Informe N°7. Determinacion DE Proteinas Totales EN Suero POR Metodo DE Biuret-convertido PDF

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VERSIDAD NACIO NACIONAL NAL DE SAN MARTÍN-TARAPOTO

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESION PROFESIONAL AL DE OBSTETRICIA

ASIGNATURA: Bioquímica Aplicada.

ESTUDIANTE: Vegas Julca Gissela.

CICLO: III.

DOCENTE: Blgo. Mblgo. MSc. Cesar Daniel Quesquén López.

TARAPOTO – PERÚ 2021

I.

PRÁCTICA N°7 DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES EN SUERO POR METODO DE BIURET INTRODUCCIÓN

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. La proteína más abundante en plasma es la albúmina. Una de sus funciones más importantes es la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso. La concentración de albúmina en plasma influye notablemente en el mantenimiento de la presión coloidosmótica, lo que estaba relacionado con su relativamente bajo peso molecular y su gran carga neta. En condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de diversos orígenes, se observan hiperproteinemias. En general, ambas situaciones se ven acompañadas por hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con deshidratación que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del plasma. La albúmina es la proteína más abundante del plasma. Se sintetiza en el hígado y se destaca por su capacidad de sufrir cambios conformacionales, lo que le permite poder transportar muchas sustancias, tales como bilirrubinas, ácidos grasos, ácido úrico, diversos medicamentos y antibióticos. Además, funciona como un regulador de la presión osmótica. Clínicamente, los niveles plasmáticos aumentados de albúmina se asocian con la deshidratación severa, mientras que los niveles disminuidos se asocian a desnutrición, enfermedad péptica, trastornos renales, y otras enfermedades. Para la determinación de proteínas totales se utiliza el método de Biuret; cuyo nombre se debe al biuret, una molécula formada a partir de dos moléculas de urea (H2N-CONH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva a esta reacción. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KO H). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2 + y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos, presentando un máximo de absorción a 540 nm.

II.

DESARROLLO DE PREGUNTAS 1. ¿En qué circunstancias recomendaría el uso de la prueba de determinación de proteínas?

"La determinación de las proteínas totales sirve para el diagnóstico de distintas enfermedades que alteran las proteínas de la sangre, orina o del líquido cefalorraquídeo". Cuando el organismo sufre alguna agresión (infección, traumatismo, intervención quirúrgica, etc.) se inicia un proceso de reacción para hacerle frente. En el hígado comienzan a sintetizarse las proteínas reactantes que cumplirán con una función protectora del organismo al limitar la agresión y contribuir a la reparación. Durante este proceso de reacción, al que se denomina reacción de fase aguda, la proporción entre albúmina y globulinas cambia y se alteran las propiedades físicoquímicas del plasma de forma representativa. 2. ¿Porque cuando se emplea el plasma los valores que se obtiene son elevados? Puede usarse plasma como muestra, pero el resultado de la proteinemia estará incrementado en 0,2 g/dl debido a la presencia de fibrinógeno, que no está considerado dentro de la definición de Proteínas Totales. 3. ¿Cuáles son los factores que interfieren en los resultados? •

• •

Cuando se utiliza muestras hemolizadas (salvo una hemolisis ligera), ya que la hemoglobina elevará falsamente los valores de proteína total al ser considerado como PT. Las proteínas totales pueden estar aumentadas en el embarazo. Los medicamentos que pueden elevar la concentración de proteínas son los esteroides anabolizantes, los corticoides, los andrógenos, la hormona de crecimiento, la insulina y la progesterona. Hay otros medicamentos que pueden disminuir la concentración de proteínas totales, como los estrógenos, los anticonceptivos y otros medicamentos hepatotóxicos.

4. Haz una lista de 10 alimentos cotidianos que contienen una alta proporción de aminoácidos Los garbanzos, la soja, las alubias, el trigo sarraceno o los pistachos. Además, poseen todos los aminoácidos esenciales, frente a otros que tienen algunas carencias como las lentejas, los cereales y el arroz. 5. Cuál es la importancia de consumir aminoácidos para un ser vivo ¿Explique con un caso clínico? Las funciones que los aminoácidos desempeñan en nuestro cuerpo son incontables. Desarrollan o reparan tejidos corporales. Intervienen en muchos otros procesos: la arginina, por ejemplo, se convierte en óxido nítrico y expande los vasos sanguíneos, facilitando el flujo.

III.

RESULTADOS DETERMINACIÓN DE LAS PROTEÍNAS Es un aminoácido no esencial utilizado por el organismo para sintetizar proteínas, que está presente en alimentos como el pescado, la carne o los productos lácteos.

GLICINA

son compuestos orgánicos que se combinan para formar proteínas. Los aminoácidos y las proteínas son los pilares fundamentales de la vida.

AMINOÁCIDO

Radical: alifático-aromático Escenciales (dienta) Biológica

no escenciales CLASIFICACIÓN

Neutros (COONH2)

Química

Ácido (+COONH2+) Básicos (+COONH2+)

ENLACE PEPTÍDICO – ENLACE AMÍDICO

ENZIMAS QUE SE ENCARGAN DE DEGRADAR LA PROTEÍNA

REACCIONES

• • •

Transaminación desaminación descarboxilación

FUNCIONES DE LAS PROTEÍNAS • • • • • • • • •

Transportadores Catalizadores Amortiguadora de Ph Estructural Coagulación Energía Hormonal Defensa Controlar

TÉCNICA COLORIMÉTRICA

Proteínas + Suero + Ph alcalino

CuH Biuret

TUBOS DE ENSAYO

Se calcula: [M] =

𝐀𝐛𝐬.𝐌 𝐀𝐛𝐬.𝐒𝐓

x [ ]st = 8gr/dl

Valor de referencia: 6.4 – 8.3 gr/dl

Cuproso CuHH

Colorea los enlaces CO-NH

PROTEÍNAS TOTALES Es la suma de la albúmina y de las globulinas.

1. La albúmina • • • • • 2. • • •

es el principal componente proteico del plasma y representa más o menos la mitad de las proteínas plasmáticas totales. Es la proteína plasmática más pequeña. se sintetiza en el hígado. Mantiene la presión osmótica de la sangre, lo cual contribuye a mantener y reglar el volumen sanguíneo. Es una proteína transportadora. Las globulinas Son las segundas proteínas más importantes del plasma. Comprende a las inmunoglobulinas y globulinas no inmunes. Las inmunoglobulinas son anticuerpos. La globulina NO inmunes son secretados por el hígado

MÉTODOS: o o

Ultracentrifugación Electroforesis

IV.

CONCLUSIONES Método del Biuret

Es un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+. En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de las proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una solución de albúmina. Proteína + Cu+2

Complejo Cu-Proteína (púrpura)

Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo o el plasma de las células antes de 3h. Si el paciente está acostado durante la extracción el resultado será menor. PROCEDIMIENTO: • •

• • •

Marcar tres tubos de ensayo como B (Blanco), S (Standard) y M (Muestra – escribir el número demuestra) Proseguir de acuerdo al siguiente esquema:

Incubar por 30 minutos a temperatura ambiente (TA) Leer las absorbancias del estándar (AS) y la muestra (A M), poniendo el aparato en cero con el blanco de reactivos (B), a una longitud de 540 nm. Determinar la concentración de pro teínas totales utilizando la ecuación de B Lambert

NOTA: LA LINEALIDAD DE LA PRUEBA ES DE 1.0 a 12.0 g / dl Y LOS VALORES DE REFERENCIADE 6,1 a 7,9 g / dl.

V.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

•

Chamorro, P. (2013). Determinacion de proteinas por el metodo de biuret 2. Slideshare.net. https://es.slideshare.net/melitoc1/determinacion-de-proteinaspor-el-metodo-de-biuret-2

•

Paty Vela. (2021). LABORATORIO No. 1 DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES Y ALBÚMINA. Academia.edu. https://www.academia.edu/31547697/LABORATORIO_No_1_DETERMINACI% C3%93N_DE_PROTE%C3%8DNAS_TOTALES_Y_ALB%C3%9AMINA...