Actividad 2. Microscipio y Tecnicas de tincion. Yunuen Ramos Jiménez PDF

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Microscopia, tipos de microscopio y tecnicas de ticnion...

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Benemérita Universidad Autónoma De Puebla Facultad de Ciencias Químicas Licenciatura en Químico Farmacobiología Microbiologia NRC: 23639 Docente: Carlos Cabrera Moldonado Actividad 2. Unidad 2: Microscopia y Técnicas de tinción Ramos Jiménez Yunuen 201905324

¿A qué personaje se le atribuye la invención del microscopio? Zacharias Janssen, fabricó su microscopio en 1608, usando dos lentes convergentes. Generalidades del microscopio óptico Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energía para formar imágenes aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es posible observar: a) Microscopio fotónico simple o lupa. b) Microscopio fotónico compuesto. 

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El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste en la utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico Los microscopios fotónicos compuestos que se emplean actualmente tienen sus antecesores en los instrumentos ópticos desarrollados, en el periodo comprendido entre 1590 y 1610, por Hans (padre) y Zacarías (hijo) Janssen; quienes mediante el tallado cuidadoso de lentes biconvexas construyeron los primeros microscopios compuestos

Se denominan compuestos porque la imagen se forma mediante la utilización de tres sistemas de lentes, cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y divergentes. Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares. Partes que integran el microscopio óptico Se compone por: componentes mecánicos y ópticos Mecánicos:        

Ópticos

Base o pie Condensador Brazo, estativo o columna Objetivos Platina Tubo óptico Revolver o porta objetos Tornillos macro y micrométricos Engranajes y cremallera Cabezal

¿Cuál es la resolución en un microscopio? Los microscopios ópticos tienen un límite máximo de resolución de 0,2 µm. El poder de resolución es la distancia mínima a la que se pueden discriminar dos puntos.

Este límite viene determinado por la longitud de onda de l a fuente de iluminación, en este caso la luz visible. ¿Qué es el poder de resolución de un microscopio y como se determina? Se define así la capacidad de un objetivo de poder distinguir la distancia mínima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. La calidad de una imagen, en la que se observe la claridad, nitidez y la riqueza de detalles, depende del poder de resolución del objetivo. El poder de resolución (PR) de un objetivo depende de la longitud de onda () del rayo luminoso utilizado y la apertura numérica del sistema óptico del objetivo.

El máximo poder de resolución que se puede obtener es de 0.2 µm aproximadamente, para lo cual se requiere que el microscopio proporcione una imagen de un aumento total de 1000x a 1400x.

¿Cuál es el aumento de los oculares y objetivos? El potencial total ¿Cómo se calculan los aumentos de la muestra en un microscopio? La potencia total del microscopio que se calcula multiplicando la potencia (aumentos) del objetivo por la potencia del ocular y por el factor de tubo (normalmente igual a 1, si la longitud del tubo es la correcta, generalmente de 160 mm y si no hay ninguna lente intermedia).

Diseñar un cuadro comparativo con los diferentes tipos de microscopía Nombre del microscopio

Características

Microscopio óptico simple

Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas. También se le conoce como microscopio de luz (que utiliza luz o fotones) o microscopio de campo claro. Utiliza una sola lente para ampliar las imágenes de los objetos observados. Es el microscopio más básico.

Microscopio compuesto

Hay de tipo monocular y binocular, esta con dos tubos de observación, posee objetivos de 2x, 10x, 40x y mediante un haz de luz, los ilumina para una mejor apreciación. La muestra se corta en láminas finas que se puede transparentar.

Microscopio de luz ultravioleta

La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la absorción de esa luz por las moléculas de la muestra. La fuente de luz ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm, por lo tanto puede alcanzar una resolución de 100 nm. La microscopia ultravioleta no es muy diferente del funcionamiento de un espectrofotómetro pero sus resultados son registrados en fotografías. La muestra no se puede observar directamente a través del ocular porque la luz ultravioleta puede dañar la retina El microscopio de fluorescencia es una variación del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiación electromagnética emitida por las moléculas que han absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. El microscopio petrográfico, microscopio polarizador o de luz polarizada es un microscopio óptico al que se le han añadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador). El material que se usa para los polarizadores son prismas de Nicol o prismas de Glan-Thompson (ambos de calcita), que dejan pasar únicamente la luz que vibra en un único plano (luz polarizada). Esta luz produce en el campo del microscopio claridad u oscuridad, según que los dos nícoles estén paralelos o cruzados. Es un microscopio que utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre la muestra. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada.

Microscopio de fluorescencia

Microscopio de luz polarizada

Microscopio de campo oscuro

Microscopio de contrastes de fases

Microscopio confocal

Microscopio electrónico

Microscopio electrónico de transmisión

Microscopio electrónico de barrido

El microscopio de contraste de fases permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas. Esta técnica de microscopía aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. de fase inicial del haz de luz y produce Es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar el contraste y/o reconstruir imágenes tridimensionales utilizando un "pinhole" espacial (olimador de orificio delimitante) para eliminar la luz desenfocada o destellos de la lente en especímenes que son más gruesos que el plano focal.1 El pinhole es una apertura localizada delante del fotomultiplicador que evita el pasaje de fluorescencia de las regiones de la muestra que no están en foco, la luz que proviene de regiones localizadas por encima o por debajo del plano focal no converge en el pinhole y no es detectada por el fotomultiplicador. Un microscopio electrónico usa electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar amplificaciones mayores antes que los mejores microscopios ópticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es bastante menor que la de los fotones. Un microscopio electrónico de transmisión (TEM por su sigla en inglés, o MET en español) es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la longitud de onda de la luz visible. Lo característico de este microscopio es el uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra.Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces El microscopio electrónico de barrido (MEB o SEM, por Scanning Electron Microscope) es un tipo de microscopio electrónico capaz de producir imágenes de alta resolución de la superficie de una muestra utilizando las interacciones electrón-materia. Aplica un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen.

Microscopio de iones de campo

El microscopio de iones en campo es una variedad de microscopio que puede ser usado para visualizar la ordenación de los átomos que forman la superficie de la punta afilada de una aguja de metal. Fue la primera técnica con la que se consiguió resolver espacialmente átomos individuales. La técnica fue desarrollada por Erwin Müller.

Microscopio de sonda de barrido

Un microscopio de sonda de barrido (también llamado SPM por sus siglas en inglés Scanning Probe Microscopy) es aquel que tiene el transmisor en la parte exequimal del lente (Objetivo 4x). Este microscopio electrónico utiliza una sonda que recorre la superficie del objeto a estudiar. La rama de microscopios SPM se fundó con la invención del microscopio de efecto túnel en 1981.Su uso en investigaciones científicas es el de regular la imagen mediante un barrido de electrones haciendo que la imagen aumente (10.000.000 nm). El microscopio de fuerza atómica (AFM, de sus siglas en inglés Atomic Force Microscope) es un instrumento mecano-óptico capaz de detectar fuerzas del orden de los nanonewtons. Al rastrear una muestra, es capaz de registrar continuamente su topografía mediante una sonda o punta afilada de forma piramidal o cónica. La sonda va acoplada a un listón o palanca microscópica muy flexible de sólo unos 200 µm.

Microscopio de fuerza atómica

¿A quién se le atribuye el descubrimiento de la tinción de Gram?

Hans Christian Gram Concepto de cromóforo y auxocromo Auxuncocromo es un grupo funcional de átomos con uno o más pares de electrones solitarios que, cuando se unen a un cromóforo, alteran tanto la longitud de onda como la intensidad de absorción Un auxocromo es un grupo de átomos unidos a un cromóforo que modifica la capacidad de ese cromóforo para absorber la luz. Ellos mismos no pueden producir el color; pero cuando está presente junto con los cromóforos en un compuesto orgánico intensifica el color del cromógeno.

¿Cómo se clasifican los colorantes?

¿Qué son las tinciones simples y diferenciales, ejemplos de cada una de ellas?   

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Simple: el colorante utilizado sirve solo para denotar la morfología celular. Ejemplo: cristal violeta Diferencial: el colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre partes de una misma célula, estas técnicas utilizan más de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tinción. Ejemplo: ácido-alcohol

¿Cuáles son las características de una preparación en fresco y una tinción? Preparaciones en fresco La forma más simple de preparar un espécimen para su examen microscópico es hacer una preparación en fresco. Existen dos técnicas, una preparación en fresco simple ("entre porta y cubre") consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos sobre un portaobjetos y a continuación cubrirla con un cubreobjetos. Una preparación en gota pendiente se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos y cubriéndolo con un portaobjetos (invertido) con una excavación central (portaobjetos excavado) Hay que sellar la preparación con vaselina alrededor de la excavación. La ventaja de esta última técnica, es que la preparación no se seca y puede ser observada durante un tiempo más largo. Tinciones El microscopio de campo claro es más útil para la observación de especímenes teñidos. Los colorantes son compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos, llamados colorantes vitales, que pueden añadirse directamente a una preparación en fresco; por tanto, colorean células vivas. No obstante, la mayoría de los colorantes son solamente efectivos después de que los

microorganismos hayan sido fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al portaobjetos. ¿Cuál es fundamento de las siguientes tinciones de Gram, Ziehl-Neelsen, negativa, Sheaffer-Fulton, utilizadas de rutina en el laboratorio de Microbiología? Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa. Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa. Ziehl permite diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que no lo son en la pared celular. La sensibilidad de esta tinción para identificar bacilos ácido-alcohol resistentes es del 74% y la especificidad del 98%,26 teniendo un límite de detección de 5,000-10,000 bacilos/mL de muestra. La tinción negativa fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con el fin de rodear y delinear las bacterias no teñidas u otros materiales biológicos. Está limitado por la presencia de un fondo oscuro que no permitirá la correcta identificación de forma nítida y detallada de los componentes de dichas estructuras

La tinción de Sheaffer-Fulton usado para colorear biometría hemáticapara esporas está también es conocida como la de Wright. Es una técnica que se emplea generalmente para la diferenciación de elementos celulares de la sangre y es clasificada como una tinción policromática, dado que puede teñir compuestos ácidos o básicos presentes en una célula.

¿Qué estructuras de las bacterias tiñen las tinciones de Gram, Ziehl-Neelsen, negativa, Sheaffer-Fulton? Si observamos la pared de las bacterias Gram negativas al microscopio electrónico podemos observar 3 zonas: 1. La membrana citoplasmática. 2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el peptidoglicano. 3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, el lipopolisacárido (LPS) característico de estas bacterias y proteínas (proteínas de membrana externa). Esta capa está estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de la pared celular de las bacterias Gram negativas Pared de las bacterias Gram positivas: Lo primero a señalar es la gruesa capa de peptidoglicano en forma de múltiples capas. Unidos a él se encuentran los ácidos teicoicos (del griego techos, pared).

Esta tinción de Ziehl demuestra la capacidad de ciertas bacterias de resistir a la decoloración por ácidos y alcoholes, lo cual se correlaciona con su alto contenido en lípidos en la pared celular y presencia de ácidos micólicos que aumentan el carácter hidrófobo. Se utilizan diferentes métodos de tinción negativa para evaluar estructuras individuales, tan pequeñas como las vesículas sinápticas e incluso de gran tamaño, como los microorganismos unicelulares. La tinción de Sheaffer-Fulton que puede teñir compuestos ácidos o básicos presentes en una célula.

¿Cómo se observan en el microscopio las bacterias Gram positivas y Gram negativas, ejemplos?

¿Cómo se observan en el microscopio las bacterias ácido alcohol resistentes, ejemplos?

¿Cómo se observan en el microscopio las bacterias que se tiñen con la tinción negativa, ejemplos?

¿Cómo se observan en el microscopio las bacterias que se tiñen con la tinción de Sheaffer-Fulton, ejemplos?

¿Cómo se llama la tinción para visualizar los flagelos? Tinción de Leifson, esta tinción permite determinar el número y la disposición de los flagelos de las bacterias, lo que constituye una información esencial para la identificación de muchas especies. La tinción de flagelos es un arte que se adquiere sólo con la práctica.

¿Cuál es la utilidad de las tinciones en el laboratorio clínico? El diagnóstico de enfermedades infecciosas Clasificación de las bacterias en base a las diferentes tinciones (Gram, ZiehlNeelsen, Negativa, Sheaffer-Fulton). Morfología y medios de cultivo. Espiroquetas, Coco, Bacilo Investiga 10 nombres de géneros de bacterias cocos gram positivos y negativos. Ejemplos de bacterias grampositivas:   

Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones localizadas y posibles gastroenteritis. Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el trayecto respiratorio, así como de fiebre reumática. Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal, endometritis y neumonía.

      

Streptococcus faecalis. Usual en infecciones en vías biliares y urinarias, habita en el colon humano. Streptococcus pneumoniae. Responsable de neumonías e infecciones en las vías respiratorias, así como otitis, meningitis y peritonitis. Streptococcus sanguis. Causante de endocarditis, cuando ingresa al torrente sanguíneo a través de lesiones en su hábitat, la boca y la mucosa dental. Clostridium tetani. Bacterias responsables de los tétanos, entran al cuerpo desde el suelo por traumatismos en las extremidades. Clostridium botullinum. Causante del botulismo clásico y el infantil, habita en el suelo y en los alimentos mal conservados. Clostridium perfringes. Esta bacteria segrega toxinas que destruyen la pared celular, y es responsable de las gangrenas gaseosas, la enteritis necrosante y la endometritis.

Ejemplos de bacterias gramnegativas: 

Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y meningocococemias, coloniza las vías respiratorias humanas y asciende a las meninges por vía sanguínea.

Investiga 10 nombres de géneros de bacterias bacilos gram positivos y negativos. Gramnegativo   

Pasteurella multocida Escherichia coli Salmonela typhi

Grampositivo       

Bacillus cereus Bacillus subtilis. B. thuringiensis. B. anthracis Clostridium tetani c. botullinum perfringes

Investiga 5 nombres de BAAR positivos.     

Corynebacterium Rhodococcus Nocardia Mycobacterium M-leprae

         

Investiga 10 nombres de bacterias capsuladas. Klebsiella Leptothrix Crenothrix Derxia Beijerinckia Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae tipo b. Neisseria meningitidis S. pneumoniae Agalactie

Investiga 5 nombres de bacterias anaerobias estrictas.     

Clostridium Bacteroides sp. Escherichia Perfringens actinomyces

Investiga 5 nombres de bacterias piogénas.     

Estafilococos Neiccer Neumococos Meningococos Gonococos

Investiga 5 Nombre de bacterias fluorescentes.     

Pseudomonas Vibrio fischeri Euprymna scolopes Harveyi Phosporeum

Mapa conceptual Unidad 2:

Unidad 2 Tipos de tinciones: Gram

Tinción para

Bacterias

flajelos: de Leifson

flourescentes

Microscopios

Ziehl-Neelsen Negativa Sheaffer-Fulton

Existen diversos tipos

Pseudomonas

Bacterias piogenas

Estafilococos

Bacterias anaerobias estrctas

Clostridium

Bacterias capsuladas Klebsiella

de microscopio, formados por

Vibrio fischeri

Neiccer

Bacteroides sp.

Leptothrix

componentes opticos Neumococos

y mecanicos.

Crenothrix

Escherichia

Euprymna scolopes Meningococos

Derxia

Perfringens

Harveyi simple, de luz ultravioleta, de flouresencia,

Beijerinckia

Gonococos

Optico,: compuesto y

actinomyces...