Metodo del Estandar O Patron Interno PDF

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descripcion del metodo de calibracion por estandar interno, analisis instrumental...

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METODO DEL ESTANDAR O PATRON INTERNO En el campo industrial de la medicina, alimentos y controles de calidad es necesaria la aplicación de métodos de calibración de mucha exactitud y precisión además de sensibles y con bajos límites de detección debido a estos factores se recurre a técnicas cromatográficas como la cromatografía de gases y la cromatografía liquida de alta resolución cuyos resultados son cuantificados gracias a métodos como el método del patrón interno que toma como parámetro analítico la relación de la altura y el área de los picos de un analito y un estándar interno .

Un estándar interno es una cantidad conocida de un compuesto diferente del analito que se añade a la muestra desconocida, generalmente es utilizado cuando existen variaciones en las señales de varios experimentos y cuando hay perdidas de la muestra antes del análisis, es decir, durante su preparación. Para llevar a la practica el método de patrón interno se debe seguir una serie de pasos: 1. Preparación de una serie de disoluciones del patrón correspondiente a la sustancia a analizar, estas disoluciones deben tener concentraciones crecientes con intervalos similares a las concentraciones del analito 2. Se añade a cada disolución patrón y a la muestra un mismo volumen de patrón interno que debe ser similar al analito a determinar, pero no debe estar presente en la muestra. 3. En el cromatógrafo, se coloca el mismo volumen de muestra y disolución patrón que contienen el patrón interno, posteriormente se obtienen los cromatogramas correspondientes.

4. Se lleva a cabo la comparación de las señales en los cromatogramas de cada disolución, así como de la muestra Ejemplo:

Si se quiere determinar un analito cuya concentración en el extracto de la muestra, se espera que esté comprendida en un margen de 350 a 550 mg/L, se podrían preparar e inyectar en el cromatógrafo 4 disoluciones patrón que además contuvieran una misma concentración de patrón interno (p.i.), con las siguientes concentraciones: • Patrón 1: 300 mg/L analito + 350 mg/L p.i. • Patrón 2: 400 mg/L analito + 350 mg/L p.i. • Patrón 3: 500 mg/L analito + 350 mg/L p.i. • Patrón 4: 600 mg/L analito + 350 mg/L p.i. De la misma manera, a la muestra se le adiciona el mismo volumen de patrón interno, dejando como incógnita la concentración del analito: • Muestra: ¿? mg/L analito + 350 mg/L p.i. Se obtienen los cromatogramas: El área de cada pico puede estar dada por el instrumento de análisis

Patrón 1

Patrón 2

Patrón 3

Patrón 4

Muestra

Para cuantificar las señales obtenidas, los datos son organizados en una tabla para comparar las concentraciones

concentracion de analito concentracion de p .i .

y las áreas

areade analito areade p . i .

La curva de calibración es obtenida por el método de mínimos cuadrados

Donde X y Y son las relaciones de concentraciones y áreas respectivamente, entre analito y patrón interno, de esta forma es posible obtener el valor de la concentración del analito en la muestra. Para el ejemplo mencionado el valor despejado para X es de 1.56; la concentración del analito es obtenida multiplicando el valor de X por la concentración del patrón interno lo que arroja un resultado de 544.8 mg/L CONCLUSIONES El uso de métodos de calibración en análisis instrumental, en específico el método del patrón interno nos permite obtener curvas de calibración a partir de los resultados de métodos de análisis cromatográfico como función de la relación de las concentraciones y alturas de las señales obtenidas proporcionando una estimación muy exacta, precisa y sensible de la cuantificación de un analito.

BIBLIOGRAFIA Skoog, D.A.; Leary, J.J: “Análisis Instrumental”, Ed. McGraw Hill / Interamericana de España, Madrid, 1994, pág. 674–703. Fernández, I; García E. (2012)” Cuantificación de compuestos por cromatografía: Método del Patrón Interno”, Departamento de Tecnología de Alimentos, Universitat Politécnica de Valencia. Castañeda, A. (2011) “Representaciones gráficas de las relaciones propiedad concentración con fines cuantitativos”, Instituto de ciencias básicas e ingeniería, Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo...