Practica 5 Extraccion DE ADN Bucal 58f5c8e4eb31430 ec81f6ed7495a3de1 PDF

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Práctica de extracción de ADN bucal realizada en el grado superior de Anatomía Patológica y Citodiagnóstico en la asignatura de Biología molecular con el fin de ver la estructura del ADN en persona y con ayuda de todos los materiales del laboratorio...

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PRACTICA 5 EXTRACCION DE ADN BUCAL

Objetivo: Aislar el ADN de la saliva. Fundamento: El proceso de extracción de ácidos nucleicos consiste en la obtención de un lisado de células homogéneas donde los ácidos nucleicos aparecen libres de las estructuras celulares que los protegen. Se utiliza una solución de cloruro sódico (NaCl) que modificará las circunstancias del medio, provocando que la concentración de sales dentro de la célula sea menor que la del exterior, esto genera una presión osmótica, por ello la célula intenta igualar las concentraciones entre el interior y el exterior de la célula (lo que llamamos proceso de ósmosis), como las membranas celulares son semipermeables sólo permiten pasar agua, pero no sales, y para igualar las concentraciones hay que diluir el interior de la célula, lo que se consigue introduciendo agua en el interior de la célula hasta que explote. Además, se usan detergentes (solución jabonosa) que ayuda a destruir la bicapa lipídica, tanto la de la membrana celular como la de la membrana nuclear, también ayuda a desnaturalizar las proteínas. Todo esto provoca la lisis o ruptura de la membrana celular y nuclear, liberando su contenido. Por último, se añade alcohol, como las proteínas son insolubles en el alcohol, tienden a agregarse y de este modo pueden observarse como una maraña o hebra de ADN visible a simple vista. Materiales y reactivos: ● Vaso de precipitados o de plás.co (1). ● Pipetas pasteur. ● Tubos de ensayo con tapón ● Varilla agitadora. ● Gradilla. ● Vaso de precipitados (2). ● Pipetas graduadas.

● Prepipetas. ● Frigorífico. ● Agua des.lada. ● Alcohol 96 %. ● Cloruro sódico (preparar 10 ml de NaCl al 8%. Necesitamos 0,8 gr de sal que se diluirán en 10 ml de agua destilada). ● Solución jabonosa (preparar 10 ml de solución jabonosa al 30%, 3 ml de jabón en 10 ml de agua.)

Procedimiento: 1. Preparar los reactivos necesarios y materiales realizando los cálculos necesarios. 2. En un vaso de precipitados o vaso normal depositamos 10 ml de agua destilada. 3. Nos enjuagamos la boca con ese agua durante 1-2 minutos. Es conveniente antes de enjuagarse la boca darse pequeños mordiscos en las mejillas y lengua sin llegar a provocar un sangrado. 4. Depositamos el agua en un vaso de precipitados o vaso normal. 5. Trasvasamos 5 ml de la mezcla anterior en un tubo de ensayo. 6. Añadimos 1 ml de la solución de cloruro sódico y mezclamos suavemente. 7. Añadimos 1 ml de la solución jabonosa y mezclamos suavemente. 8. Dejar reposar 1 minuto. 9. Añadimos 5 ml de alcohol etílico dejándolo deslizar suavemente por la pared del tubo colocándolo en posición inclinada (es muy importante que no se mezclen los líquidos). 10. Incubar 5-10 minutos a temperatura ambiente. 11. Los filamentos de ADN subirán a la superficie en la fase acuosa. Recomendaciones: - Si no se tiene tubos de ensayo con tapón, se podrá usar un papel de parafina. - El alcohol es recomendable mantenerlo en el frigo hasta su uso. - Si queremos recoger los filamentos de ADN, se podrá hacer mediante un palillo o asa de siembra mediante movimientos circulares....