Medios DE Cultivo DE Protozoarios PDF

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Aquí encontrarás algunos medios de cultivo utilizados para el cultivo de protozoarios....

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UNIVERSIDAD AUTONÓMA DE TAMAULIPAS Unidad Académica Multidisciplinaria Reynosa-AZTLÁN

“MEDIOS DE CULTIVO PARA PROTOZOOS”

7° “D” Químico Farmacológico Biólogo

Laboratorio de Parasitología Clínica I

Introducción Los protozoos son seres unicelulares eucarióticos de nutrición heterótrofa, que necesitan vivir en un medio húmedo. Cuando las condiciones del medio se vuelven adversas, como es el caso de una desecación, se rodean de una envuelta resistente y reducen al mínimo su actividad vital, se produce un enquistamiento. Los medios de cultivo son aquellos sustratos que favorecen el crecimiento, recuperación, reproducción y aislamiento de los organismos; que tiene las condiciones óptimas necesarias. Generalmente contienen agua, sales, materia orgánica; que sirven como nutrientes y es factible de descomponerse y generar alimento para otros organismos. Algunos protozoos reaccionan bien a los medios de cultivo, otros mueren o se ven disminuidos en número; así mismo, cambios repentinos de temperatura, oxígeno o movimiento excesivo causa alteraciones en ellos. Los cultivos pueden ser:   

Mixtos (agnobiótico): contiene una gran variedad de especies. Monaxénicos: una sola especie de protozoo es mantenida con una sola especie, generalmente una bacteria como alimento. Axénicos (puros o clones): se desarrolla una sola especie sin ningún otro organismo.

Sin la posibilidad de cultivar un determinado parásito, se recurre al cultivo en tejidos de células o a la inoculación en animales, métodos más laboriosos y antieconómicos. MEDIOS DE CULTIVO  Medio Chalkley: Cloruro de sodio Cloruro de potasio Cloruro de calcio Agua destilada Infusiones Arroz Hojarasca Lechuga seca

0.1 g 0.004 g 0.006 g 1000 ml

50 g 10 g 1g

Paja Pasto seco Trigo

10 g 10 g 50 g

Algunas combinaciones que han funcionado son:  



Amibas: 1 o 2 granos de trigo o mezcla de trigo y avena, 2 o 3 granos de arroz. Flagelados: 1 o 2 granos de arroz, una pizca de chocolate en polvo de vainilla o una pizca de leche en polvo. Para los autótrofos, luz artificial es adecuado. Ciliados: 1 o 2 granos de trigo y chocolate en polvo de fresa.

Procedimiento: 1. Hacer la infusión mezclando cualquiera de los que están en la tabla con agua destilada (esterilizar a 150 °C por 15 min o hervir). Dejar enfriar. 2. Inocular en el medio de cultivo debajo de una campana de extracción o cerca de un mechero. 3. Dejar reposar durante 24 hrs y observar crecimiento.

 Medio TYM: Trichomonas vaginalis Se lleva a 900 ml con agua destilada y se reparten cantidades de 90-ml en frascos. Esterilice en autoclave 15 min a 121°C y 15 lb/in2 de presión. Puede almacenarse por varios meses a −20°C. Para completar el medio adicione al medio 10 ml de suero bovino inactivado con calor, en condiciones de esterilidad. Deben adicionarse al medio antibióticos y antifúngicos. Es efectiva una combinación de penicilina, estreptomicina y kanamicina, más mycostatina o nystatina en concentración de 100 μg/ml. Para el cultivo de Trichomonas se inoculan tubos del medio con un exudado vaginal sospechoso del parásito. Los tubos de cultivo se incuban verticalmente a 35.5 °C y se examinan diariamente durante 4 días., en un microscopio invertido. Después de ese tiempo si no se observa crecimiento se considera negativo.  Medio TYI: Giardia intestinalis Lleve a un volumen final de 880 ml y ajuste a pH 7.0 usando una solución de hidróxido de sodio 1 N Esterilice por filtración a través de un filtro con

poro de 0.22 μm. No se autoclavea. Se reparte en cantidades de 13 ml en tubos de 16 x 150 mm. El medio estéril TYI-base puede ser almacenado a −20°C durante varios meses. Los cultivos pueden iniciarse a partir de trofozoítos de biopsia duodenal, pero más comúnmente a partir de heces. En primer lugar, se procede a la purificación de los quistes de las heces. La muestra de heces se diluye 1:12 (vol/vol) en agua destilada. Se toman 20 ml y se colocan en un vasito con unas perlas de vidrio, homogenizando en un vortex por 5 min., filtrando después el material a través de una gasa. En un recipiente con hielo se colocan 5 ml del filtrado en un tubo de centrífuga de 50-ml conteniendo 10 ml de sacarosa 1M. Se centrifuga a 450 x g durante 5 min. Se separa el sobrenadante con una pipeta y se diluye a 50 ml con agua. Centrifugue a 450 x g durante 5 min. Decante y descarte el líquido. Se Re suspende el sedimento en un tubo de centrífuga de 15 ml conteniendo 2.5 ml de agua destilada, colocado sobre hielo, y coloque en la superficie con mucho cuidado, una capa de 10 ml de sacarosa 0.5 M. Centrifugue a 450 x g durante 5 min. Con una pipeta Pasteur, separe 1ml del líquido del fondo y colóquelo en un tubo de centrifuga de 15 ml. Examine este material y busque quistes de Giardia. Diluya a 10 ml con agua destilada y centrifugue a 450 x g durante 5 min. Decante y elimine el sobrenadante. Re suspenda el sedimento y úselo para inocular los medios de cultivo. Los Cultivos se inician en tubos de 16 x 125 mm, conteniendo 13 ml de medio TYI-S-33 o en otro tipo de tubos llenados a 80% de su capacidad. El medio TYI-S-33 debe contener antibióticos y antimicóticos. Una combinación adecuada incluye lo siguiente, por mililitro:1 μg de anfotericina B (solución patrón 1-mg/ml), 1 mg de moxolactamo (solución patrón 300mg/ml), 1 mg de ticarcillina (solución patrón 400-mg/ml), 40μg de gentamicina (solución patrón 40-mg/ml), y 200 U de penicilina (solución patrón 100,000-U/ml). Los tubos de cultivo se incuban verticalmente a 35.5 °C y se examinan diariamente en el microscopio invertido. El medio debe decantarse (o extraerse con una pipeta) y reemplazarse con medio fresco y antibióticos diariamente durante la primera semana y después cada dos días dos semanas. Si no se observan trofozoítos a este tiempo, el cultivo se

considera negativo. La mayoría de los trofozoítos se adhieren a la pared de vidrio.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS  C. Graham C., Louis S. Diamond. Methods for Cultivation of Luminal Parasitic Protists of Clinical Importance Clin Microbiol [Internet] [Citado 22 octubre 2018] 15(3): 329–341. Disponible en: https://studylib.es/doc/7801173/pr%C3%A1ctica-11--cultivo-deprotozoarios--i-parte Cultivo y observación de Protozoos. Laboratorio Biología y Geología. [Internet] [Citado 22 octubre 2018] 15(3): 329–341. Disponible en: http://www.mclibre.org/otros/daniel_tomas/laboratorio/Cultivo_protozoos/20 %20Cultivo%20protozoos.pdf  Medios de Cultivo de Protozoos. ClubEnsayos.com. 09 2016. 2016. 09 2016. [Internet] [Citado 22 octubre 2018] Disponible en: https://www.clubensayos.com/Temas-Variados/Medios-de-Cultivo-deProtozoos/3609236.html...