Practica 1 Extraccion de ADN de un plátano PDF

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UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE TAPACHULA INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL BIOINGENIERÍA Extracción de DNA. AUTORES:

Cruz Saquin, D., L., Moreno Arias, M., Rodríguez Martínez, Y., Cárdenas Gálvez, F., Alegría, D

DIRECCIÓN: Universidad Politécnica de Tapachula. Carretera a puerto madero km. 24+300 Tapachula, Chiapas C.P. 30700 Email: [email protected] ABSTRACT PALABRAS CLAVE: PLASMIDOS, ÁCIDOS NUCLEICOS, MEMBRANA, EXTRACCIÓN.

INTRODUCCION Los plásmidos son moléculas de material genético (DNA) que de manera independiente se replican del cromosoma. Estos elementos genéticos extra cromosómicos se han encontrado esenciales en todos los tipos de bacterias que hasta el momento han sido estudiadas. (Santos López, 2017) Los plásmidos poseen mecanismos intrínsecos para su duplicación y dependiendo del tamaño pueden codificar pocas o miles de proteínas. Son llamados mecanismos móviles porque tienen la capacidad de transferirlos de uno a otro, siempre que los organismos lo posean, de esta manera intercambian características genéticas determinadas que pueden ser inherentes de ese organismo o adquiridas por la manipulación técnica. De manera general y concreta los plásmidos funcionan como vehículo para la trasferencia rápida de características de un organismo a otro. El tamaño de los plásmidos varía, desde miles a cientos de miles de pares de bases (comparándolo al cromosoma bacteriano) y son, con mayor frecuencia, moléculas circulares de ADN de doble cadena. MATERIALES Y MÉTODOS REACTIVOS 10 ml de Jabón líquido; 90 ml de Agua; 85 ml de Alcohol 96°; 250 gr de Sal; 1/2 Plátano MATERIALES Recipiente o taza medidora; Bolsa ziploc; Filtro de papel; Cuchillo y cuchara; Pinzas; Embudo; Vaso de vidrio. Para el proceso de extracción, el cual es una técnica empleada para separar un producto de una mezcla, se debe adicionar en un vaso 90 mililitros

de agua junto con 10 mililitros de detergente. El cual al hacer contacto con la célula genera una ruptura de la membrana celular capturando lípidos y proteínas, 5 gr de sal común (cloruro de sodio) la cual sirve para aumentar la solubilidad del ADN, ya que los iones de sodio de carga positiva, interactúan con los grupos fosfatos del ADN cargados negativamente, se mezcla homogéneamente. Cortar el plátano a la mitad para que se utilice solo una parte, retirarle la cáscara al plátano para posteriormente pasarlo a una bolsa tipo Ziploc, la cual gracias a su sello hermético evitara que el líquido se derrame, posteriormente añadir la mezcla que sé hizo previamente (Agua, sal y detergente), después retirar la mayor cantidad de aire a la bolsa para cerrarla bien y comenzar a disgregar el plátano junto con la mezcla hasta lograr homogeneidad. Se filtra la mezcla resultante utilizando un filtro de papel y un colador, con este paso separamos los tejidos del plátano y de las células que se lograron romper en los pasos anteriores, dejando retenidas las partes más grandes de la mezcla que no se disgregaron, con ayuda de una cuchara tratar de disgregar las partes grandes del plátano para que salga la mayor cantidad de líquido, el cual contiene el DNA libre, y desechar las partes solidas que no se lograron disgregar. Con ayuda de un embudo colocar el líquido obtenido anteriormente, a una cantidad 1:1 de alcohol frio de 96° (el cual nos servirá para que el DNA no se degrade con el aire y al no ser soluble en el ayuda también para tener una mayor apreciación de faces) la cual fue de 85 mililitros de cada uno. Por la parte de la pared del envase de manera cuidadosa para evitar que los líquidos se mezclen.

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UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE TAPACHULA INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL BIOINGENIERÍA RESULTADOS En la extracción de DNA los resultados fueron exitosos, acorde a la metodología que se siguió, fue posible apreciar como la mezcla heterogénea. Al momento de añadirle alcohol se pudo apreciar la separación de tres capas, la primera era la del alcohol, en la interface el DNA y en la ultima los restos celulares del plátano, mezclados con agua. DISCUSIÓN Los resultados obtenidos en la práctica fueron favorables, pues se cumplió el objetivo de poder percibir las fases de nuestra mezcla, más específicamente, apreciar el ADN que contiene el plátano, aunque comparando los resultados con una práctica elaborada por una alumna de la UAB, publicado en la página web genética.uab.cat, el procedimiento que allí se describe es un poco diferente, ya que después de disgregar la mezcla del detergente, platano, agua y sal, meten a baño maría la mezcla resultante y posterior a eso, la colocan en un recipiente con agua fría. La explicación que se da en este trabajo es que se le aplica el baño maría ya que “se utiliza para acelerar el proceso de rotura de las membranas y para ayudar a disolver la bicapa de fosfolípidos mediante la desnaturalización de las proteínas de membrana y rotura de los enlaces que mantienen los fosfolípidos unidos. El calor “ablanda” la membrana“(Martínez, 2015), con respecto al agua fría menciona que “El enfriamiento de la solución ayuda a prevenir la desnaturalización que podría destruir el DNA si se expusiera al calor de manera prolongada”(Martínez, 2015). En esa práctica se hace el uso de jugo de piña, especificando que “El zumo de piña contiene bromelaína, una enzima capaz de hidrolizar las proteínas y por tanto capaz de separar el DNA de las histonas”. (Martínez, 2015) Lo que me hace pensar que a pesar de metodología que utilizamos para esta práctica se pudo observar el ADN, probablemente hubiéramos observado el ADN de una manera más pura y clara en la separación de las fases utilizando métodos aplicados en la práctica de Martínez.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Santos López, Alfonso (2017) Importancia de los plásmidos ColE1 en la resistencia a antibióticos. [Tesis] Pedro D. Loeza Lara, Juan J : 79-86, 2004 Replicación de plásmidos Sakai H y Komano T (1996) DNA replication ofthe IncQ broad-host-range plasmids in gramnegative bacteria. Biosci Biotechnol Biochem 60: 377-382. Rev. Soc. Ven. Microbiol. v.25 n.1 Caracas ene. 2005 Murray R.K., Mayes P.A., Granner D.K., Rodwell V.W.: Harper Bioquímica Ilustrada.Manual Moderno. México, 2004. 3. Laura Martínez Martín. (2015). EXTRACCIÓN DE DNA Experimento con reactivos de la vida cotidiana. Febrero, 2020, de Genética UAB Sitio web: genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/La ura%20Martínez%20Martín2015_4_19P21_19.pdf ANEXOS

Fig. 1 en la siguiente figura se muestra el momento en el que se disgrega el plátano en la bolsa tipo Ziploc.

CONCLUSIONES Los resultados obtenidos se acercaron a lo esperado, que es observar el ADN de la fruta, aunque cabe mencionar que en base a lo mencionado en la discusión de este reporte, probablemente se puede llegar a obtener un resultado más claro si se utiliza los métodos aplicados en la metodología de Martínez en su práctica. 4ª Avenida Sur N° 2, Colonia Centro entre Avenida Central y 2ª Calle Poniente. Tapachula, Chiapas. C P 30700

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Fig. 2 En la siguiente Fig. 3 En la siguiente figura se aprecia el figura se aprecian las momento en el que fases en las que se se filtró la mezcla separó nuestra con ayuda de un mezcla. colador y filtro de 4ª Avenida Sur N° 2, Colonia Centro entre Avenida Central y 2ª Calle Poniente. Tapachula, Chiapas. papel. C P 30700 Conmutador: 01 962 64 2 57 31; 11 8 41 14; 11 8 37 69 www.uptapachula.edu.mx...