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Universidad de SonoraDIVISIÓN DE: Ciencias Biológicas y de la Salud DEPARTAMENTO DE: Ciencias Químicas Biológicas LICENCIATURA EN: Química en AlimentosPRÁCTICA 4Precipitación de ProteínasLABORATORIO DE BIOQUÍMICA IDra. Oliviert Martínez Cruz GRUPO: 10ALUMNO: Gómez Cornejo Perla BeatrizHermosillo, So...

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Universidad de Sonora

DIVISIÓN DE: Ciencias Biológicas y de la Salud DEPARTAMENTO DE: Ciencias Químicas Biológicas LICENCIATURA EN: Química en Alimentos

PRÁCTICA 4 Precipitación de Proteínas

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I Dra. Oliviert Martínez Cruz GRUPO: 10

ALUMNO: Gómez Cornejo Perla Beatriz

Hermosillo, Sonora

10 de marzo de 2021

Objetivo -

Comprender las diferentes etapas que existen en una reacción química, en la cual se da como producto la precipitación.

-

Identificar si hay presencia de proteínas según utilizando los métodos de obtención, utilizados durante el experimento.

Antecedentes Las proteínas son un grupo diverso de macromoléculas. (McKee, 2014).

Son las biomoléculas más diversas que existen. Están compuestas casi exclusivamente por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno que se integran en cadenas lineales de aminoácidos. Por estar formados por la unión de más de 50 AA unidos entre sí, se definen como polímeros. Los aminoácidos que suelen encontrarse en las proteínas tienen la estructura que podrá apreciar en la siguiente imagen.

(Xiguil, 2016).

De todas las moléculas que se encuentran en los seres vivos, las proteínas son las que tienen las funciones más diversas, tienen funciones estructurales, defensivas, de transporte, enzimáticas, tóxicas, de reserva y hormonales.

Estructura de las proteínas Las proteínas son moléculas extraordinariamente complejas. Se distinguen cuatro niveles de estructuración en ellas, las cuales se conocen como: estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. En la estructura primaria, los residuos de aminoácidos están conectados mediante enlaces peptídicos. (McKee, 2014).

(Mera, 2014)

La estructura secundaria de los polipéptidos está estabilizada por enlaces por puente de hidrogeno. Los ejemplos más destacados de este tipo de estructura son las hélices α y las láminas β. (McKee, 2014).

(Navas, 1999)

La estructura terciaria es la conformación tridimensional única que asume una proteína debido a las interacciones que ocurren entre las cadenas laterales de los aminoácidos. Varios tipos de interacciones estabilizan la estructura terciaria: las interacciones hidrófobas y electrostáticas, los enlaces por puente de hidrogeno y determinados enlaces covalentes. (McKee, 2014)

(McKee, 2014) En la estructura cuaternaria se adoptan las proteínas que constan de más de una cadena polipeptídica; cada cadena puede actuar como un monómero, es decir, como una subunidad que se repite varias veces, de manera que la proteína puede considerarse un oligómero o compuesto formado por la unión de varias subunidades. (Menéndez, s. f.)

(Menéndez, s. f.) Después de haber hablado un poco de un poco de teoría de las proteínas en general, de sus tipos de estructuras, sus funciones; a continuación se mencionaran algunos conceptos que se deben de tomar en cuenta para la realización de la parte experimental. Salting Out: Las interacciones proteínaproteína se hacen más fuertes que las interacciones proteína-disolvente y la proteína precipita. (Anónimo, 2010). Precipitación diferencial: Referente al concepto anterior, la precipitación diferencial de proteínas es un paso dentro de su proceso de purificación, el cual se basa en explotar sus características fisicoquímicas para causar la precipitación del polipéptido. (Ryan, 2011). Punto Isoeléctrico: Conocer el valor de pI puede ser utilizado con diferentes propósitos: precipitación isoeléctrica, selección de columna de intercambio iónico, pH de trabajo. Se define como el pH en el cual una molécula tiene una carga neta cero. (Anónimo, 2010). Formación de sales: Las proteínas precipitan por la acción de ciertos ácidos como el ácido tricloroacético, ácido túngstico, ácido molíbdico, entre otros; también las proteínas pueden precipitar por la acción de ciertos iones metálicos pesados como Hg, Zn, Cd, Cu y Pb. Todos estos agentes hacen precipitar las proteínas porque forman con ellas sales insolubles. (Borboa, et al, 2016). Solventes orgánicos: Los solventes orgánicos hidrosolubles, como el etanol, interfieren con las interacciones hidrófobas, debido a que interactúan con los grupos R apolares y forman enlaces por puente de hidrogeno con el agua y con los grupos polares de las proteínas. Algunos solventes apolares también interrumpen las interacciones hidrófobas. (McKee, 2014).

Procedimiento

Fundamentos Teóricos Precipitación por Salación (Salting Out) Se basa en los cambios en la solubilidad provocados por la fuerza iónica. En un ambiente acuoso con una alta fuerza iónica, las moléculas de agua rodean las cargas de los iones y las proteínas. Cuando se aumenta la fuerza iónica, las moléculas de agua son incapaces de mantener las cargas de los iones y las proteínas y como resultado final será que el soluto con menor solubilidad se precipitará. (Palei, 2010). Reacción de Biuret Se fundamenta en detectar los enlaces peptídicos. La prueba se da en medio alcalino. La muestra debe contener al menos dos enlaces peptídicos para que se pueda formar un complejo de color violeta-púrpura. El complejo se forma por la unión de los enlaces y el ion de cobre. (Gil, 2019). Precipitación por Solventes Orgánicos Los solventes orgánicos, como la acetona, el etanol, entre otros; contienen una baja constante dieléctrica, al reaccionar con una proteína en solución acuosa

reduce sus constante dieléctrica, lo cual disminuye la solubilidad de la proteína y por eso se formará una precipitación de la solución. (Rodríguez, 1987). Precipitación por Formaciones de Sales La precipitación que se presenta en esta prueba se debe a que las proteínas con un pH de 7 o mayor, se encuentran cargados negativamente, mientras que los metales pesados están cargados positivamente. Al reaccionar la proteína y los iones de los metales pesados, la carga de la proteína se neutraliza y se formará la precipitación en la solución. (Rodríguez, 1987).

Resultados Reacción de Biuret

Tubo No.

Contenido

Reacción positiva o negativa (cambio de color)

1

Agua Destilada

(-) Azul

2

Ovoalbúmina

(+) Violeta

3

Ovoglobulina

(+) Violeta

(Malagoni, 2019)

Precipitación por Solventes Orgánicos Tubo No.

Contenido

Solvente

Reacción positiva o negativa (Turbidez)

1

Albúmina de huevo

Etanol 95%

(+)

2

Albúmina de huevo

Etanol 95%

(+)

3

Albúmina de huevo

Etanol 95%

(+)

4

Agua Destilada

Etanol 95%

(-)

(Malagoni, 2019)

Precipitación por Formaciones de Sales Tubo No. 1 2 3 4 5

Contenido Albúmina de huevo Agua destilada Albúmina de huevo Agua destilada Albúmina de huevo

6 Agua destilada (Malagoni, 2019)

Reactivo

Reacción positiva o negativa (Precipitado)

HgCl2

(+)

HgCl2

(-)

AgNO3

(+)

AgNO3

(-)

C2HCl3O2

(+)

C2HCl3O2

(-)

Discusiones Reacción de Biuret En la tabla de datos correspondiente con el método de Biuret, fue muy sencillo el poder identificarlos, ya que solo el reactivo de Biuret reaccionará con las proteínas dando un vire de color violeta casi lila, lo cual sucedió con los tubos de ensayo 2 y 3, lo que significa que la proteína encontrada seria la ovoalbúmina y la globulina, ya que provienen del huevo; el cual es una fuente de proteína. Y en el tubo de ensayo 1 dio como resultado de las reacción un vire de color azul, lo que significa que dio un resultado negativo. El reactivo de Biuret reaccionara dando color violeta a aquellas proteínas que tengan enlaces peptídicos y el simple resultado es que el agua destilada, en su estructura no lleva enlaces peptídicos. (Gil, 2019) Precipitación por solventes orgánicos Los tubos 1, 2 y 3 son los que obtuvieron resultado positivo, porque el etanol disminuyo la solubilidad de la proteína solamente cuando la proteína se encuentra en solución acuosa, lo cual fue así; porque se utilizó solución de albúmina de huevo para utilizar etanol y diera como producto la precipitación. Con el tubo 4 que tiene el agua destilada dio resultado negativo porque no es una proteína la cual va a reaccionar con el etanol. (Rodríguez, 1987)

Precipitación por formación de sales Según la tabla de datos de dicha precipitación, se realiza el precipitado cuando la proteína reacciona con los iones metálicos pesados, los cuales serían lo que ocasiona que la carga de los iones se neutraliza y forma el precipitado. También por lógica, el agua destilada no es una proteína, lo que significa que no obtendremos resultado positivo de los tubos que contengan agua destilada. Solo habrá reacción con los tubos que tengan albúmina de huevo, que vendría siendo la clara de huevo que se separó de la yema, al principio del procedimiento. (Rodríguez, 1987)

Conclusiones La práctica cumplió con sus objetivos, los cuales eran poder comprender él porque nos dieron esos resultados, porque algunas reacciones sí pudieron dar como producto una precipitación, turbidez y el cambio de color al momento de que las proteínas tengan contacto con el reactivo correspondiente para que reacciones según su característica. Y también hubo cumplimiento con otro objetivo, el cual era poder identificar a las proteínas según en el método que estuvieran sometidas, lo cual funcionó, porque las proteínas reaccionan dando una coloración violeta cuando entran en contacto con el reactivo de Biuret, ya que estas contienen enlaces peptídicos y es ahí donde ataca el Cu a los nitrógenos de los enlaces. Bibliografía Anónimo. (2010, Enero). ESTRUCTURA Y PROPIEDADES DE PROTEÍNAS. Wordpress.

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