismos o por ejemplo, para estudios de fermentación 

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Según su función/uso 

Medio general Medio donde pueden crecer todo tipo de microorganismos.

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Medio selectivo Tipo de medio con algunos elementos o nutrientes específicos. La función de este tipo de medio es que crezcan solo un tipo determinado de microorganismos. Por ejemplo, si queremos que crezca una especie que es resistente a un antibiótico como ampicilina, se puede añadir este antibiótico para impedir que crezcan otros microorganismos.

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Medio diferencial Medio donde se permite identificar y/o diferenciar (como su nombre indica) una especie de otra, ambas en el mismo medio. Puede ser debido a su metabolismo, su crecimiento, etc… acostumbran a llevar un indicador que permite ver esta diferenciación.

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Medio de enriquecimiento o nutritivo Contiene nutrientes necesarios para permitir el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos. Se utiliza para conseguir que proliferen la máxima variedad de microorganismos posibles. Acostumbran a ser los extractos de carne o levadura con peptonas.

Según su origen 

Naturales Son preparados a partir de sustancias naturales como extractos de tejidos, levadura. Son infusiones cuya composición química no se conoce exactamente.

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Sintéticos Tienen una composición química definida cualitativa y cuantitativamente. De este modo es posible obtener resultados reproducibles

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Semisintéticos Se trata de un cultivo complejo en el que se le añade a un extracto orgánico, factores de crecimiento aislados debido a la dificultad de conseguirlos en compuestos naturales....