laporan praktikum fitokimia isolasi flavonoid dari rimpang temulawak PDF

Preview

Summary

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA PERCOBAAN KE 3 ISOLASI FLAVONOID DARI TEMULAWAK Disusun Oleh : Rosa Ayu Noor Ikhsan (1708067073) Sri Wahyuni (1708067074) Vyanka Madhani (1708067075) Wandha Nur Fitria (1708067076) Widi Suryani (1708067077) Winda Astri Meiningrum (1708067078) Hari, Tanggal Praktiku : Jum’...

Description

LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA PERCOBAAN KE 3 ISOLASI FLAVONOID DARI TEMULAWAK

Disusun Oleh : Rosa Ayu Noor Ikhsan

(1708067073)

Sri Wahyuni

(1708067074)

Vyanka Madhani

(1708067075)

Wandha Nur Fitria

(1708067076)

Widi Suryani

(1708067077)

Winda Astri Meiningrum

(1708067078)

Hari, Tanggal Praktiku : Jum’at , 24 Mei & 21 Juni 2019 Dosen Pembimbing

: Erma Yunita, M.Sc., Apt.

LABORATORIUM FITOKIMIA AKADEMI FARMASI INDONESIA YOGYAKARTA 2019

HALAMAN PENGESAHAN DAN PERNYATAAN

Laporan Praktikum FITOKIMIA Percobaan Ke 3 dengan Judul Isolasi Flavonoid dari Temulawak adalah benar sesuai dengan hasil praktikum yang telah dilaksanakan. Laporan ini saya susun sendiri berdasarkan data hasil praktikum yang telah dilakukan. Yogyakarta, 28 Juni 2019 Dosen Pembimbing,

Ketua Kelompok,

(Erma Yunita, M.Sc., Apt.)

(Winda Astri Meiningrum)

Data Laporan Hari, Tanggal Praktikum

Hari, Tanggal Pengumpulan Laporan

Jum’at, 24 Mei 2019 Jum’at, 21 Juni 2019

Jum’at , 28 Juni 2019

Nilai Laporan (Diisi oleh Dosen) No. Aspek Penilaian 1. Ketepatan waktu pengumpulan (10) 2. Kesesuaian laporan dengan format (5) 3. Kelengkapan dasar teori (15) 4. Cara Kerja (10) 5. Penyajian hasil (15) 6. Pembahasan (20) 7. Kesimpulan (10) 8. Penulisan daftar pustaka (5) 9. Upload data via blog/wordpress/sribbd/academia.edu (10) TOTAL

i

Nilai

DAFTAR ISI Table of Contents HALAMAN PENGESAHAN DAN PERNYATAAN ........................................................ i

DAFTAR ISI ........................................................................................................................ii DAFTAR GAMBAR .......................................................................................................... iii PERCOBAAN 5 ................................................................................................................. 1 I. TUJUAN PRAKTIKUM ................................................................................................. 1 II. DASAR TEORI.............................................................................................................. 1 A. Temulawak ( Curcuma xanthorrhiza ) ................................................................... 1 a. Kandungan Kimia Temulawak........................................................................ 1 b. Flavonoid ........................................................................................................ 2 c. Kuersetin ......................................................................................................... 3 C. Maserasi ................................................................................................................. 4 D. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ........................................................................... 5 E. Pelarut ..................................................................................................................... 6 III. ALAT DAN BAHAN ................................................................................................... 7 a. Alat .......................................................................................................................... 7 b. Bahan ...................................................................................................................... 7 IV. CARA KERJA .............................................................................................................. 8 a. Ekstraksi dan KLT Preparative Curcuma xanthorrhiza .......................................... 8 b. KLT Identifikasi...................................................................................................... 9 V. HASIL .......................................................................................................................... 10 a. Minggu ke 1 .......................................................................................................... 10 b. Minggu ke 2 .......................................................................................................... 10 VI. PEMBAHASAN ......................................................................................................... 13 VII. KESIMPULAN ......................................................................................................... 15 VIII. DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................. 17 IX. LAMPIRAN ................................................................................................................. 19

ii

DAFTAR GAMBAR Gambar 1 . Struktur Dasar Golongan Flavonoid (1) Flavonoid, (2) Isoflavonoid, (3) Neoflavonoid (Marais, 2006 di dalam Wardana, 2016). ................................... 3 Gambar 2 . Ekstraksi dan KLT Preparative ................................................................ 8 Gambar 3 . KLT Identifikasi ....................................................................................... 9 Gambar 4 . Bercak dari Ekstrak Temulawak ............................................................ 11 Gambar 5 . Hasil Kerokan Ekstrak Temulawak....................................................... 11 Gambar 6 . Hasil KLT Idetifikasi ............................................................................. 12 Gambar 7 . Proses Pengadukan Gambar 8. Proses Penyaringan ............................... 19 Gambar 9 . Proses Pemekatan Gambar 10. Hasil Ekstrak Temulawak

19

iii

PERCOBAAN 5 ISOLASI FLAVONOID DARI TEMULAWAK

I.

TUJUAN PRAKTIKUM Dapat mengetahui langkah-langkah isolasi, mampu melakukan isolasi flavonoid dari temulawak dan mengidentifikasi isolat yang diperoleh.

II.

DASAR TEORI

A. Temulawak ( Curcuma xanthorrhiza ) Temulawak merupakan tanaman khas Indonesia yang memiliki potensi luar biasa, karena termasuk salah satu jenis temu-temuan yang paling banyak digunakan orang sebagai tanaman obat-obatan, bahkan konon tanaman ini memiliki kegunaaan setara dengan ginseng Korea. Tidak heran, banyak orangmenganggap temulawak sebagai ginsengnya Indonesia (Kartasapoetra, 2006). Berikut adalah sistematika tanaman rimpang temulawak : Kingdom

: Plantae

Devisi

: Spermatophyta

Subdivisi

: Angiospermae

Kelas

: mocotyledonae

Ordo

: Zingiberales

Famili

: Zingiberaceae

Genus

: Curcuma

Spesies

: Curcuma xanthorriza ROXB (Rosengarten, 1973)

a. Kandungan Kimia Temulawak Temulawak telah di ketahui mengandung senyawa kimia yang mempunyai keaktifan fisiologi, yaitu kurkuminoid dan minyak atsiri. Kurkuminoid terdiri atas senyawa berwarna kuning kurkumin dan turunannya. Kurkuminoid yang memberi warna kuning pada rimpang bersifat antibakteria, anti-kanker,anti-tumor, dan anti-radang, mengandung anti-oksidan hypokolesteromik. Sedangkan minyak atsiri berbau dan berasa

1

khas. Kandungan minyat atsiri pada rimpang temulawak 3-12%, sedangkan untuk kurkuminoid, dalam temulawak 1-2%. Untuk menentukan persentase dilakukan pemanasan pada temperatur 50-55 OC, supaya tidak merusak zat aktifnya dan untuk mendapatkan warna yang baik dari kurkuminoid (Cahya, 2012). Komposisi kimia dari rimpang temulawak adalah protein pati sebesar 29-30%, kurkumin satu sampai dua persen, dan minyak atsirinya antara 6 sampai 10 persen. Daging buah (rimpang) temulawak mempunyai beberapa kandungan senyawa kimia antara lain berupa fellandrean dan tumerol atau yang sering disebut minyak menguap, kemudian minyak atsiri, kamfer, glukosida,fluymetik karbinol. Temulawak mengandung minyak atsiri seperti limonina yang mengharumkan, sedangkan kandungan flavonoid-nya berkhasiat menyembuhkan radang. Minyak atsiri juga dapat membunuh mikroba (Cahya, 2012). b. Flavonoid Flavonoid merupakan salah satu kelompok senyawa metabolit sekunder yang paling banyak ditemukan di dalam jaringan tanaman (Rajalakshmi, 1985). Flavonoid berperan sebagai antioksidan dengan cara mendonasikan atom hidrogennya atau melalui kemampuannya mengkelat logam, berada dalam bentuk glukosida (mengandung rantai samping glukosa) atau dalam bentuk bebas yang disebut aglikon (Cuppett, 1954). Tanaman yang mengandung senyawa flavonoid dapat digunakan sebagai antikanker, antioksidan, antiinflamasi, antialergi dan antihipertensi (Fauziah, 2010). Peran terpenting flavonoid dari sayuran dan buah segar adalah mengurangi resiko terkena penyakit jantung dan stroke (Safitri, 2004). Menurut Sarastani (2002) kebanyakan sumber antioksidan alami adalah tanaman yang mengandung senyawa fenol yang tersebar di seluruh bagian tanaman baik di kayu, biji, daun, buah, akar, bunga maupun serbuk sari. Flavonoid mempunyai kerangka dasar 15 atom karbon yang terdiri dari dua cincin benzen (C6) terikat pada suatu rantai propana (C3) sehingga membentuk suatu susunan C6-C3-C6 (Lenny, 2006). Kerangka karbonnya

2

terdiri atas dua gugus C6 (cincin benzen tersubstitusi) disambungkan oleh rantai

alifatik

tiga-karbon.

Pengelompokan

flavonoid

dibedakan

berdasarkan cincin heterosiklik-oksigen tambahan dan gugus hidroksilnya. Salah satu kelompok senyawa flavonoid adalah Quersetin yang memiliki lima gugus hidroksil yang mampu meredam radikal bebas DPPH (Rahayu dkk, 2014).

Gambar 1. Struktur Dasar Golongan Flavonoid (1) Flavonoid, (2) Isoflavonoid, (3) Neoflavonoid (Marais, 2006 di dalam Wardana, 2016). Flavonoid di alam sering dijumpai dalam bentuk glikosidanya (Kristanti, 2008). Apabila suatu senyawa terdapat banyak ikatan glikosidanya maka senyawa tersebut cenderung bersifat lebih polar. Sehingga pada proses ekstraksi, senyawa metabolit sekunder akan lebih terekstrak pada pelarut-pelarut polar, senyawa yang bekerja kurang spesifik karena terikat dengan gugus gula dan pada proses pemisahan senyawa dengan KLT akan cenderung tertahan pada fase diamnya. (Saifudin dkk., 2006 ) c. Kuersetin Kuersetin merupakan senyawa flavonoid yang banyak terdapat pada tanaman teh, tomat, apel, kakao, anggur, dan bawang. Senyawa ini memiliki aktivitas farmakologi yang sangat beragam, seperti efek dilatasi arteri koroner, menurunkan kadar lemak dalam darah, antiplatelet, antikanker, antioksidan, antianemia, antiinflamasi, dan juga antianafilaksis (Hollman, 2004). Belakangan ini kuersetin juga diketahui bersifat renoprotektif yakni dapat melindungi ginjal dari kerusakan akibat stress oksidatif dan toksisitas

3

obat-obatan tertentu. Kuersetin memberikan efek perlindungan terhadap ginjal dari kerusakan yang diakibatkan efek samping senyawa nefrotoksik seperti antibiotik golongan aminoglikosida, anti radang golongan nonsteroid anti-imflamation drug (NSAID), obat kemoterapi dan lain-lain. Penggunaan obat-obatan ini dalam dosis tinggi ataupun kombinasi obatobatan ini akan memperparah kerusakan ginjal (Gomes dkk, 2008). C. Maserasi Maserasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur kamar. Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan (Ferdiansyah, 2006). Metode maserasi dipilih karena metode ini murah dan mudah dilakukan, selain itu dikhawatirkan senyawa yang terkandung dalam kencur merupakan senyawa yang tidak tahan terhadap panas. Untuk mendapatkan ekstrak dalam waktu yang relatif cepat dapat dilakukan pengadukan dengan menggunakan shaker berkekuatan 120 rpm selama 24 jam (Yustina, 2008). Maserasi merupakan proses yang sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam. Perendaman sampel tumbuhan dengan maserasi akan terjadi kontak sampel dan pelarut yang cukup lama. Terdistribusinya pelarut organik yang terus menerus ke dalam sel tumbuhan mengakibatkan perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel. Sehingga, pemecahan dinding dan membran sel dan metabolit sekunder yang berada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organik. Hal ini membuat ekstraksi senyawa berlangsung sempurna karena lama perendaman yang dilakukan (Baraja, 2008). Kelebihan dari metode maserasi adalah sederhana, relatif murah, tidak memerlukan peralatan yang rumit, terjadi kontak antara sampel dan pelarut yang cukup lama dan dapat menghindari kerusakan komponen senyawa yang tidak tahan panas. Kekurangan dari metode ini adalah membutuhkan waktu yang lama untuk mencari pelarut organik yang dapat melarutkan dengan baik senyawa yang akan diisolasi dan harus mempunyai titik didih yang tinggi pula sehingga tidak mudah menguap (Voight, 1995).

4

D. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Kromatografi adalah salah satu metode pemisahan komponen dalam suatu sampel dimana komponen tersebut didistribusikan di antara dua fasa yaitu fasa gerak dan fasa diam. Fasa gerak adalah fasa yang membawa cuplikan, sedangkan fasa diam adalah fasa yang menahan cuplikan secara efektif (Sastrohamidjojo, 1991). Pada KLT pemisahan yang terjadi secara adsorbsi, sedangkan dalam kromatografi kertas proses pemisahannya terjadi secara partisi. Fase diamnya berupa padatan penyerap yang dihasilkan pada sebuah plat datar dari gelas, plastik atau alumunium sehingga membentuk lapisan tipis dengan ketebalan tertentu. Fase diam atau penyerap yang bisa digunakan sebagai pelapis plat adalah silika gel (SiO2), selulosa, alumina (Al2O3) dan kieselgur (tanah diatome). Kebanyakan penyerap yang digunakan adalah silika gel, dimana telah tersedia plat yang siap pakai (Padmawinata, 1991). Pelarut sebagai fasa gerak atau eluen merupakan faktor yang menentukan gerakan komponen-komponen dalam campuran. Pemilihan pelarut tergantung pada sifat kelarutan komponen tersebut terhadap pelarut yang digunakan. Trappe dalam Sastrohamidjojo mengatakan bahwa kekuatan dari elusi deret-deret pelarut untuk senyawa-senyawa dalam KLT dengan menggunakan silika gel akan turun dengan urutan sebagai berikut : air murni > metanol > etanol > propanol > aseton > etil asetat > kloroform > metil klorida > benzena > toluena > trikloroetilen >tetraklorida > sikloheksana > heksana. Fasa gerak yang bersifat lebih polar digunakan untuk mengelusi senyawa-senyawa yang adsorbsinya kuat, sedangkan fasa gerak yang kurang polar digunakan untuk mengelusi senyawa yang adsorbsinya lemah (Sastrohamidjojo, 1991). Analisis suatu senyawa dalam KLT biasanya dilakukan dengan dibandingkan terhadap senyawa standarnya. Pengamatan yang lazim berdasarkan pada kedudukan dari noda relatif terhadap batas pelarut yang dikenal sebagai harga Rf (Retardation factor) yang didefinisikan sebagai berikut : Rf = jarak komponen yang begerak atau jarak pelarut yang bergerak. Identifikasi awal senyawa pada kromatogram dapat dilakukan dengan melihat warna noda di bawah sinar UV atau dengan menyemprotkan pereaksi warna sesuai dengan jenis atau kelas senyawa yang dianalisis.

5

Menurut Sastrohamidjojo (1991) faktor-faktor yang mempengaruhi gerakan noda dalam kromatografi lapis tipis yang mempengaruhi harga Rf adalah sebagai berikut : a. Struktur kimia dari senyawa yang dipisahkan. b. Sifat dari penyerap dan derajat aktivitasnya. Aktivitas dicapai dengan pemanasan dalam oven. Perbedaan penyerapan akan memberikan perbedaan yang besar terhadap harga-harga Rf meskipun menggunakan pelarut yang sama. c. Tebal dan kerataan lapisan penyerap. Ketidakrataan akan menyebabkan aliran pelarut menjadi tidak rata dalam daerah yang kecil dari plat. d. Pelarut dan derajat kemurnian fasa gerak. e. Derajat kejenuhan dari uap dalam pengembang. f. Jumlah cuplikan yang digunakan. Penetesan cuplikan dalam jumlah yang memberikan tendensi penyebaran noda-noda dengan kemungkinan terbentuk ekor dan efek tak kesetimbangan. g. Pemisahan sebaiknya dilakukan pada suhu tetap untuk mencegah perubahanperubahan komposisi pelarut yang disebabkan penguapan dan perubahan fasa. h. Kesetimbangan dalam lapisan tipis dimana bejana harus jenuh dengan uap pelarut. E. Pelarut Pemilihan pelarut yang tepat akan memberikan efektifitas yang tinggi dengan memperhatikan kelarutan senyawa bahan alam terhadap pelarut tersebut. Secara umum pelarut metanol merupakan pelarut yang paling banyak digunakan dalam proses isolasi senyawa organik bahan alam, karena dapat melarutkan seluruh golongan metabolit sekunder (Darwis, 2000). Pelarut yang digunakan pada penelitian ini yaitu etanol didasarkan pada pemilihan variasi pelarut yang sesuai. Pelarut tersebut memiliki titik didih yang cukup rendah, pelarut dapat mudah diuapkan tanpa menggunakan suhu yang tinggi, bersifat inert, dapat melarutkan senyawaan yang sesuai dengan cukup cepat serta memiliki harga yang terjangkau (Guenther, 2006). Menurut Sudarmadji (2003) kelarutan terhadap air dari etanol tersebut juga semakin tinggi dengan semakin tingginya tingkat kepolarannya. Titik didih masing etanol 78 °C.

6

Flavonoid mempunyai sejumlah gugus hidroksil sehingga merupakan senyawa polar (Markham, 1988). Bimakra dkk (2010) melakukan isolasi flavonoid dengan pelarut methanol, etanol p.a dan etanol 70%. Pada hasil penelitiannya menunjukan bahwa pelarut dengan kepolaran yang lebih rendah dapat mengekstrak flavonoid dalam konsentrasi tinggi. Etanol pa dan etanol 70% merupakan pelarut yang aman dengan toksisitas rendah dari pada methanol. Selain itu, konsentrasi flavonoid yang tinggi juga dapat diisolasi dengan pelarut tersebut.

III.

ALAT DAN BAHAN a. Alat 1. Seperangkat alat maserasi 2. Seperangkat alat KLT 3. Beaker glass 4. Magnetic Stirrer 5. Rotary evaporator 6. Cawan Porselin b. Bahan 1. Simplisia Temulawak 2. Etanol 3. N-Heksan 4. Standar Kuersetin 5. Etil Asetat

7

IV.

CARA KERJA a. Ekstraksi dan KLT Preparative Curcuma xanthorrhiza

Gambar 2. Ekstraksi dan KLT Preparative

8

b. KLT Identifikasi

Gambar 3. KLT Identifikasi

9

V.

HASIL a. Minggu ke 1 1. Nama simplisia

: Curcuma xanthorrhiza

2. Metode ekstraksi

: Maserasi

3. Pelarut

: Etanol

4. Jumlah pelarut

: 200ml

5. Durasi

: 60 menit (1 jam)

b. Minggu ke 2 1. Pemerian ekstrak a. Aroma

: Bau khas aromatik

b. Warna

: Jingga Kecoklatan

c. Bentuk/tekstur

: Ekstrak kental

d. Rendemen (%)

: 5,9 gram x100%  14,75% 40 gram

2. Hasil Pengamatan dengan kromatografi a. Fase diam

: Silica GF245

b. Fase gerak

: N-Heksan : Etil Asetat (4:1)

c. Pembanding

: Kuersetin

d. Deteksi

: UV 245

e. Perhitungan Rf

10

Rf Standar

5,8cm  0,73 = 8cm

Rf Sampel

6,2cm  0,78 = 8cm

f. Gambar KLT

:

Hasil KLT Preperatif

a

Gambar 4. Bercak dari Ekstrak Temulawak

b

Gambar 5. Hasil Kerokan Ekstrak Temulawak

11

Keterangan : a = Bercak dari Ekstrak Temulawak b = Hasil Kerokan Ekstrak Temulawak

Bercak dari Ekstrak Temulawak

Bercak dari Pembanding Quercetin

Gambar 6. Hasil KLT Idetifikasi

12

VI.

PEMBAHASAN Pada praktikum kali ini dilakukan isolasi flavonoid dari temulawak dan

identifikasi menggunakan kromatografi lapis tipis. Temulawak memiliki kandungan sebagai berikut protein pati sebesar 29-30%, kurkumin satu sampai 2%, dan minyak atsirinya antara 6-10% .Temulawak juga mempunyai beberapa kandungan senyawa kimia antara lain berupa fellandrean dan tumerol atau yang sering disebut minyak menguap, kemudian minyak atsiri, kamfer, glukosida, fluymetik karbinol. Temula...