Practica Pipeteo PDF - en esta práctica se desarrolla el uso correcto de la pipeta Pasteur y sus diferentes PDF

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en esta práctica se desarrolla el uso correcto de la pipeta Pasteur y sus diferentes usos...

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL Centro de Estudios Científicos y Tecnológicos No. 16 “Hidalgo” CONTROL DE CALIDAD EN EL LABORATORIO CLÍNICO

Arteaga Flores Rocío Isabel Barrera Mendoza María José Chávez Rodríguez Roberto Carlos Cortez Bocardo Oscar Gael Lara Juárez Diana Ximena Lauro Cortés Mariana Pérez Pérez Maritzel

5LM1

Pipeta

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La pipeta es un material de laboratorio que se utiliza para transferir líquido de un recipiente a otro de forma muy precisa, además de medir alícuotas de líquido con mucha precisión.

Características y formas 

Se trata de un tubo transparente terminado en forma cónica.

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Suele estar hecho de vidrio o de plástico.

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Tiene marcas de graduación.

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Suelen permitir un volumen de hasta 20 ml.

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Están calibradas en unidades que van desde 0.1 a 25 ml.

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Se suele utilizar junto con una propipeta, un instrumento de laboratorio que se utiliza para traspasar líquidos de un recipiente a otro sin tener que succionar con la boca, algo que podría ser peligroso.

Usos La pipeta de laboratorio se usa para medir la alícuota de un líquido con mucha precisión, es decir, la parte que se toma de un volumen de líquido inicial. Se utiliza normalmente para la transferencia de un volumen de líquido de un recipiente a otro con suma exactitud.

Tipos de Pipeta

Pipeta Pasteur Pipetas Pasteur se componen de un tubo de vidrio con un diámetro de unos 5 mm, que acaba en una punta muy fina y lleva una bola de goma en su parte superior. Las pipetas Pasteur no tienen marcas indicando el volumen. Sirven para la transmisión de pequeñas cantidades de líquido. Pipetas Pasteur también están disponibles como pipetas desechables.

Micropipeta El modelo más moderno de la técnica del pipeteo es la micropipeta, su ámbito de aplicación es el pipeteo de cantidades muy pequeñas (pocas µl). Se compone de un sistema de pistonada y punta de pipeta sustituible. Bajando en pistón, se empuja afuera el aire de la punta de pipeta. En el movimiento ascendente a continuación, la columna atmosférica sube, y con ella el líquido. Una variante especial es la pipeta de pistonada de empuje directo. Esta variante utiliza puntas de pipeta con un pistón incorporado, que entra en contacto directo con el líquido. Esta variante permite el pipeteo de líquidos muy viscosos.

Pipeta multicanal En la fabricación masiva, la técnica del pipeteo también es un medio importante. Un ejemplo para ello es la pipeta multicanal, que tiene la misma estructura que la micropipeta. La diferencia respecto a una micropipeta común es que aquí hay varios canales paralelos (habitualmente 8 o 12). Eso permite pipetear grandes cantidades de muestras con mucha más rapidez.

Pipeta graduada o pipeta de simple aforo La pipeta se enrasa una vez en los 0 ml y luego se deja vaciar hasta el volumen que se desee. Se pueden medir distintos volúmenes de líquido.

Pipeta aforada, pipeta volumétrica o pipeta de doble aforo La pipeta posee un único enrase superior, por lo que sólo se puede medir un volumen determinado. En este tipo de pipeta se enrasa en el aforo superior y se deja escurrir el líquido con precaución hasta enrasar en el aforo inferior. Su ventaja respecto a las pipetas graduadas es que son mucho más precisas, ya que no se modifica el volumen si se deforma la punta cónica.

Metodología de uso de la pipeta en general 

Comprobar que no hay espuma ni burbujas en el líquido de la pipeta.

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Limpiar la punta inferior de la pipeta.

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Aspirar el líquido mediante vacío utilizando un bulbo de succión o una propipeta en la punta libre.

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Se hace descender el líquido por encima del aforo superior.

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Rápidamente colocar el dedo índice obturando la punta superior para evitar que el líquido descienda. 

Disminuir lentamente la presión ejercida por el dedo hasta que el líquido comience a descender.

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Volver a presionar cuando el menisco (la curva de la superficie del líquido) llegue a 0. Si desciende demasiado se debe volver a empezar.

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Trasladar la pipeta al nuevo recipiente.

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Disminuir levemente la presión ejercida con el dedo hasta llegar a la cantidad de mililitros deseados.

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En el caso de las pipetas graduadas, se debe sacar el dedo completamente y dejar que el contenido caiga por completo, sin forzar la caída de las últimas gotas.

Tipos de pipeteo 1- Profundidad de inmersión errónea de la punta La correcta profundidad de inmersión de la punta puede mejorar la exactitud en hasta un 5 %. La punta debería estar sumergida 1 o 2 mm en las pipetas de microvolumen y hasta 3 o 6 mm en las pipetas de gran volumen, en función del tamaño de la punta. Si la punta se sumerge demasiado, el volumen de gas de la punta se comprime y provoca que se aspire demasiado líquido. 2- Ángulo de pipeteo incorrecto

El ángulo de inmersión de la punta de la pipeta en la muestra debería ser lo más vertical posible y no debería desviarse más de 20 grados del ángulo vertical. Un ángulo más horizontal provoca que se introduzca demasiado líquido en la punta, lo que conlleva aspiraciones inexactas. Por ejemplo, en un ángulo de 30 grados respecto a la vertical, puede aspirarse hasta un 0,7 % de líquido en exceso. El ángulo de inmersión de la punta de la pipeta en la muestra debe ser lo más vertical posible y no debe desviarse más de 20 grados desde el ángulo vertical. Un ángulo más horizontal provoca que se introduzca demasiado líquido en la punta, lo que conlleva aspiraciones imprecisas. Por ejemplo, a un ángulo de 30 grados respecto al ángulo vertical, puede aspirarse hasta un 0,7 % de líquido en exceso. 3- Dosificación irregular Para lograr una exactitud y una reproducibilidad superior entre muestras, asegúrese de dosificar hasta la última gota de la muestra, sin que quede nada adherido en el extremo de la punta. Para la mayoría de las aplicaciones, se recomienda la dosificación con el extremo de la punta apoyada contra la pared del recipiente, ya que así se reduce o se elimina la cantidad de muestra que queda en la punta. Esta técnica puede aumentar la exactitud en un 1 % o más. 4- Fallo de enjuague previo La dosificación del líquido de una pipeta deja un recubrimiento del líquido en la punta, lo que provoca que el volumen expulsado sea ligeramente inferior de lo que debería ser. Enjuagar previamente una nueva punta un par de veces, como mínimo, con el líquido que se va a usar, servirá para acondicionar el interior de la punta. 5- Ritmo irregular en el pipeteo Use un ritmo constante en el pipeteo entre muestras. Evite ir deprisa o realizar operaciones rápidas, y mantenga el ritmo para cada paso del ciclo de pipeteo..

6- Pre enjuague inadecuado o inexistente: La dosificación del líquido de una pipeta deja un recubrimiento del líquido en la punta, lo que provoca que el volumen expulsado sea ligeramente inferior de lo que debería ser. Pre enjuagar una nueva punta dos veces, como mínimo, con el líquido que se va a utilizar acondicionará su interior.

Pipeteo en… Micropipeta Técnica de pipeteo para líquidos claros:  

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Se presiona el botón superior suavemente hasta el primer tope. Se sumerge la punta, en la solución que se necesita pipetear estando seguros de que la punta este bien colocada y que no haya ningún tipo de residuos entre la punta y el cuerpo de la pipeta. Mantenga la pipeta verticalmente mientras toma la solución. Para descartar la solución de la punta presione el botón hasta el segundo tope. Descarte las puntas utilizando el eyector que traen las pipetas.

Técnica de pipeteo para líquidos con alta viscosidad:   

Presione el botón superior hasta el segundo tope. Sumerja la punta en la solución (2-3 mm) y suelte el botón despacio. La punta tiene que estar bien llena. Descarte el líquido de la punta presionando suavemente el botón superior hasta el primer tope.

Cuidados y Mantenimiento del Equipo      

Iniciar el día limpiando la parte externa de las pipetas de polvo o suciedad. Use solamente ethanol al 70% para la limpieza de la pipeta. Otro tipo de solvente no es aconsejable. Utilizar las puntas adecuadas a las pipetas y a la cantidad de solución que se va a medir. El pistón y el cilindro pueden ser chequeados dos veces al año si la pipeta es usada diariamente. El mantenimiento preventivo de la pipeta tiene que ser realizado por personal especializado de mantenimiento. El pipeteado es la única operación exacta de aspiración y expulsión de líquidos. Las pipetas con cojín de aire se emplean para pipetear líquidos acuosos en el rango de microlitros a mililitros. Funciona según el principio de cojín de aire (air interfaz).

Pipetear con pipetas con cojín de aire Al desplazar hacia arriba y abajo el émbolo en el vástago de la pipeta, se produce un vacío parcial o bien una sobrepresión en el vástago. De esta manera se aspira

el líquido hacia la punta, o bien se expulsa. El líquido queda separado del émbolo mediante un cojín de aire. Ventaja Ninguna humectación del aparato, ya que el líquido sólo entra en la punta siendo ésta desechable. Esto garantiza un trabajo libre de residuos – un factor especialmente importante en campos en los cuales debe realizarse el trabajo de forma estéril o libre de contaminación. Pipeta multicanal    

Al accionarse la tecla de pipeteado se pone en marcha el mecanismo de aspiración o de vertido (incluso de sobreembolada). El émbolo de la pipeta se mueve mediante un motor, y el volumen de aspiración o de vertido se controla mediante un microprocesador. Mediante teclas de mando es posible introducir diversos programas de pipeteado. Aspirar el reactivo: Sumergir las puntas en el reactivo y pulsar una vez la tecla de pipeteado – el volumen ajustado se aspirará.

Desventajas. Desafortunadamente, preparar y transferir las muestras una a una no solo implica mayor riesgo de error, sino que también demanda más tiempo. Al realizar las pruebas que se describen en la nota de aplicación, los investigadores de Analytik Jena encontraron que la instalación de puntas ajustables electrónicamente de la Voyager no solo ahorra hasta un 80% del tiempo al minimizar el número de pasos de manipulación requeridos, sino que también mejora la reproducibilidad y reduce los errores de pipeteo.

Pipeta graduada o pipeta de simple aforo Antes de comenzar a utilizarla asegurarse de limpiar la punta de la pipeta antes de trasladar líquido y de que no haya burbujas ni espuma en el líquido. Para su correcta utilización, la pipeta debe ser tomada por la parte superior, entre el dedo pulgar y el del medio, para aplicar el dedo índice en el extremo superior. Luego se introduce el extremo inferior de la pipeta en el líquido, se quita el dedo índice del otro extremo y se deja que el líquido ascienda por el interior de la pipeta. Una vez que se alcanzó el volumen deseado se tapa con el índice el extremo superior para evitar que siga subiendo y también que se derrame. En ese momento se retira la pipeta con su contenido (siempre manteniendo el extremo tapado). Para volcar el contenido en otro recipiente, se separa levemente el dedo índice, y el líquido sale nuevamente. El movimiento del dedo índice, tapando o destapando, permite controlar el caudal a voluntad. Otra forma de cargar el líquido en la pipeta es mediante un ligero vacío usando bulbo de succión o propipeta, nunca la boca. Se procede a llenar la pipeta sobre la marca de graduación y trasladar el volumen deseado. El borde del menisco debe quedar sobre la marca de graduación. CONCLUSIÓN Es un material requerido para el desarrollo de un inmunoensayo. Su uso apropiado contribuye a la exactitud de los resultados de los análisis de las muestras de pacientes. Por lo mismo es importante para los técnicos, tener un completo entendimiento del instrumento. Específicamente, en esta parte se debe estar consciente de las características de diseño y variaciones, técnicas de uso y la importancia de programar calibraciones y mantenimientos. Gracias a esta práctica pudimos tener un amplio entendimiento de este instrumento así como sus diversas técnicas y el correcto uso de estas.

Referencias PCE. (2000). Técnica del Pipeteo. 23/08/2021, de PCE Sitio web: https://www.pce-iberica.es/instrumentos-de-medida/instrumentoslaboratorios/tecnica-pipeteo.htm

Unknown. (2006). TECNICAS DEL PIPETEO. 23/08/2021, de Pipetting_Tecniques Sitio web: http://laboratoriodequimicaluisareyes.blogspot.com/2016/11/tecnicas-depipeteo.html

Mettler-Toledo International Inc. all rights reserved. (2021, 14 abril). Good Pipetting Practice: técnicas de pipeteo para potenciar el rendimiento. https://www.mt.com/mx/es/home/products/pipettes/pipette/pipettingtechniques.html (2018, 19 mayo). Pipeta. https://materialesdelaboratorio.info/pipeta

Materiales

de

Laboratorio.

DICLAB : ¨El arte del Pipeteo con micropipetas¨ consultado de: https://www.diclab.com.mx/noticias/avisos/item/el-arte-del-pipeteo-conmicropipetas-2 (23/08/2021)

Rodriguez F. ¨Uso de pipetas manuales consultado de: https://www.franrzmn.com/uso-de-pipetas-manuales/ (23/08/2021)

Westgard, J. O. (2013). WESTGARD. Obtenido de https://www.ifcc.org/media/333582/2015%20Pr%C3%A1cticas%20B%C3%A1sicas%20de %20Control%20de%20Calidad.pdf...