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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Punto de partida: CLÍNICA (paciente con síndrome clínico infeccioso) + EPIDEMIOLOGÍA (datos personales, familiares, ambientales) + Dx MICROBIOLÓGICO (lab)    

Dx ETIOLÓGICO

Identificar el agente causal del proceso infeccioso que afecta a un individuo o población Evaluar la sencibilidad del agente a los antimicrobianos para un tratamiento correcto Establecer un pronóstico certero Permitir una prevención del proceso mórbido

Función

Muestra clinica EJEMPLO: Si le coloco a paciente de 70 años prótesis de cadera. A 2 meses presenta hinchazón de cadera imposibilidad de caminar tiene herida de incisión quirúrgica donde ese abrió para hacer la colocación de la prótesis.  En inf de cadera rara vez causa sepsis  Se descarta problemas con bacterias cuando hay estos casos de protesis  Lugar ideal para realizar la muestra seria punción de la cadera guiada por TAC o ecografía o el cirujano abre la prótesis en 2da cirugía  Si sopecho q tengo hongos en vagina se hace un hisopado de vagina.porque se estua los candilas de esa zona.  Si es paciente está tomando antibióticos si se puede tomar muestra.

Caracteristicas: • • • • • • • •

Representativa Volumen adecuado Evitar la contaminación Técnicas asépticas Recipiente estéril Rotulado Antes de adm. ATM Rapido traslado

Transporte: • • •

Rapidez Temperatura adecuada Medios de transporte

Temperatura:

Temperatura ambiente: • Liquidos de punción • Sangre • Tejidos – biopsias

Temperatura a 40C: • • • •

Orina Esputo Cateter MF en transporte

Etapas de diagnostico microbiológico: 1. Interrogatorio, sobre epidemiologia, revisión y muestra. Decisión. Esputo? 2. Laboratorio, trasporte y temperatura hasta que el bacteriólogo la reciba. Procesamiento. Examen directo. 3. Se ve por ej cocos gram positivo y lo trato con tratamiento. 4. Se podría hacer prueba de sensibilidad. 5. Elaboró el informe. Ej. Informe María 60 años diabética con fiebre estuvo en lugar frío toda la noche. diagnóstico presuntivo neumonia. Cultivo de esputo. Ver qué agente lo causo y hacer Prueba de sensibilidad.

Etapa Preanalítica: (toma de la muestra) 1. Decisión de efectuar el estudio: - Si es útil para el paciente. - Tener en cuenta que las enf. Infecciosas tienen un tratamiento y dx más urgente. 2. Obtención de la muestra clínica (MC): - La MC es la porción de material orgánico obtenida del pte donde está el microorganismo (dx directo) o la resp inmune específica (dx indirecto). - Responde a tres preguntas:  ¿QUÉ material o MC obtener? Tiene que ser representativa del sitio de lesión Una cant suficiente Evitar contaminación con la microbiota MC proviene de: Sitios Estériles: LCR - sangre - liquídos de punción - biopsia Sitios Colonizados: Esputo - heces – orina chorro medio – exámen vaginal, uretra, fauces  ¿CÓMO es la técnica correcta de obtención de la muestra clínica? Dependerá la limpieza y antisepsia previa a la obtención de la muestra Recoger en recipientes estériles y herméticos  ¿CUÁNDO? Depende del período evolutivo de la infección De la historia natural y fisiopatológica

3. Envío y conservación de la muestra La muestra se envía lo antes posible, a temp adecuada y en un buen medio transporte La conservación depende del microorg y el tiempo hasta ser procesado en el lab -Se conservan a temperatura ambiente: líquidos de punción, sangre, tejidos de biopsias. -Se conservan a 4°C: orina, esputo, cateter, MF en transporte  La muestra va acompañada de un protocolo donde van los siguientes datos: -Nombre, edad, sexo, procedencia (internación o ambulatorio), tipo de MC, forma de obtención, tratamiento previo con antimicrobianos, antecedentes, dx presuntivo, fecha de obtecnión, firma del médico

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Transporte:

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Hemocultivos. Biopsias deben ser conservadas a temp ambientes Las muestras colonizadas se guardan en la heladera para que no ganen el desarrollo de las otras bacterias de la microbiota habitual. SIEMPRE SE ELIGE UNA PUNCION LAS QUE UN HISOPADO. ES HISOPO TENDRA QUE ESTAR EN UNA GELATINA PARAQUE SEAN VIABLES.

Etapa analítica: (estudio de la muesta) Procesamiento de la muestra:  Todos los métodos utilizados en el lab para llegar al dx etiológico  Se usan: -Métodos directos:  Detección del agente causal: mediante  Microscopía: usa técnicas en fresco y/o coloraciones (gram)  Aislamiento: Las bacterias se aislan en cultivos artificiales. Uso medios de cultivo selectivos para muestras no esteriles (materia fecal). Uso de medios no selectivos (agar sangre) para líquidos de punción, sangre, suero.  Identificación: Para conocer nombre del agente (género y especie). Se realiza mediante reacciones bioquímicas (bacterias) o inmunológicas (bacterias o virus).  Detección de subunidades estructurales:  Elementos antigénicos del agente detectados por técnicas inmunológica  Se usan como reactivos Ac específicos conocidos. (Técnicas de aglutinación, inmunofluorescencia, radioinmunoensayos, elisa)  Hay técnicas que identifican ac nucléicos, se llaman técnicas de de dx microbiológico por biología molecular, y se usa RCp y técnicas de hibridación. -Métodos indirectos:  Detección de Ac específicos: El húesped usa la prducción de Ac específicos (Ig) como mecanismo de defensa. Las Ig útiles son: o IgM: Es la 1era en aparecer y es de corta persistencia. Indica Infección aguda o IgG: aparece 2nda y se usa para la seroconversión.  Determinación de alteraciones histológicas: Infecciones bacterianas producen una lesión patológica que se usa en el dx microbilógico.

INICIO DEL PROCESAMIENTO: se realiza apenas se hace la muestra 1. 2. 3. 4.

Voy a tomar con pipeta en medio liquido y solido. Y ese cultivo será seguido de tomar la muestra. La extiendo. La coloreo con tinciófn gram pos o neg y lo veo con el microscopio.

1. Podria ver Voy a ver 1 presencia de leuclocitos polimorfonucleares indicadores de infección aguda y una RESPUESTA INFLAMATORIA POR INFECCION BACTERIANA. En esta imagen se verán cocos gram positivos dispuestos en forma agrupada. Da la idea de genero ESTAFILOCOCUS.

En esta imagen cocos Gram negativos lo que podria indicar una Neiceria meninguitis o gonorrea.

2. Puedo usar el

Sistema de automatizado bactec que permite identificar la sesibilidad antibiótica en menor tiempo. 1. En una placa de agar y botellitas pequenas 2. Las coloco en un aparato q es una estufa de cultivo q tiene un sistema automatzado con sensor de movimiento que detecta cuando las bacterias liberan CO2 lo que indica su presencia aqui es que bacteria empezó a desarrollarse emite una señal de la alarma a la computadora y en la pantalla se ve color amarillo o rojo y numero ej A4 . 3. La extiendo sobre un porta objetos 4. Le hago coloración de gram. aquí ya voy a tener bacterias ya desarrolladas.   

ESTO ACELERA EL PROCESO DE VER EL DESARROLLO YA QUE ES DIFICIL VERLO CON EL OJO HUMANO. SISTEMA MAS MODERNO ACELERANDO EL TIEMPO. Puedo ver por ej que estafilococo es PARA PRUEBAS DE SENSIBILIDAD:

1. 2. 3. 4.

Pongo una colonia Le hago la prueba de sensibilidad. Y luego tomo la muestra y la pongo sobre un vidrio y lo coloreo para hacer un examen directo. Pongo discos de antibióticos que son cartoncitos de papel con antibiótico adecuado para la bacteria que estoy estudiando. Ej bacilo gram negativo ej estafilococo pondría.

LUNES TOMO LA MUESTRA 4.15 puedo ver que tipo de BACTERIA ES. EXAMENDIRECTO DE LA MUESTRA Al otro dia puedo ver ya el desarrollo de la muestra osea de la bacteria. 48 despues si no se desarrollaron se consideran negativas. Osea que no hay microorganismos en el cultivo.

Etapa postanalítica Informe e interpretación:  Lab informa los resultados de forma rápida y precisa.  El médico los interpreta en relación a dato clínicos y epidemilógicos.

Casos clínicos  Cuando tengo un proceso infeccioso la bacteria hace otitis media conjuntivitis o neumonía.  TRIADA EPIDEMIOLOGICA es como se realiza este proceso infecc.  MEDIO AMBIENTE condiciona q la bacteria entre y produzca la infección. Ej paciente martillando en techo casi se cae y mientras lo hacia tenia muchas bacterias pero no le hacían nada. Pero cuando fue al hospital en terapia intensiva llena de bacterias RESISTENTES que ellas si hacen infección como neumonía por la intubación y causan sepsis y aveces muerte. MODELOS INFECCIOSOS.  Echericha coli es mas por vías urinarias.  BACTERIA STAFILOCOCOS. Neumonía de la comunidad en un huésped inmuno competente CASO CONTROL DE NINO SANO PEDIATRA LO PESA Y NO AUMENTO LO QUE TENIA QUE AUMENTAR EN EL PUNTO DE CONTROL. Podría ser mala alimentación o parasito intestinal Pero podría ser tamb INFECCION URINARIA que es una buena causa en los niños con este síntoma q podría confundir e inclinarse a un cuadro infeccioso u a otro. SE DEBERIA HACER UNA BUENA INTERROGACION AL PACIENTE EN ESTE CASO LA MADRE Y CONFIRMAR O DESCARTAR LA SOSPECHA CLINICA PEDIR UN UROCUlTIVO Y SI DA NEGATIVO SI SE VE ESTAS CAUSAS COMO DESNUTRICION O PARASITO INTESTINAL. EN el estudio se tendrá encuenta el tipo de muestra si esta toamndo antibiótico y hacer mas estudios. CASO 1 Paciente sin antecedentes patológicos previos, cursando 24 semanas del 2° embarazo controlado, que consulta por dolor en ángulo costovertebral derecho de 24 hs. de evolución asociado a fiebre y estado nauseoso, al Examen físico: orientada en tiempo y espacio, T° 38,5°C. FC: 104 x min., FR: 20 x min., TA: 110/70, LBT: GB 11000 x mm3, sedimento urinario: 20 leucocitos x campo, P.P.R derecha (+), considerando este escenario, responda: 1. ¿Cuál es el diagnóstico del cuadro y la etiología más frecuente? 2. ¿Son necesarios estudios microbiológicos? ¿Cuáles solicitaría? 3. ¿Solicitaría estudios por imágenes? Fundamente. 4. Indicaría tratamiento empírico o esperaría tener sensibilidad del antibiograma para iniciarlo? 5. Indicaría tratamiento ambulatorio o endovenoso? Con que antibiótico indicaría? Tiempo total de la antibioticoterapia. Preguntar porque las contracciones si tiene tos si tiene otitis media. Covid . Se realiza el examen físico y se constatan algunos datos Ej. Tisuria poliaquiuria cistitis, disuria. Que son síntomas de una INFECCION URINARIA QUE ES ITU BUSCAR CUAL SERIA EL FOCO DE ATENCION PARA LA PACIENTE. En este caso seria una infección urinaria. EL RINON infecc urinaria alta si son de bacterias. PIELONEFRITIS se le pide urocultivo. Se decide internación de la paciente. Porque está embarazada si, si no solo si es alta si no no. ITU EN EMBARAZADA riesgos. LLEVA RIESGO DE PARTO PREMATURO, retardar crecimiento intrauterino, cistitis, aborto espontaneo. Solicitar estudio al inicio del cuadro infeccioso. ORINA DE CHORRO MEDIO, limpiarse co jabón y agua . Primer chorro descartar Mantener muestra en heladera porque esa muestra pasa por la uretra anterior que esta colonizada. Si se sospecha una pielonefritis se debe realizar ecografía fetal. LA BACTERIA ES ESCHERICHIA COLI. Si se da antibiótico q esesteratogenico es malo pq esta embarazada 1. Internación inmediata 2. Inicio de antibióticos 3. Control postratamiento con urocultivos mensuales

Pasos del estudio microbiologico Cuando solicitar el estudio? Al inicio de la enfermedad, lo ideal es que no haya recibido antibioticos. Qué tipo de muestra solicitar? Depende del sitio de la infeccion, siempre debe ser representativa. Qué indicaciones le daría a la paciente? Realizar una correcta higiene de genitales previo a la recoleccion NO OLVIDAR QUE LA PARTE ANTERIOR DE LA URETRA TIENE MICROBIOTA COLONIZANTE Cómo se le ocurre que debe conservarse y transportarse la muestra? La muestra de orina, al no provenir de un sitio esteril, debe conservarse en heladera y siempre procesarla lo antes posible, como cualquier muestra microbiologica. Como interpreto el resultado del urocultivo? El recuento de 1000UFC /ML que significa? Al ser un sitio no esteril el cultivo debe interpretarse como positivo cuando supera la cantidad de bacterias que son colonizantes. Siempre se deb tener en cuenta la rta INFLAMATORIA y CLINICA del paciente. Bacterias frecuentes causantes de esta patologia: Las del hospital . Hacer estudio epidemiológico. El bacteriólogo provee la info. Examina todas. Ve el perfil de resistencias. Ej una pseudomona… es la más frecuentee en este hospital. Se le dará UN ANTIBIOTICO CONTRA ESA BACTERIA. Se realiza un TEI tratamiento empírico indeferencial. Cuidados: Lavar manos. 5 momentos. Para que no se repita esto. 1. Al ingreso de la habitación. 2. Cuando lo tocas, 3. cuando le das una curación de herida quirúrgica 4. retirarse de la habitación del paciente Implicaciones de una ITU en embarazadas  Es fundamental realizar controles con urocultivos durante el embarazo 

Una BACTERIURIA ASINTOMATICA y sin respuesta inflamatoria debe tratarse siempre para evitar una pielonefritis (Infección urinaria alta)

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La ITU durante el embarazo puede tener fuertes implicancias fetales y maternas: parto pretérmino, niños de bajo peso al nacer, abortos, alteraciones mentales en el RN,

Caso 2 Paciente sin antecedentes patológicos previos, cursando 24 semanas del 2° embarazo controlado, que consulta por dolor en ángulo costovertebral derecho de 24 hs. de evolución asociado a fiebre y estado nauseoso, al Examen físico: orientada en tiempo y espacio, T° 38,5°C. FC: 104 x min., FR: 20 x min., TA: 110/70, LBT: GB 11000 x mm3, sedimento

urinario: 20 leucocitos x campo, P.P.R derecha (+), considerando este escenario, responda: 1. ¿Cuál es el diagnóstico del cuadro y la etiología más frecuente? 2. ¿Son necesarios estudios microbiológicos? ¿Cuáles solicitaría? 3. ¿Solicitaría estudios por imágenes? Fundamente. 4. Indicaría tratamiento empírico o esperaría tener sensibilidad del antibiograma para iniciarlo? 5. Indicaría tratamiento ambulatorio o endovenoso? Con que antibiótico indicaría? Tiempo total de la antibioticoterapia.   

Hacer hemocultivo Tratamiento empírico que no dañe al feto. Darle antibiótico y como está embarazada tiene que ser uno para estreptococo beta hemolíticos frecuentes en embarazadas. 10 dias de tratamiento antibiótico.

Caso 3 Paciente masculino de 60 años de edad internado en UTI por ACV hace 4 días Se encuentra en coma inducido. El paciente requirió intubación endotraqueal por insuficiencia respiratoria. Dada su condición actual presenta múltiples dispositivos de sostén: catéter venoso central, tubo endotraqueal y sonda urinaria. Al cuarto día de internación comienza con fiebre de 39°C y leucocitosis de 15000 Se constatan secreciones mucopurulentas abundantes por tubo endotraqueal. Presenta taquicardia y taquipnea. Se le solicita radiografía de tórax que muestra nuevo infiltrado en el lóbulo inferior derecho. Se obtienen cultivos de la sangre (tres muestras) y cultivo de secreciones respiratorias. Al examen se ausculta ruidos crepitantes sobre el lado derecho. El paciente permanece sedado e intubado. El laboratorio demuestra leucositosis y elevación de proteína C reactiva. La creatinina es normal. ¿Cuál es el diagnóstico más probable de este cuadro clínico? Cuáles son los microorganismos más comunes causantes de dicha patología? ¿Cómo se previene esta enfermedad? ¿Qué tratamiento empírico se podría iniciar mientras se esperan los cultivos? ¿Podrían haberse solicitado otras muestras para estudio microbiológico? ¿Cómo puedo saber cuáles son los microorganismos prevalentes en mi hospital? SE VE Q POR EL TUBOENDOTRAQUIEAL ASPIA SECRECIONES MUCOPURULENTAS El paciente tiene cuadro infeccioso en pulmón o urinario. Se tiene que hacer un pancultivo cultivo de orina y respiratorias. Diagnóstico más probable. Podría ser dos focos distintos. Infección urinaria o neumonía...