Podstawowe techniki inżynierii genetycznej PDF

Preview

Summary

Biotechnologia - podstawowe techniki inżynierii genetycznej - notatki z lekcji...

Description

Podstawowe techniki inżynierii genetycznej 1. Organizm Genetycznie Modyfikowany (GMO) - organizm którego cechy dziedziczne zostały zmienione w wyniku ingerencji w jego materiał genetyczny 2. Sposoby otrzymywania GMO - wstawienie dodatkowej kopii genu - zmiana aktywności genu (hamowanie) - wstawianie genu innego organizmu (organizmy transgeniczne) 3. Techniki inżynierii genetycznej a) sekwencjonowanie DNA - ustalanie kolejności nukleotydów DNA cele sekwencjonowania - informacje o budowie i ekspresji genów - właściwości kodowanych białek - uzyskiwanie informacji jak modyfikować organizmy - sprawdzenia wyników modyfikacji b) Enzymy restrykcyjne - przecinają DNA w miejscach o określonej sekwencji Każdy enzym rozpoznaje sekwencje od 4-8 nukleotydów,posiadają oś symetrii i nazywają się polidromowymi. cel - precyzyjne wycięcie genów interkalacja - łączyć się nietrwale z DNA c) Elektroforeza - podział cząsteczek w polu elektrycznym ze względu na wielkość,pole i ładunek w żelu skupiającym (agarozowy/poliakrylamidowy) oznaczone markerem wielkości d) metoda PCR - powielanie cząsteczek DNA łańcuchowa reakcja polimerazy,zachodzi w termocyklerze ● 90-95°C - następuje denaturacja (rozplatanie DNA) ● 50-60°C - przyłączanie się starterów ● 72°C - dobudowywanie nici komplementarnej e) Transformacja genetyczna Tworzenie organizmów transgenicznych Do przenoszenia DNA z jednego organizmu do drugiego używa się wektorów np.plazmidów bakteryjnych Cechy dobrego wektora - mały - dobrze wnika w komórki - pojemny Biblioteka genomowa - kolekcja bakterii zawierających plazmidy z całą informacją genetyczną organizmu. f) Odwrotna transkryptaza Otrzymanie DNA bez intronów g) Sondy molekularne jednoniciowy fragment kwasu nukleinowego- sztucznie utworzony,specyficznie wyznakowany (np.związki fluorescencyjne) hybrydyzacja - komplementarne połączenie sondy z nicią DNA...