7 Extracción DEL Glucógeno A Partir DEL Higado Y Determinación DE LA Glucosa PDF

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Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Carrera: Química y Farmacia Laboratorio de Bioquímica IIN° 7Integrantes: 1. Castellano Tumbaco Elvis 2. Gilces Acosta Dayana 3. Rivas Jijón Kathryne 4. Valencia Cedeño Kevin Docente: Dra. Castro Posligua Aida Semestre: 5 to Grupo : G1-A EXTRACCI...

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Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Carrera: Química y Farmacia Laboratorio de Bioquímica II

N° 7 Integrantes: 1. Castellano Tumbaco Elvis 2. Gilces Acosta Dayana 3. Rivas Jijón Kathryne 4. Valencia Cedeño Kevin Docente: Dra. Castro Posligua Aida Semestre: 5to Grupo: G1-A EXTRACCIÓN DEL GLUCÓGENO A PARTIR DEL HIGADO Y DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA Objetivo 1. Realizar la extracción del glucógeno a partir del hígado y su purificación. 2. Identificar el glucógeno en el hígado y las moléculas de glucosa resultantes de sus hidrofisis mediante la prueba de Molish.

Marco teórico El glucógeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se encuentra principalmente en el hígado y en el músculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso húmedo, respectivamente. Las propiedades físicas y químicas de muchos polisacáridos neutros difieren lo bastante de las de otras biomoléculas, para permitir su fácil aislamiento. El glucógeno se puede liberar del hígado por calentamiento con una base fuerte, hasta la destrucción total del tejido. Al añadir ácido tricloroacético al homogeneizado anterior, precipitan numerosas sustancias de peso molecular elevado, como las proteínas y los ácidos nucleicos, en tanto que el glucógeno continúa disuelto. El glucógeno puede separarse de los monosacáridos y otros compuestos hidrosolubles por precipitación con alcohol, porque los polisacáridos son mucho menos solubles en alcohol acuoso que los monosacáridos. La determinación del grado de pureza de la preparación obtenida se puede realizar mediante el tratamiento con antrona y comparando con una solución estándar de glucógeno. El glucógeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se encuentra principalmente en el hígado y en el músculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso húmedo,

respectivamente.

Está

formado

por

unidades de glucosa unidas por enlaces α (1-4) y ramificaciones α (1-6). El glucógeno actúa como regulador de la glucosa sanguínea, almacenándola como glucógeno alimentación liberándola

durante

una

(glucogenogénesis) por

buena y

fosforolisis

en esta situ aproximada glucosa a p control, actú

El glucógeno se libera de los tejidos que lo contienen por calentamiento con una base fuerte (KOH) hasta la destrucción total del tejido. La separación del glucógeno del tejido se consigue mediante la adición de etanol (precipita polisacáridos y elimina los monosacáridos solubles) y sulfato de sodio (coprecipitante). Así, se produce un precipitado que

contiene una mezcla de glucógeno, proteínas y ácidos nucleicos, que han resistido el calentamiento anterior. El tratamiento posterior con ácido tricloroacético (TCA) hace que precipiten las proteínas y ácidos nucleicos de la mezcla. El glucógeno aislado se vuelve a precipitar con etanol, obteniéndose una preparación con un alto grado de pureza. El tratamiento con antrona (que contiene (H 2SO 4) es un método rápido para la determinación de hexosas y alopentosas constituyentes de un polisacárido. Mediante este método, el glucógeno es hidrolizado por un ácido (H 2SO4) hasta sus unidades elementales (monosacáridos), que pueden ser luego deshidratadas dando furfural, y éste último, reacciona con la antrona y se forma un producto coloreado (azul-verdoso) con un máximo de absorbancia a 620 nm. El valor resultante se compara con los obtenidos al preparar una recta estándar con glucosa pura, usando el mismo método. La extracción del glucógeno del hígado de esta práctica implica un proceso de homogenización del tejido y ruptura celular, así como la extracción y eliminación de las proteínas (desproteinizar) para evitar interferencias en los análisis posteriores. Para la valoración posterior de la glucosa. Por lo que se sometió el glucógeno a una hidrolisis ácida, de esta forma se rompen los enlaces glicosídicos y se libera glucosa. La valoración cualitativa de la cantidad de glucosa presente en cada hidrolizado se realizó con una sal de cobre (II) en medio alcalino (Reactivo de Nelson), aprovechando el carácter reductor que tienen todos los monosacáridos. La reacción que tiene lugar será:

de Laboratorio  Solución de Hidróxido de potasio 30%.  Solución saturada de Sulfato de sodio. 15%  Alcohol absoluto  Alfa naftol  Ácido sulfúrico. Materiales de Laboratorio  Tubos de ensayo  Pipetas  Mortero  Pilón Equipos de laboratorio  Centrífuga  Baño María  Hornilla eléctrica Actividades por desarrollar/ técnica operatoria

Reactivos

Pesar 3 g de muestra (hígado) en un vidrio reloj.

Agregar 5mL KOH al 30%.

Triturar y pasar a un tubo de ensayo 180 x 16 mm

Llevarlo a baño de agua hirviendo por 15 minutos. Retirar y enfriar

Centrifugar por 5 minutos a 3000 rpm, descartar el precipitado

Adicionar al sobrenadante 0.5 mL de sulfato de sodio al 15%, mezclar

Añadir 8 mL de etanol al 95%, mezclar

Llevar a baño de hielo durante 15 minutos

Centrifugar por 5 minutos a 3000 rpm. Descartar el sobrenadante

Al sedimento (glucógeno) agregar 2mL de agua destilada y homogenizar

Agregar a 1mL de residuo 3 gotas de alfa naftol + 2-3mL de ácido sulfúrico conc. (Reacción de Molish)

Observar la presencia del carbohidrato

Resultados

Conclusiones  Al concluir la práctica se pudo extraer glucógeno a partir del hígado, gracias a los reactivos y al equipo de centrifuga, el sedimento de la segunda centrifugación, es lo que se denomina glucógeno que es importante al momento de la identificación. 

En la reacción de Molish hace que dicha clasificación se debe al tiempo que tarda en formarse el anillo ta en el tubo ya que el ácido sulfúrico concentrado (H 2SO4) permite que los glúcidos se mando compuestos furfuricos.



se podrá decir que las hexosas dan hidroximetilfurfural.

Recome ●

mpo y temperatura.

● Cumplir con las normas de bioseguridad. ● Limpiar los mesones del laboratorio donde se trabajó. ● Escoger la muestra en el momento que se necesita para obtener confiables resultados. Bibliografía 

P. Roca, J. Oliver y A.M. Rodríguez (2003) Bioquímica. Técnicas y Métodos. Editorial Hélice.

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Rose, A. Weissberger (2000). “Techniques of Organic Chemistry”. Vol. 4. 1-174 (Mc Graw-Hill)

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Berg, J.M., Tymoczko, J.L. y Stryer, L. (2008) Bioquímica 6ª Edición. Editorial Reverte. Barcelona, España

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Alemany M, Font S (1983): “Prácticas de Bioquímica”, 1ª ed. Editorial Alhambra (Madrid, España), pp 99-107.

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Clark JM (1966): “Biquímica Experimental”, 1ª ed. Editorial Acribia (Zaragoza, España), pp 40-42.

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Nelson DL, Cox MM (2001): “Principios de Bioquímica”, 3ª ed. Editorial Omega (Barcelona, España), pp 304-305.

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