Relatório - Determinação de Creatinina por Fotocolorimetria PDF

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Relatório de experimento científico realizado em sala de aula na disciplina de Biofísica Instrumental....

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Determinação de Creatinina por Fotocolorimetria

Ana Júlia Poletto¹ Eneli Gomes de Lima*¹ Henrique Borges da Silva¹

¹Departamento de Ciências Fisiológicas Universidade Federal de Santa Catarina, Florianópolis – SC, Brasil [email protected]* Data: 13/11/2018 Resumo A creatinina encontra-se junto aos tecidos do corpo constituindo uma reserva energética para organismo, tendo em vista seu alto nível energético. A determinação de creatinina foi analisada pelo método de Jaffe, no qual a intensidade da cor avermelhada é proporcional a quantidade do ácido presente na urina que, em indivíduos normais, deve ser taxas constantes. Palavras-chave: Creatinina 1. Fotocolorimetria 2. Introdução A creatinina (ácido metilguanidinacético), substância inofensiva presente no sangue e eliminada constantemente pelo organismo, é produzida principalmente nos rins pela quebra de creatinina fosfato (proteína muscular). Além de ser utilizada como biomarcador de doença renal crônica. Ao sofrer desidratação, a creatinina fosfato perde espontaneamente o fosfato, formando a creatinina, podendo assim ser produzida pelo organismo ou ser encontrada em alimentos como carnes e peixes, riscos em proteínas. A creatinina fosfato proporciona às fibras musculares, uma rápida fonte de energia. A determinação de creatinina pode ser realizada através de exames bioquímicos na urina ou no sangue. A concentração desse ácido no organismo varia

nos homens e nas mulheres, da mesma forma em diferentes faixas etárias, por conta da diferença de massa muscular e da taxa de excreção. Se os rins não funcionarem da maneira como deveriam, a filtragem da creatinina fica comprometida. Algumas doenças ou condições físicas podem diminuir a capacidade dos rins de limpar a creatinina e também outros resíduos do sangue, levando ao aumento desse ácido no sangue e sua diminuição na urina. O método utilizado nesse experimento para a medição de creatinina na urina é chamado de Método de Jaffe ou Picrato alcalino. Consiste em tratar uma solução que contem creatinina com uma solução de picrato alcalino (nesse caso, ácido pícrico + NaOH). Através da reação entre a creatinina e o picrato alcalino, observa-se a coloração avermelhada da solução proporcional ao nível de creatinina na amostra. Em seguida o produto é levado ao fotocolorimetro para um teste de nível de absorbância. A cor da solução irá determinar qual o comprimento de onda necessário para que ela seja lida. Existem alguns fatores que podem alterar a absorbância, como a cor da solução, transparência, ligações químicas presentes e ainda o tamanho das partículas. A absorbância de soluções no fotocolorimetro é medida de 0 a 1, e relaciona-se com a concentração do composto que dá a cor à solução. Objetivos Dentro dos limites considerados padrão no corpo humano, analisar as concentrações de creatinina na urina de um paciente desconhecido e determinar se o mesmo encontra-se saudável ou não. Materiais e Métodos Os materiais usados no experimento foram: tubos de ensaio e sua estante usados no armazenamento das soluções e seu preparo, um copo béquer para o preparo da solução de picrato alcalino, um fotocolorímetro utilizado na medição de absorbância, pipetas graduadas para a realização de preparação e pipetagem das substâncias usadas da preparação das soluções, e usadas em conjunto com as pipetas, as peras de sucção foram necessárias para esse experimento. Por fim papeis de limpeza para limpar a bancada e também tubos de ensaio antes de serem colocados no fotocolorímetro, para tirar qualquer sujeira que possa atrapalhar a medida de absorbância. O método para esse experimento foi o de “De Jaffe” ou “Picrato Alcalino”, o qual consiste em misturar uma solução a qual contém creatinina, com uma solução

saturada de ácido pícrico em meio básico, tendo-se assim uma coloração avermelhada, de picrato tautômero de creatinina. A intensidade dessa coloração permite dizer a quantidade de creatinina presente na solução (quanto mais intensa a cor mais intensa a concentração e vice-versa). Inicialmente, três tubos de ensaio foram marcados com as letras B, P e D (branco, padrão e desconhecido) para diferenciá-los. Em seguida, foram adicionadas quantidades pré-determinadas das soluções para cada tubo (solução padrão de creatinina, urina [diluída em escala 1/100] e água destilada), com o auxílio de pipetas graduadas. A solução de ácido picrato foi feita por último, para ser inserida nos tubos de ensaio apenas após a adição de todas as outras substâncias componentes das soluções. O preparo foi realizado com 2ml de NaOH a 10% e 10ml de ácido pícrico. Na tabela abaixo pode-se visualizar a quantidade de cada solução usada em cada um dos tubos. B

P

D

Solução de pricrato alcalino (ml)

2,5

2,5

2,5

Solução padrão de creatinina (0,03 mg/ml)

X

5,0

X

Urina (diluída 1:100) (0,01ml)

X

X

5,0

Água destilada

5,0

X

X

Tabela 1 – Procedimento da Técnica.

Em seguida, deve-se agitar as soluções e coloca-las em um ambiente escuro por 10 minutos. Após esse tempo, agitar novamente as soluções e fazer a leitura de absorbância, sendo as etapas seguintes: calibrar o espectrofotômetro (colocar antes do tubo o ponteiro de medição no 0), escolher o filtro (que no caso foi o de 520nm) e colocar o tubo de ensaio para medir a absorbância. Resultados Após adição de solução de picrato alcalino e passados os 10 minutos de espera no ambiente escuro (armário de vidrarias), observou-se mudança na coloração das soluções presentes nos tubos branco, padrão e desconhecido, conforme imagem 1. As soluções apresentaram cores alaranjadas, puxando para um tom avermelhado em um dos casos.

Imagem 1 – Tubos de solução pós procedimento.

Para a leitura do espectrofotômetro foi usado o filtro de 520nm e os resultados obtidos podem ser vistos na tabela abaixo (tabela 2). Para a determinação da quantidade de creatinina excretada em 24h, os cálculos foram feitos em seguida, considerando os dados disponibilizados pela professora. Tubo B

0,00

P

0,37

D

0,72

Tabela 2 – Resultados.

Discussão Analisando os diversos dados coletados, sendo esses: a coloração das soluções preparadas, que é utilizada na medição da concentração de creatinina (em 0,05 ml de urina) a qual é realizada através do Fotocolorímetro. O volume e a concentração de creatinina em 24h, a taxa normal do indivíduo e seu peso ideal; podese observar que o Indivíduo 1 (87,4 kg de massa, 1,71 m de altura e volume urinário em 24h de 1210 ml) tem uma alta concentração de creatinina em seu corpo, o que pode significar que o indivíduo pode ter hipertireoidismo, polimiosite, dermatomiosite, paralisias, distrofias e uso de certos medicamentos como salicilatos e metildopa. Através da medida feita pelo Fotocolorímetro obtivemos três valores para as três diferentes soluções (B, P e D) sendo que para a “B” a medição foi 0,00 OD o que é muito coerente pois a solução “B” é água destilada e não urina, assim não contendo creatinina. Para a solução “P” o valor foi de 0,37 OD, agora contendo sim um valor

pois nessa solução contém solução padrão de creatinina (0,03 mg/ml). E por fim para a solução “D” o valor obtido foi de 0,72 OD, nessa solução foi adicionado urina diluída (1:100) (0,01 ml), esse valor de absorbância é muito alto, assim demonstrando uma concentração bem elevada de creatinina. Muito importante de ser dito é que a medida da [creatinina] é dada em função do peso real do indivíduo, isso é no caso do indivíduo estudado, 87,4 kg. Após a leitura dos dados de concentração de creatinina, e com a hipótese de que o indivíduo estudado estava fora dos parâmetros, foi feito o cálculo para encontrar o valor da [creatinina] em 24h, que foi feito relacionando o volume diário de urina do indivíduo estudado, com a concentração de creatinina em 0,05 ml de urina, e esse valor obtido foi de 7.018 mg em 24h. Além disso, foi encontrado o valor da taxa normal de creatinina, esse valor é para estar entre 15 e 25 mg/Kg e a taxa calculada para o indivíduo estudado foi de 100,90 mg/kg (obtido através do cálculo através da quantidade de creatinina em 24h dividido pelo peso real do indivíduo) assim da de se ver que sim, o indivíduo está bem fora dos parâmetros sendo que as taxas dele estão todas acima da normalidade. Por mais que não dê para saber de certeza se esse indivíduo tem algum problema de saúde a probabilidade de existir um é muito alta após a análise desses resultados. Conclusão A partir da análise e discussão dos resultados, o método de Jaffe mostrou-se confiável e preciso. Entretanto, os valores encontrados indicam possíveis alterações no organismo do paciente e somente o exame de urina não é o suficiente para apontar o problema com precisão. Referências SERPEJANTE, Carolina; Creatinina: exame de sangue avalia funções dos rins. Disponível em:

. Acesso em: 08 de Junho de 2018. UFRGS.

Indicadores

bioquímicos

da

função

renal,

2013.

Disponível

em:...