Guía Practico 2020 - Apuntes kgkh PDF

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Unidad curricular Biología celular y molecular – Año 2020

Taller experimental de Histología Observación microscópica de epitelio respiratorio. 1) Introducción a la microscopía. Objetivos 1. Mencionar los distintos componentes ópticos y mecánicos del microscopio óptico común y comprender las bases de su funcionamiento para lograr una correcta utilización y cuidado del instrumento. 2. Analizar los conceptos de resolución y aumento y comprender el significado y aplicación de la fórmula de Abbe. 3. Analizar la información sobre una estructura subcelular obtenida a partir de distintas aproximaciones y comparar la información aportada por cada técnica. 4. Observar y describir imágenes microscópicas, y realizar apreciaciones sobre las características de aumento y resolución a las cuales se obtuvieron las imágenes. 5. Describir el material observado utilizando el lenguaje preciso y apropiado a cada aproximación metodológica. 6. Comprender las bases de las tinciones histológicas de rutina y los fundamentos de la técnica histoquímica de PAS. Materiales  Preparaciones microscópicas en Microscopio virtual del Departamento de Histología : Preparado N° 76a Tráquea – Técnica: Hematoxilina-Eosina. Preparado N° 76b Tráquea – Técnica: PAS (Ácido periódico de Shiff)-Hematoxilina Identificar la luz del órgano, revestida por un epitelio de tipo seudoestratificado cilíndrico ciliado con células caliciformes. Hacia afuera se encuentra una lámina propia con glándulas mucosas y seromucosas y una túnica formada por esqueleto fibrocartilaginoso y tejido muscular liso. Deberá centrar su observación en el epitelio de revestimiento. Deberá identifica y dibuja en forma esquemática los tipos celulares que lo constituyen. Comparar la distinta apariencia de las células caliciformes de acuerdo a la técnica de coloración empleada.  Micrografías Electrónicas

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Actividades 1. Reconozca en la imagen los diferentes componentes mecánicos y ópticos que

componen el microscopio óptico común (lentes oculares, lentes objetivos, revólver portaobjetivos, lente condensador, diafragma óptico, fuente de iluminación, estativo (brazo, pie), platina móvil, pinzas, tornillos macrométrico y micrométrico). Complete con los nombres la siguiente imagen:

2. La fórmula de Abbe permite calcular la resolución a la cual puede realizarse la

observación microscópica. Utilice la fórmula para calcular la resolución que obtendría utilizando las lentes objetivas que se muestran en la figura. Fórmula de Abbe:

Donde: d = límite de resolución λ = longitud de onda de la radiación empleada AN = apertura numérica del objetivo = n. sen α n = características físicas del medio que atraviesa la radiación sen α = no puede ser mayor de 1

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LENTE OBJETIVO 4X – 0.10 10X – 0.25 40X – 0.65 100X – 1.25

d= límite de resolución

3. ¿Qué variedades de microscopios conoce? Mencione al menos 3 tipos, indique la

fuente de iluminación que utilizan, el poder máximo de resolución y aumento que pueden alcanzar. 4. Observación microscópica

 Preparado 76A (Sección transversal de tráquea coloreada con hematoxilina – eosina). Observe la sección transversal de un órgano canalicular. El interior del órgano, en contacto con la luz, está revestido por un epitelio. Se trata de un epitelio seudoestratificado, cilíndrico ciliado con células caliciformes. Este tipo de epitelio reviste la mayor parte de la porción de conducción del aparato respiratorio (fosas nasales, laringe, tráquea y bronquios) y se denomina epitelio respiratorio. Con el microscopio virtual Ud. puede recorrer el preparado y observarlo a diferentes aumentos. Nos concentraremos en observar el epitelio respiratorio, intentando reconocer las diferentes células que lo componen: células ciliadas, células caliciformes y células basales.  Realice un dibujo esquemático de los elementos observados. Los dibujos que documentan las observaciones microscópicas deben tener las siguientes características: o Deben ser grandes y claros o Contener una cantidad limitada de información o Los elementos contenidos en el dibujo deben representarse a escala o Deben anotarse los nombres de todas las estructuras representadas o Debe consignarse la técnica utilizada y el número de aumentos a los que realizó la observación  Describa las características tintoriales de las células que componen el epitelio respiratorio. ¿En que se basa la tinción por los colorantes hematoxilina y eosina? 3

 Preparado 76B (Sección transversal de tráquea coloreada con P.A.S. (ácido periódicoSchiff) – hematoxilina). Técnica de PAS

Los hidroxilos libres de dos átomos de carbono adyacentes (como los grupos 1,2-glicol de las hexosas) de macromoléculas tisulares pueden ser visualizadas mediante la oxidación con el ácido periódico a dialdehídos (paso 1), y posterior condensación de los grupos aldehídos con agentes cromogénicos como el reactivo de Schiff (Spicer et al., 1964), Spicer, 1992) (paso 2). Los grupos hidroxilos adyacentes visualizados por el PAS están presentes principalmente -pero no exclusivamente- en residuos de carbohidratos. Los azúcares pequeños son solubles y, por lo tanto, no resisten los diferentes lavados durante el procedimiento de coloración de la sección histológica con lo cual la técnica de PAS pone en evidencia polisacáridos o glúcidos conjugados a proteínas. La técnica se complementa con una coloración nuclear mediante la hematoxilina. ¿Qué diferencias detecta al observar el epitelio coloreado con esta tinción en comparación con hematoxilina- eosina? ¿Qué significa que una estructura resulte positiva para esta coloración? Compare las células caliciformes observadas con ambas técnicas. ¿A qué pueden deberse las diferencias observadas? 5. Compare las preparaciones microscópicas con las microfotografías del mismo

epitelio obtenidas por microscopía electrónica de transmisión (1) y barrido (2).

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 En la microscopía electrónica: ¿a qué organelo u organelos corresponde la coloración PAS positiva en las células del epitelio? La diferencia en la observación de estos organelos con las dos técnicas de microscopía ¿se debe a una diferencia en el aumento o en la resolución a la que se realiza la observación?  ¿Qué componente molecular puede explicar la tinción con PAS en este tipo celular?

¿Por qué? 5...