Limpieza, asepsia y equipos de laboratorio PDF

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INTRODUCCIÓN Mantener el mayor cuidado en la limpieza del material y del laboratorio mismo es fundamental para realizar trabajos confiables. El medio ambiente se encuentra, por lo general, cargado de microorganismos diversos que pueden contaminar el ámbito de trabajo, por ello es conveniente no descuidar la limpieza de los materiales, instrumentos y equipo necesario para el trabajo. Los materiales de vidrio y cualquier otro elemento deben estar profundamente limpios antes de comenzar el trabajo. La sala de laboratorio es el adiestramiento en las principales técnicas de colecta, cultivo, identificación e inoculación de los organismos causales de las enfermedades de las plantas. El presente trabajo tiene la intención de brindar la mínima información necesaria en el trabajo práctico de la Fitopatología, tratando siempre de establecer la relación hospedero-patógeno, al aportarles el conocimiento básico para que en un futuro puedan diagnosticar cuando un cultivo está enfermo o dañado, y tengan noción de los métodos y técnicas de control que podrían emplear para lograr una mejor producción. La limpieza, desinfección y esterilización de superficies, equipos, aparatos e instrumentos, son procesos que están orientados a la minimización de la transmisión de infecciones, tanto de los estudiantes como del docente encargado. Al ingresar a un laboratorio de fitopatología debemos tener conocimiento de la correcta utilización del material sanitario y del producto. Cada vez que se limpian, se desinfectan o esterilizan productos sanitarios se forma parte de una cadena, por ello se adquiere una responsabilidad que obliga a que se garantice la correcta ejecución de estos procesos. Es importante recordar que al realizar cualquier procedimiento se debe tener la seguridad requerida y considerar todas las muestras como alto riesgo.

OBJETIVOS

 Que el estudiante se familiarice con los métodos y procesos de desinfección y esterilización comúnmente utilizados en un laboratorio de fitopatología  También la verificación del proceso de limpieza y desinfección realizado en las superficies de los laboratorios  Comprender e identificar la utilidad de los instrumentos y equipos de laboratorio  Identificar los símbolos de peligrosidad para ser cuidadosos y no poner en riesgo la salud y la vida de otros ni la de nosotros mismos  Conocer a través de la práctica directa los elementos y métodos a utilizar en la limpieza y asepsia del laboratorio en el laboratorio de fitopatología, también los métodos más comunes de esterilización del equipo a usar en las prácticas como también de los medios de cultivo.

LIMPIEZA, ASEPSIA Y ESTERILIZACIÓN DE EQUIPOS DE UN LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA MARCO TEORICO CONCEPTOS DESINFECTANTE: Sustancia química que destruye los microorganismos y que se aplica sobre material inerte sin alterarlo de forma sensible. MICROORGANISMO PATÓGENO: Microorganismo capaz de causar la enfermedad. LIMPIEZA: Procedimiento físico-químico encaminado a arrastrar cualquier material ajeno del objeto que se pretende limpiar. DESINFECCIÓN: Proceso capaz de eliminar prácticamente todos los microorganismos patógenos conocidos, pero no todas las formas de vida bacterianas (endosporas), sobre objetos inanimados. ASEPSIA: Serie de procedimientos o actuaciones dirigidas a impedir la llegada de los microorganismos patógenos a un medio aséptico (libre de microorganismos patógenos), es decir, se trata de impedir la contaminación. ANTISEPSIA: Conjunto de acciones emprendidas con el fin de eliminar los microorganismos patógenos presentes en un medio, o inhibir su proliferación. ANTISÉPTICO: Sustancia química de aplicación tópica sobre los tejidos vivos (piel intacta, mucosas, heridas, etc.), que destruye o inhibe los microorganismos sin afectar sensiblemente a los tejidos sobre los que se aplica.

PARA ELLO NESECITAMOS: LEGIA: químicamente hipoclorito de sodio, es un desinfectante de bajo costo. DETERGENTE: Es una sustancia tensioactiva y antipática que tiene la propiedad química de disolver la suciedad o impurezas de un objeto, ALCOHOLES: es muy utilizado en trabajos de laboratorio para desinfectar la superficie de la cámara de flujo laminar así como las superficies del trabajo. Los alcoholes actúan como desnaturalizando las proteínas, disolviendo las capas lipídicas y como agentes deshidratantes.

LIMPIEZA DEL LABORATORIO Es necesario tener los ambientes de trabajo así como los utensilios, materiales de vidrio, etc. en completo estado de asepsia. Existe un conjunto de procedimientos para eliminar o reducir la contaminación por microorganismos ya sean hongos entomopatógenos, fitopatógenos, patógenos del hombre, saprofitos, etc. que puedan interferir con el trabajo que se desea realizar. Éstos pueden estar flotando en el aire, depositados sobre las superficies de trabajo Y del ambiente como paredes, techos, estantes, entre otros. Métodos Químicos: -Antisépticos (Ej. Alcohol). -Desinfectantes / Esterilizantes (Ej. Cloro). Los grupos alcohólicos como parte de su mecanismo de acción destruyen la membrana celular y desnaturalizan las proteínas, presentan actividad antimicrobiana y sirven de solvente de otros productos, entre ellos muchos antisépticos y desinfectantes, lo que potencia su actividad:

ALCOHOLES Como desinfectante se utilizan dos compuestos, el alcohol etílico y el alcohol isopropílico, cuyas propiedades bactericidas han sido subestimadas largo tiempo. Actualmente el alcohol a concentración del 70% se considera un desinfectante intermedio, y por tanto sin capacidad esporicida. A concentraciones superiores se ha comprobado que disminuye su eficacia. Puede utilizarse en el tratamiento de las superficies externas de diversos equipos, si bien no es el desinfectante ideal. Su uso repetido deteriora los plásticos y gomas, sobre todo si los dejamos sumergidos.

COMPUESTOS CLORADOS El más ampliamente utilizado es el hipoclorito de sodio (lejía doméstica). Su actividad germicida se considera especialmente útil en la limpieza de suelos y paredes. Normalmente se adquiere a concentraciones del 5%, por lo que deberá ser diluida a una proporción de l:l0 con agua para limpiar una superficie manchada con residuos diversos, y de l:25 para realizar la limpieza rutinaria. Como inconvenientes tiene el que se inactiva por materia orgánica, así como su corrosividad, de ahí que no deba utilizarse en la desinfección del instrumental. Además las disoluciones de hipoclorito pierden gradualmente su efectividad, siendo aconsejable realizar una nueva disolución cada vez que se precise su uso.

METODOS ESTERILIZACIÓN DE EQUIPOS Y DE MEDIOS DE CULTIVO

Durante los trabajos con microorganismos, específicamente hongos, es necesario y fundamental trabajar con mucha asepsia, debido a que es indispensable el mantenimiento de los cultivos puros. Por lo tanto, es conveniente que luego de lavar todo el material de vidrio, éste sea enjuagado dos veces con agua destilada, para eliminar todo residuo de detergente antes de ser esterilizado.

Esterilización La esterilización de los materiales de vidrio y medios de cultivo nos asegura un estado de asepsia que permite trabajar sin dificultades cuando se ejecuta en forma eficiente. Existen diversos métodos a usar

Métodos Físicos: Calor Húmedo (Ej. Autoclave). Calor Seco (Ej. Horno). Radiaciones (Ej. Ultravioletas). Filtración (Ej. Filtros Millipore ®).

CALOR SECO -La esterilización por calor seco se consigue con el uso de un horno o estufa y es útil en el caso de esterilizar placas petri y otros materiales de vidrio. La temperatura a la que se somete el material durante 90 a 120 minutos debe fluctuar entre 160 y 180 oC. Es eficaz, siempre y cuando se deje espacio libre para que el aire caliente circule alrededor de los materiales. -El uso del fuego directo tambien es usado para esterilizar objetos de metal como pinzas, bisturíes, agujas a través de mecheros de alcohol o estufas a gas, que procederán pasando los instrumentos por etanol 96 y posteriormente flamearlos.

CALOR HUMEDO La esterilización por calor húmedo o a presión de vapor de agua se consigue con el uso de una autoclave. Se encuentran de varios modelos y tamaños, pero todas tienen el mismo principio de funcionamiento. A mayor presión, mayor es la temperatura de ebullición del agua; cuando la presión aumenta a 15 libras (dos atmósferas), la temperatura llega a 121.6 C. No existe microorganismo que tolere esta temperatura durante 15 minutos. El tiempo es el factor que permite que el calor penetre en la masa de esterilización y se absorba. Cuando se esterilizan medios de cultivo en frascos de vidrio, se debe asegurar que éstos ocupen no más de las tres cuartas partes del frasco para permitir una ligera ebullición sin derramarse, por lo mismo, las tapas deben colocarse ligeramente sueltas. Los frascos Erlenmeyer se deben taponar con algodón para permitir la circulación del vapor. Los tubos de ensayo conteniendo medio, se deben colocar en una gradilla o rejilla.

RADIACIÓN ULTRAVIOLETA Los ácidos nucleicos y las proteínas absorben la radiación ultravioleta, esa absorción causa modificaciones químicas, entre ellas, la formación de dímeros de timina los cuales ocasionan lecturas erróneas del código genético, produciendo mutaciones que impiden funciones vitales de los microorganismos, por lo tanto, éstos mueren. La longitud de onda más efectiva para matar los microorganismos es 253,7 nm. USOS: Desinfección de superficies y de aire. Limitaciones: Escaso poder de penetración,

FILTRACION La esterilización por filtración se logra por el paso de un líquido o un gas a través de un material capaz de retener los microorganismos presentes. La esterilización por filtración se emplea para materiales sensibles al calor, tales como ciertos medios de cultivo Hay varios tipos de filtros, entre ellos los que más se usan son los filtros de profundidad y los filtros de superficie o filtros de membrana. Para la filtración esterilizante se pueden usar combinaciones de un filtro de profundidad con un filtro de superficie que tenga un tamaño de poro de 0.22 µm. La mayor parte de los filtros de membrana se pueden esterilizar en autoclave y luego se manipulan asépticamente al ensamblar el equipo.

CONCLUSIONES Tanto la limpieza de la zona de trabajo con agentes desinfectantes como de los, instrumentos y equipo en general usado métodos de esterilización, nos sirven para aislar a los agentes patógenos de los medios de cultivo en el cual se cultivara un patógeno definido. La falta de asepsia, producto de una mala práctica a la hora de la limpieza y esterilización de los instrumentos y equipos, conllevaría a una rápida e indeseada contaminación de los cultivos, alterando de esta manera los resultados finales, proporcionándonos información errónea o de plano, la pérdida total de la práctica ejecutada, obligándonos a repetir los procedimientos desde cero, perdiendo así tiempo y recursos no reutilizables.

Literatura consultada -Manual de Laboratorio para el Manejo de Hongos Entomopatógenos. Lima, Perú; Centro Internacional de la Papa (CIP), Lima, Perú, 62 p. - Clavell Lluis; Pedrique de A. Magaly. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales. Segunda Edición. -French, R.E. y T. Hebert. 1982. Métodos de investigación fiotopatológica. 1ª ed., 1ª reimpresión. IICA - Serie de libros y material educativo. No. 43, 290 p. San José de Costa Rica. - Terleckyj B, Axler DA. Quantitative assay of fungicidal activity of disinfectants. Antimicrobial Agents Chemother. 1987;31(5):7948. - Echeverri LC, Cifuente GC, Granado JM, Arias J, Fernández C. Cinética de desinfección para cinco desinfectantes utilizados en Industria farmacéutica. Rev Cubana Farm [Internet]. 2007 [citado 20 Oct 2012];41(2)...