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Monsieur Echeverria...

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Traduction 1. Il y a plusieurs modes de régulation de la traduction. a) Citez des exemples correspondant à ces différents modes de régulation, en précisant le mécanisme de régulation impliqué dans chacun des cas. La régulation traductionnelle implique 2 modes majeurs : - Inhiber la traduction globale des protéines, elle a lieu dans certaines conditions physiologiques comme la quantité de nutriments. Avec le mécanisme de protéine qui se lie au facteur 4E qui alors il n’y a plus de formation du complexe d’initiation de la traduction ce qui bloque la synthèse de toutes les protéines. En absence de nutriment, les kinases TOR sont inhibés alors la synthèse des protéines est inhibée. Mais pour relancer la synthèse de protéine alors TOR phosphoryle des protéines 4eBP. Régulation globale de la traduction par phosphorylation de eiF2, la phosphorylation du GDP en GTP permet de relancer la traduction. - Inhibition de la traduction spécifique par inhibition la traduction des arn maternel, la ferritine, les miRNA permettent la régulation spécifique. Des mécanismes peuvent se chevaucher comme notamment la régulation de la traduction de la ferritine et la synthèse d’un récepteur, le fer est importé dans la cellule par un récepteur donc en absence de fer il faut activer la synthèse de ce récepteur pour en récupérer un maximum. La régulation des arn maternel qui localisent dans des pôles bien définis et déterminent un gradient de protéines (nanos et oskar), b) Comment met-on en évidence un effet de régulation sur la traduction dans chacun de ces cas ? gène ----------- pré ARN ------------ARN m --------- Protéines inactives ---- protéines active transcription maturation traduction post traductionnel On compare la présence d’un arn messager et la présence d’une protéine. On compare transcriptome et protéome afin d’établir les niveaux de régulations. 3- Vous travaillez sur l’effet d’un stress thermique (froid) les cellules HeLa (humaines) . a) D’abord vous cherchez à identifier les gènes qui sont induits par ce stress. Comment feriez-vous ? Analyse du transcriptome par RNA-seq mais pour voir les effets sur la régulation traductionnelle par comparaison de gel bidimensionnel ou alors analyse du protéome (par spectrométrie de masse pour identifier rapidement les protéines mais il faut avoir le génome). Extraction des protéines et identifications des protéines par spectrométrie de masse.

b) Ensuite, pour comprendre le mécanisme de régulation induit par ce stress vous vous focalisé sur l’expression d’un des gènes induit par le froid, le gène NOP. Vous comparez alors son expression évalué par northern blot en comparant les cellules contrôles aux cellules traitées par le froid. En parallèle vous regardez aussi son expression évalué par Western blot (voir figure ci-dessous) Que pouvez-vous en déduire ? Dans ces cellules humaines il y a toujours la même quantité d’arn messager dans les deux conditions à 37°C et 0°C.Donc l’expression du gène ne dépend pas de la température. On observe à 0°C lorsque le temps d’incubation augmente le nombre de protéine augmente alors qu’à 37°C il n’y a pas de protéine donc le froid induit la traduction de la protéine. A 37°C il y a une inhibition de la traduction et cette inhibition est levée lorsqu’il y a de faible température. Le froid stimule la traduction....