Biología Forense PDF

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Explicación sobre la recogida de pruebas en los escenarios de un crimen y sus particularidades...

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BIOLOGÍA FORENSE Presentación La Biología forense es la rama de la medicina que se encarga del estudio y análisis de los restos o indicios biológicos. Estos indicios poseen restos celulares, los cuales permiten determinar el ADN de dicha muestra, y por tanto permiten obtener la identidad de la persona de la que proceden dichos indicios. Por tanto es una ciencia básica para la resolución de casos criminales, puesto que es capaz de determinar la identidad de la/las personas que han estado en relación con la víctima en la propia escena del crimen. Estas muestras se habrán de comparar con muestras de ADN de las personas sospechosas de estar envueltas en el delito o con bases de datos de ADN. Además para la resolución de delitos, la Biología forense tiene importancia en la resolución de delitos civiles como es el caso de la determinación de la paternidad. Los objetivos de este tema serán: 

Conocer las definiciones y tipos de indicios que se pueden encontrar en la escena del crimen.

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Conocer las técnicas utilizadas para el análisis del ADN.

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Identificación de los principales indicios biológicos: sangre, semen, células epiteliales y restos de saliva.

Definiciones Se denomina indicio biológico a toda sustancia líquida o sólida que provenga directamente del cuerpo humano, o que haya estado en contacto con el mismo y haya podido impregnarse de restos corporales, y en cuya superficie o interior pueda haber restos de células, lo cual es necesario para obtener de ellas muestras de ADN susceptibles de ser analizadas. Sin embargo existen otras evidencias presentes en la escena del crimen y que no son indicios biológicos humanos, en este sentido tenemos los indicios biológicos no humanos que estarían compuestos por análisis de microorganismos, protistas, hongos, plantas, animales invertebrados y otros animales vertebrados. Otros elementos necesarios para la investigación en la escena del crimen están constituidos por las huellas, las cuales pueden ser dactilares, palmares, de labios, de uñas o mordeduras o bien de pisadas (descalzos o cubierto con zapatos) así como por otros indicios no biológicos como los tóxicos, las drogas, medicamentos, etc. Se denomina evidencia al genérico de los objetos materiales resultantes o relacionados con un posible hecho delictivo y que se encuentran en el lugar de los hechos. Dentro de las evidencias podemos considerar entre otros: los preservativos, chicles y colillas, sobres y sellos, armas, llaves, monedas, joyas, piedras, ramas, hojas,

billetes, papeles, ropa, vidrios, pinturas, ceras, tierra, polvos, explosivos, combustibles, videos grabados, fotos, etc. Se denominan indicios indubitados aquellos indicios obtenidos directamente de un sujeto vivo o muerto. La característica de ellos es que no existen dudas sobre su origen. Los mismos pueden obtenerse de personas vivas, o bien de cadáveres los cuales pueden estar en buen estado de conservación, carbonizados, putrefactos o embalsamados. Los indicios biológicos humanos son los siguientes: sangre, semen, fluido vaginal, saliva, orina, pelo, dientes, restos óseos, células o tejidos, líquido amniótico, objetos-ropas-zonas corporales tocadas con muestras con bajo número de copias. No existe la más mínima duda de cuál es su origen. La muestra del líquido amniótico sólo puede darse en el caso de que la víctima sea una mujer en período de gestación donde el feto suele fallecer debido a heridas de arma blanca o bala.

Importancia del análisis del ADN El análisis del ADN es fundamental en la investigación porque permite asegurar con una fiabilidad prácticamente del 100% el origen de un indicio biológico humano encontrado en la escena del crimen. También se puede emplear como prueba irrefutable en el estudio de la paternidad. El análisis del ADN de indicios encontrados en la escena del crimen permite la exclusión de sospechosos, así como la inclusión de otras personas no consideradas como sospechosas en el momento inicial. Las técnicas actuales permiten el análisis de todo tipo de muestras, tanto si son antiguas como si están degradadas o mezcladas con otro tipo de sustancias o materiales químicos. A su vez el análisis del ADN permite crear bases de datos de identificación susceptible de ser utilizada en ulteriores delitos. Dentro de la investigación de los indicios biológicos existirán al menos dos fases en lo que respecta a su análisis: 

Análisis preliminares: consiste en el establecimiento de la naturaleza de los restos biológicos (procedencia y determinación de su naturaleza).

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Estudio genético: 

Extracción del ADN: este es el procedimiento más crítico y determinante en el análisis del ADN, puesto que es aquí donde más puede alterarse el resultado invalidándose la prueba como resultado de dicha alteración. Consiste en el proceso físico-químico de liberación del ADN mediante rotura celular, con la posterior purificación del extracto para separar el ADN celular del resto del material. El buen resultado de este proceso dependerá del tipo y cantidad de la muestra así como de las condiciones de degradación y antigüedad de la misma. La técnica más empleada es la extracción orgánica mediante fenolcloroformo-isoamílico, ya que extrae el ADN de mejor calidad sobre todo en muestras de escasa cantidad y con un ADN más

degradado. En el caso del análisis del semen, como dicho indicio generalmente se ve contaminado con otros fluidos (fluido vaginal, saliva, etc.) se debe utilizar una técnica de separación denominada lisis diferencial, la cual es una técnica de extracción orgánica modificada. 

Cuantificación del ADN humano: una vez purificado el ADN se debe evaluar la cantidad y calidad del mismo a fin de poder ser comparado con las muestras de ADN del o los sospechosos, víctimas o bases de datos de ADN. En el caso de que no exista una cantidad o calidad adecuada, se emplearán técnicas de P C R (Reacción en cadena de la polimerasa) para la amplificación de la muestra obtenida. De esta manera se obtiene un perfil genético apto para ser comparado. Tras la comparación se obtendrá un informe de probabilidades o compatibilidad de la muestra obtenida con respecto a la muestra comparada, y se establecerán las probabilidades de que esa similitud sea debida al azar.

Identificación de vestigios de sangre I La identificación de vestigios de sangre y su posterior análisis constituyen una de las fuentes de estudio criminal más importantes dentro de la Biología forense. La sangre es una suspensión de células que presenta dos componentes principales: 

Componente celular: formado por leucocitos, glóbulos rojos y plaquetas. Constituye el 45% del volumen de sangre. En el interior de los glóbulos rojos o eritrocitos se encuentra la hemoglobina, la cual está compuesta por cuatro cadenas polipeptidicas (globina) unidas cada una de ellas a un grupo hemo, en cuya molécula de hierra transporta el oxígeno a los tejidos y que le da la tonalidad rojiza a la sangre.

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Componente plasmástico: constituye el 55% del volumen sanguíneo. Formado por proteínas (albúmina, globulinas, fibrinógeno, trombina), electrolitos, azúcares, aminoácidos, ADN circulante, etc.

De estos dos componentes, los elementos específicos de la sangre y que no están presentes en otros tejidos o fluidos son los eritrocitos y por tanto la hemoglobina. Los restos de sangre pueden ser indubitados (es decir, aquellos procedentes del cuerpo de la víctima, sea esta un sujeto vivo o un cadáver), o restos dubitados (no procedentes del cuerpo de la víctima, y por tanto sin poder establecer con seguridad su participación o relación con el crimen). El estudio morfológico de las manchas de sangre tiene importancia puesto que da información sobre la manera en que se produjeron los hechos, de fundamental importancia para la investigación. Sobre todo destaca el estudio de las manchas por proyección ya que da información sobre el mecanismo de producción y ayuda a reconstruir los hechos.

El primer paso en el análisis de vestigios de sangre consiste en localizar y seleccionar para su estudio aquellos restos que pudieran tratarse de sangre. La asunción de la naturaleza de la sangre con la simple visualización de manchas no es un procedimiento seguro, sobre todo si esta está asentada sobre superficies oscuras, o bien si ha pasado suficiente tiempo. En estos casos pueden ser confundidas con manchas de frutas, vino, chocolate, tinta roja, pintura, etc., siendo necesario someterlas a reacciones de identificación. Si la cantidad es suficiente, las mismas pueden dejar un capa de espesor o costra brillante muy típica. La sangre es de una tonalidad marrón oscuro/rojiza tras 48-72 horas, a partir de aquí va cambiando y llega un punto en el que no parece sangre.

**Restos dubitados Los restos dubitados pueden presentarse en forma de manchas sobre determinadas superficies (ropas, objetos, pelos, soportes para recoger la muestra como hisopos, gasa o papel), sangre líquida (en casos de hechos recientes en los que la sangre no está coagulada ni seca) o raspaduras realizadas con algún objeto liso sobre restos de sangre seca. **Importancia Su importancia radica tanto en la información que aporta sobre la identidad del sujeto sospechoso de haber participado en la acción, así como por permitir la reconstrucción de los hechos criminales e imputabilizar los mismos a un determinado sujeto.

Identificación de vestigios de sangre II Una vez localizados, seleccionados y recogidos los vestigios sospechosos de contener sangre, se habrán de transportar según las indicaciones establecidas anteriormente. Llegadas al laboratorio de biología forense, se deberán realizar dos tipos de diagnósticos: 

Diagnóstico genérico: permite identificar si la mancha corresponde a sangre o a otro tipo de sustancia.

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Diagnóstico de especie: permite identificar si la mancha es de sangre humana o de sangre de otro animal.

El diagnóstico genérico únicamente permite establecer que la sustancia tratada corresponde a sangre, y se basa en la detección de hemoglobina. Existen dos tipos de test. Los test orientativos y los test de certeza. Test de Adler test orientativo. Se usa la bencidina a una muestra que si se vuelve azul es sangre, ya que ha reaccionado ante la hemoglobina. La peroxidasa es la culpable del cambio de color, se encuentra en las heces, semen, pus, algunos vegetales… por lo que no es un test seguro al 100%. ES por eso que es un test orientativo.

Los Test inmunocromoatograficos son los que identifican sangre en muestras muy pequeñas ( muestras micromicroscópicas: 500 entrocitos serán suficientes) Nos permiten determinar sangre en muestras de antigüedad de hasta 15 años, también la identifican en líquidos.

**Test orientativos y los test de certeza Otro tipo de test que cada vez se utiliza más en la práctica habitual es la determinación de ARNm (mensajero) específico de cada tipo de célula y que muestra una extraordinaria sensibilidad y especificidad. Permite la identificación con seguridad de muestras de sangre, la determinación de la especie y la posibilidad de tratar cantidades muy pequeñas de muestras sanguíneas.

Identificación de vestigios de semen I La identificación de vestigios de semen tiene una suprema importancia en procesos penales por agresión o abuso sexual en los cuales implican contacto físico entre el agresor y la víctima y en el que puede existir transferencia de material entre los cuerpos del agresor y la víctima (pelos, fibras, y fluidos biológicos el más importante de los cuales es el semen). Es por tanto la muestra de semen de inestimable valor como prueba para certificar la existencia de un delito sexual, así como para identificar al agresor mediante estudio genético de la muestra. Por regla general se necesita poca cantidad de semen para su identificación en el laboratorio de biología forense, aunque las muestras pueden ser escasas o estar degradadas en caso de utilización de preservativos, espermicidas, métodos que minimicen la eyaculación o en individuos azoospérmicos u oligospérmicos (2% de las muestras de semen no poseen espermatozoides). Aunque se pueda suponer la existencia de semen en el lugar del delito, bien en el cuerpo de la persona agredida (95% serán mujeres y 5% serán hombres), o bien en manchas sobre ropas u otros objetos, la confirmación definitiva se realizará en el laboratorio de biología forense. ¿Cómo podemos interpretar la presencia de semen? La muestra de semen puede obtenerse a partir del cuerpo de la víctima (vagina, recto, cavidad oral o determinadas zonas de la piel), mediante hisopos o torundas estériles secos o previamente lavados. También se pueden obtener a partir de manchas en determinados lugares (ropas, telas, objetivos), para lo cual se utiliza una torunda húmeda. Las muestras se deberán transportar hasta el laboratorio de biología de manera correcta según los protocolos establecidos para la remisión de muestras biológicas.

**Delito sexual Además de en los delitos sexuales, también se puede utilizar el semen como prueba en el estudio de otros delitos como asesinatos, secuestros o vejaciones. **En detalle ¿Cómo podemos interpretar la presencia de semen? La presencia de semen en el cuerpo de la víctima debe ser interpretada con cuidado, puesto que pueden existir restos de semen de personas distintas al agresor (en el caso de relaciones sexuales consentidas previas), o bien que no exista una agresión como tal, y la historia de la víctima sea falsa. Por ello es muy importante que en las muestra de semen que se remiten al laboratorio forense, se adjunte un informe detallado en el que consten la fecha y la hora aproximada de la agresión, el tipo de agresión, la existencia de relaciones sexuales consentidas cercanas a la agresión, el número estimado de agresores, sospechas iniciales sobre el posible agresor y muy importante, los datos del reconocimiento ginecológico en el que se demuestren signos de violencia (en cavidad vaginal, ano o cavidad oral) y que apoyen la acusación de agresión sexual.

Identificación de vestigios de semen II En lo que se refiere a la identificación de los vestigios de semen, se pueden utilizar dos tipos de análisis: 

Análisis macroscópico o de screening Permite realizar una primera aproximación a la existencia de semen. Tradicionalmente se han utilizado fuentes de luz ultravioleta a una longitud de onda > 254 nm ya que el semen es altamente fluorescente. Fluorece en el 100% de los casos, aunque es poco específico y necesitan análisis ulteriores para confirmar si se trata de semen o de otros productos. La luz ultravioleta puede dañar el ADN seminal. Otra técnica utilizada en la actualidad es la espectroscopia vibracional Ramán, que presenta un pico gráfico de espectro específico para el semen.

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Análisis de confirmación 

Test enzimáticos Se puede realizar screening mediante determinación de la fosfatasa ácida prostática. Esta técnica no es específica puesto que esta enzima se encuentra en otros fluidos corporales como el fluido vaginal.

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Microscopía óptica La observación microscópica de los espermatozoides es la prueba definitiva de demostración de esperma. Por supuesto no es útil si tiene azoospermia (natural o por vasectomía). La visualización del espermatozoide es fácil tras tinción mediante técnicas especiales (hematoxilinaeosina o Gram modificado). El problema que presentan las técnicas microscópicas es la escasa permanencia del espermatozoide en las muestras: siete días en vagina, de dos a tres días en ano/recto; un día en boca y dieciséis días en el cadáver. Después

de setenta y dos horas solo el 50% de los espermatozoides son visibles en muestras cervicovaginales. 

Test inmunodiagnósticos Son dos, la determinación del Antígeno específico prostático (PSA) y la determinación del Antígeno específico de vesículas seminales (semenogelina). La técnica de detección de ambos es similar y puede determinar la existencia de semen en muestras de individuos azoospermicos. Sin embargo la sensibilidad no es completa, y su existencia sin visualización de espermatozoides no puede asegurar al 100% el origen de la muestra.

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Métodos moleculares Existen dos posibles métodos de determinación molecular, los cuales sirven a su vez para la identificación genética del individuo. La primera es la hibridación mediante sonda X/Y, la cual permite la identificación del DNA del espermatozoide mediante separación de su DNA del resto del DNA de células epiteliales femeninas mediante técnicas d e lisis diferencial. El otro tipo de técnicas es la determinación de ARN mensajero específico para el semen.

Los principales problemas que presenta el análisis de las muestras de semen son: baja estabilidad, por lo que se necesita una buena conservación en la cadena de frío; permanencia limitada del esperma en el cuerpo de la víctima; degradación de la muestra por fluido vaginal; si no hay espermatozoides visibles se debería confirmar mediante la determinación de ARN mensajero.

Identificación de células epiteliales Las técnicas actuales de amplificación del ADN permiten obtener información genética de muestras de las que antes era imposible recabar información. Tal es el caso de los restos de células epiteliales. Los restos de células epiteliales pueden encontrarse en ropas, armas, guantes, y cualquier otro objeto manipulado por el agresor. También es muy interesante el análisis de resto epiteliales encontrados en las uñas de la víctima como resultado de la lucha con su agresor. Además en los casos de delitos por agresión sexual, además del clásico análisis del semen, en la actualidad cobra importancia el análisis de los restos epidérmicos en los casos de tocamiento, en los que se puede obtener muestras de ADN masculino. El análisis de restos epidérmicos requiere una especial cautela en tanto que al no poder asegurarse la procedencia de los mismos podrían dar lugar a falsas interpretaciones, ya que podrían proceder, no del agresor, si no de contactos fortuitos con otras personas. Además y previamente al costoso análisis mediante técnicas de PCR, se debería identificar la presencia y viabilidad de las células epiteliales mediante preparaciones al microscopio.

Identificación de saliva La identificación de saliva constituye junto con la sangre y el semen una de los tres productos biológicos más frecuentemente analizados en los laboratorios de biología forense Los restos de saliva se pueden encontrar con mucha probabilidad en todos aquellos objetos en contacto con ella como colillas de cigarrillos, chicles, recipientes de bebidas, restos de alimentos, cubiertos, cepillos de dientes, sobres o sellos, manchas sobre la piel producidas por boca o dientes (mordeduras, succiones o zonas besadas), ropas (pasamontañas, mordazas, sujetadores, bragas, etc.). Por lo general los restos de saliva son invisibles para el ojo humano desnudo, además de ser escasos y por lo general degradados. Por este motivo, para poder recoger muestras de saliva, se deberán localizar mediante el empleo de luces forenses, las cuales son luces de diferentes longitudes de onda que presentan filtros que captan la fluorescencia de diferentes tejidos biológicos sin ser invasivos ni destructivos de dichos tejidos. La saliva es un fluido secretado por las glándulas salivares compuesto por agua en un 95%, además de proteínas como la mucina y enzimas como la alfa amilasa. En la propia composición de la saliva no existen restos celulares, aunque sí recoge restos celulares procedentes de la descamación de células de la cavidad oral, las cuales son células planas poligonales con un núcleo concentrado típicas del epitelio plano estratificado. Dicho tipo de células también son propias de la faringe, esófago, mucosa vaginal y canal anal. Además en la saliva también se pueden objetivar restos de leucocitos. Respecto a su análisis, en función de la cantidad obtenida se deberán seguir los pasos básicos de identificación de su naturaleza seguido del análisis genético (identificación del ADN)...