Práctica 3 Cálculos para medios de cultivo PDF

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Ejercicios de diferentes tipos de agar para cálculos de medio de cultivo y cuestionario...

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Benemérita Universidad Autónoma de Puebla Facultad de Ciencias químicas Licenciatura: Licenciatura en Farmacia Materia: Laboratorio de Microbiología General Trabajo: Práctica 3: Preparación de material y medios de cultivo Docente: Lopez Garcia Alma Alumna: Brenda Antúnez Brito 201933671

Primavera 2022 2 de Febrero 2022

Preparacin medios de cultivo INS TRUCCIONES Realiza los cálculos para la elaboración de los siguientes medios de cultivo: 1. Se requiere preparar 50 placas de 10 mL cada una con agar Mac Conkey 50g de polvo en 1 litro de agua purificada. 

¿Cuánto pesarías de medio? 25g pesariamos del medio

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¿Cuánto agregarías de agua destilada? Agregariamos 500ml de agua destilada

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¿Cuál sería el procedimiento de elaboración? Suspender 25 g del polvo en 500ml de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición 1 a 2 minutos hasta disolver completamente. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. 2.- Se requiere preparar 15 placas de 20 mL cada una con agar Sal y manitol

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¿Cuánto pesarías de medio? 33.3g pesariamos del medio

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¿Cuánto agregarías de agua destilada? Agregariamos 300ml de agua destilada

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¿Cuál sería el procedimiento de elaboración? Suspender 33.3 g del polvo en 300 ml de agua purificada. Reposar 5 minutos y calentar con agitación frecuente, llevando a ebullición durante 1 o 2 minutos para disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos. Enfriar y distribuir en placas de Petri estériles 3.- Se requiere preparar 50 tubos de 5 mL cada uno con caldo nutritivo

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¿Cuánto pesarías de medio? 2g pesariamos del medio

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¿Cuánto agregarías de agua destilada? Agregariamos 250ml de agua destilada

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¿Cuál sería el procedimiento de elaboración? Suspender 2 g del polvo en 250ml de agua purificada. Reposar 5 minutos y calentar con agitación frecuente, llevando a ebullición para disolución total. Distribuir en tubos u otros recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos. 4.- Se requiere preparar 30 placas de 10 mL cada una con agar SS

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¿Cuánto pesarías de medio? 18g pesariamos del medio

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¿Cuánto agregarías de agua destilada? Agregariamos 300ml de agua destilada

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¿Cuál sería el procedimiento de elaboración? Suspender 18g del polvo en 300ml de agua purificada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición durante 1 minuto para disolución total. No esterilizar en autoclave. Enfriar y distribuir en placas de Petri estériles 5.- Se requiere preparar 25 placas de 20 mL cada una con agar Sangre carnero

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¿Cuánto pesarías de medio? 20g pesariamos del medio

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¿Cuánto agregarías de agua destilada? Agregariamos 500ml de agua destilada

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¿Cuál sería el procedimiento de elaboración? Suspender 20 g del polvo en 500ml de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensión homogénea. Calentar con agitación frecuente y hervir 1 minuto para disolución total. Esterilizar a 121 ºC durante 20 minutos. Anexa el cuestionario de la Práctica 3

Cuestionario 1.-¿Qué ocurriría si los medios de cultivo no se esterilizaran tras su preparación? Si los medios de cultivo no se esterilizan tras su preparacion se contaminan, y por lo tanto no crecerian unicamnete los microorganismos que desamos , si no tambien mas organismos que estan presentes en el ambiente. 2. ¿Qué es y cómo se lleva a cabo la esterilización por calor húmedo y por calor seco? La esterilización por calor seco produce la destrucción de los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. Para lograr la esterilización del material empleando el calor seco, se deben aplicar temperaturas más altas durante mayor tiempo. La esterilización por calor seco se puede realizar por varios métodos: • Aire caliente: se lleva a cabo en hornos especiales que permiten la distribución uniforme del calor en su interior, donde el material se expone a temperaturas de aproximadamente 170ºC durante 2 horas. El tiempo de esterilización se debe determinar para cada tipo de material. Para controlar la esterilización instrumentos físicos y biológicos como las esporas de Bacillus subtilis. • Llama directa: Consiste en colocar el material directamente al fuego hasta que éste se ponga al rojo vivo. De esta forma se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas. para esterilizar el asa o el filamento con la llama del mechero. Cuando se realiza este procedimiento se debe evitar la formación de aerosoles que podrían contaminar el ambiente. • Incineración: El material a esterilizar se coloca en cámaras especiales que alcanzan elevadas temperaturas. Con este método se queman los contaminantes hasta reducirlos a cenizas. Es una forma efectiva de esterilizar el material contaminado a descartar tales como bolsas, papel, uniformes desechables, cadáveres de animales, etc. La esterilización por calor húmedo los microorganismos mueren con mayor rapidez cuando se encuentran en presencia de agua, ya que éste permite que se altere con mayor facilidad la configuración de sus proteínas y proporciona un medio para distribuir el calor uniformemente en toda la cámara interna del equipo de esterilización. El principal método de esterilización que emplea calor húmedo es

la esterilización por vapor a presión. Entre estos métodos podemos citar: • Tindalización (esterilización fraccionada) • Agua hirviendo • Pasteurización • Olla de presión Esterilización por vapor a presión La esterilización por vapor a presión se lleva a cabo en una autoclave. Estos equipos emplean vapor de agua saturado, a una presión de 15 libras lo que permite que la cámara alcance una temperatura de 121ºC. El tiempo de esterilización usualmente es de 15 minutos, sin embargo, en algunas oportunidades, dadas las características del material, es necesario variar el tiempo de esterilización. 3. Describe los siguientes métodos de eliminación de microorganismos: tindalización, pasteurización, filtración, radiaciones y gases. Tindalización: Se utiliza cuando las sustancias químicas no pueden calentarse por encima de 100° C sin que resulten dañadas. Consiste en el calentamiento del material de 80 a 100° C hasta 1 hora durante 3 días con sucesivos períodos de incubación. Las esporas resistentes germinarán durante los períodos de incubación y en la siguiente exposición al calor las células vegetativas son destruidas. La pasteurización es un proceso térmico que se aplica en los alimentos para reducir los agentes patógenos que puedan contener, como: bacterias, mohos, levaduras, etc.esto se lleva a cabo en autoclaves . Filtracion: Algunos materiales como los líquidos biológicos como suero de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y antibióticos son termolábiles. Otros agentes físicos como las radiaciones son perjudiciales para estos materiales e imprácticos para esterilizarlos, por lo que se recurre a la filtración a través de filtros capaces de retener los microorganismos. Los microorganismos quedan retenidos en parte por el pequeño tamaño de los poros del filtro y en parte por adsorción a las paredes del poro durante su paso a través del filtro debido a la carga eléctrica del filtro y de los microorganismos. Debido al pequeño tamaño de los virus, nunca es posible tener certeza de que, por los métodos de filtración que dejan libre de bacterias una solución, se van a eliminar también los virus. A.- Filtros de membrana: Los filtros de membranas son discos de ésteres de celulosa con poros tan pequeños que previenen el paso de los microorganismos. Existen distintos tipos de filtro dependiendo del tamaño de poro. Estos filtros son desechables. Además de utilizarse en la esterilización de líquidos se usan en el análisis microbiológico de aguas ya que concentran los microorganismos existentes en grandes volúmenes de agua. B.- Filtros HEPA Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) está compuesto por pliegues de acetato de celulosa que retienen las partículas (incluídos los microorganismos) del aire que sale de una campana de flujo laminar. Radiaciones: A.- Radiaciones ionizantes Rayos gamma: Las radiaciones gamma tienen mucha energía y son emitidas por ciertos isótopos radiactivos como es el Co60 pero son difíciles de controlar ya que este isótopo emite constantemente los rayos gamma en todas direcciones. Estos rayos gamma pueden penetrar los materiales por lo que un producto se puede

empaquetar primero y después esterilizar. Rayos catódicos (Radiación con haz de electrones): Se usan para esterilizar material quirúrgico, medicamentos y otros materiales. Una ventaja es que el material se puede esterilizar después de empacado (ya que éstas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura ambiente. B.- Radiaciones no ionizantes Luz ultravioleta: La porción ultravioleta del espectro incluye todas las radiaciones desde 15 a 390 nm. Las longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen mayor eficacia como bactericidas (200 - 295 nm). Se usan para reducir la población microbiana en quirófanos, cuartos de llenado asépticos en la industria farmacéutica y para tratar superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche. La luz UV tiene poca capacidad para penetrar la materia por lo que sólo los microorganismos que se encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la acción de la luz UV son susceptibles de ser destruídos. Gas: Oxido de etileno: El requerimiento esencial para un agente químico esterilizante es que sea volátil así como tóxico para los microorganismos, de manera que pueda ser fácilmente eliminado del objeto esterilizado después del tratamiento. Normalmente se utiliza el óxido de etileno, un líquido que hierve a 10,7° C. Se usa en la industria para la esterilización de placas Petri, jeringas y otros objetos de plástico que se funden a temperaturas superiores a los 100° C. Debido a su alto poder de penetración estos objetos se empaquetan primero y después se esterilizan. El óxido de etileno actúa inactivando enzimas y otras proteínas que contienen grupos sulfidrilos (R-SH) mediante una reacción llamada alquilación (R-S-CH2CH2O-H). 4. ¿Qué es un bioindicador de esterilidad? Los indicadores biológicos son utilizados para indicar si un material sometido a un proceso de esterilización está completamente libre de microorganismos vivos, compuesto por un preparado de esporas de bacterias altamente resistentes al método de esterilización utilizadostas esporas son utilizadas como organismo prueba, las cuales se exponen al proceso de esterilización al mismo tiempo que los objetos a esterilizar. Después del proceso de esterilización el indicador biológico es analizado para determinar si todavía hay esporas viables en él. En caso de haber esporas sobrevivientes, se descarta el proceso de esterilización.  Método Cepa de esporas  Calor húmedo  (autoclave)  Geobacillus  stearothermophilus  Calor Seco Bacillus atrophaeus  Óxido de etileno Bacillus atrophaeus 5. ¿Qué ventajas presenta el agar? El agar químicamente es un polisacárido obtenido a partir de algas marinas, presentando entre sus ventajas que la mayoría de los microorganismos no lo utilizan como nutriente. La presencia y cantidad de éste permite diferenciar los medios semisólidos (0.2-0.5% de agar), sólidos (1 a 2% de agar) y líquido que carece de agar. Contiene los nutrientes necesarios para permitirya que hay agares muy espeficos , en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de

virus, microorganismos. Bibliografías: Cuestionario Santana, L. R. R. D., Carvalho, R. D., Leite, C. C., Alcântara, L. M., Oliveira, T. W. S. D., & Rodrigues, B. D. M. (2006). Qualidade física, microbiológica e parasitológica de alfaces (Lactuca sativa) de diferentes sistemas de cultivo. Food Science and Technology, 26, 264-269. https://www.scielo.br/j/cta/a/dgggZyjVPJJZqGFwqB68NXC/? lang=pt&format=htm..l...