Practica No. 11 Determinación de colesterol en la yema de huevo y separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina”” PDF

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Conclusión.Para la muestras orgánicas el método por Leibermann-Burchard da una prueba colorimétrica positiva con la presencia de colesterol. El valor de la absorbancia permite conocer la concentración de colesterol en la muestra. En comparación es inexacta con la prueba enzimática. El colesterol al ...

Description

Instituto Politécnico Nacional Escuela nacional de Ciencias Biológicas. Departamento de Bioquímica. Practica No. 10 "Determinación de colesterol en la yema de huevo y separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina”

Grupo: 2OM1 Objetivo. Conocer la aplicación de la técnica de cromatografía en capa fina para la separación de los fosfolípidos de la yema de huevo. Discutir las ventajas de la técnica de separación respecto a la cromatografía en papel. Determinar la concentración de colesterol en la yema de huevo, por el método de Lieberman-Burchard.

Resultados Para la realización de la cromatografía en capa fina se implementaron 4 reveladores para la identificación de grupos específicos de fosfolípidos. En molinato se esperaban 5 compuestos de los que se detectaron 4, al no poder diferenciar dos compuestos sobrepuestos por tener el mismo Rf y parecerse estructuralmente entre el fosfatidil colina (grupo colina) y fosfatofil (grupo amino) serina, los reveladores restantes ayudan a la identificación. El bismuto presenta fosfatidil colina mientras que la ninhidrina fosfotidial serina.

Imagen 1. Cromatogramas obtenidos durante la practica. Molinato, bismuto, ninhidrina, yodo respectivamente

Grafica 1. Curva tipo de Absorbancia contra µg de colesterol.

Conclusión. Para la muestras orgánicas el método por Leibermann-Burchard da una prueba colorimétrica positiva con la presencia de colesterol. El valor de la absorbancia permite conocer la concentración de colesterol en la muestra. En comparación es inexacta con la prueba enzimática. El colesterol al ser componente de membranas celulares y precursora de hormonas y vitaminas es una biomolécula importante. La cromatografía por capa fina en cierto grado es mejor que la de papel ya que se pueden realizar diferentes pruebas de una o varias muestras y poder determinar características generales de sus componentes, es más rápida. Se evidencio que la concentración de fosfolípidos entre muestras depende de las demandas del organismo que produce el huevo. Las propiedades de polaridad de los fosfolípidos permiten su separación por cromatografía.

Tabla 2. Cálculos en tabla del rendimiento total de µg de colesterol por yema de huevo

Discusión La yema de huevo está constituida en su mayor parte por lípidos y proteínas, se muestra una discrepancia en los valores reportados y el valor investigado (47.84 mmol/L), lo que nos indica que no se presenta un valor estándar de dicha concentración, del mismo modo que la reacción no es exactamente especifica para la determinación únicamente del colesterol, por lo que la reacción no se llevo únicamente con el colesterol de la yema de huevo. En la reacción el colesterol sufre una reacción de oxidación gradual. La etapa inicial de la reacción consiste en la protonación del grupo OH del colesterol, donde se da una pérdida de agua obteniendo al ion carbonio 3,5-colestadieno que constituye el primer paso de la reacción de color.

Bibliografía. Argüeso R., Diaz L., Diaz J., Rodríguez A., Castro M., Diz-Lois F. 2011. Lípidos, colesterol y lipoproteínas. Galicia Clin. 72 (Supl.1). S7-S17. Nelson. D. y M. Cox. 2009. Principios de Bioquímica. Ediciones Omega. Barcelona. 1287pp. Mesa Rodríguez, L. Y., & Valderrama Navarrete, D. (2018). Evaluación de la incorporación de la y acción de la yema de huevo en polvo como sustituto parcial de grasa y acción antioxidante en carne de hamburguesa. Ciencia Unisalle. https://ciencia.lasalle.edu.co/cgi/viewcontent.cgi? article=1263&context=ing_alimentos

Anexo

Tabla 1. Datos de absorbancia y micromoles de colesterol, para la construcción de la curva tipo.

Imagen 2. Cálculos realizados para obtener los resultados...