Övningstentor, frågor och svar PDF

Preview

Summary

Förklara följande begrepp a) Cellinje Cellodling av olika sorters celler finns som går att köpa till exempel Hela-celler som är en linje odlad från tumörceller i en uteruscancer. En sådan cellinje har automatiskt obegränsad delningsförmåga då den kommer från en tumör. b) Konfluens Hur mycket en cell...

Description

1. Förklara följande begrepp a) Cellinje Cellodling av olika sorters celler finns som går att köpa till exempel Hela-celler som är en linje odlad från tumörceller i en uteruscancer. En sådan cellinje har automatiskt obegränsad delningsförmåga då den kommer från en tumör. b) Konfluens Hur mycket en cell har tillväxt i en ett cellodlingsmedium. I cellodlingssammanhang ett måste på tillväxt. Talar om hur mycket cellerna har tillväxt i ett cellodlingsmedium. 80% av konfluenta celler har tex tillväxt över 80% av tillväxtytan som finns tillgänglig. c) Passage av celler Att flytta celler till ett nytt cellodlingsmedium för att kunna fortsätta odla dem. Passage krävs när cellerna har blivit hög grad konfluenta och fått slut på tillväxtyta samt när de får slut på näring i odlingsmediet. d) Adherenta celler Celler som sitter bundna till varandra i en vävnad (motsatsen är solitära celler som är fria i förhållande till varandra). e) Primär cellkultur Den första cell - odlingen med celler tagna från en vävnad. De liknar ursprungscellerna. Nackdelen är att de har en begränsad delningsförmåga. 2. Då man ska splitta celler måste man lossa dem. Trypsin och EDTA är en kombination av ämnen som är vanliga att använda i dessa sammanhang. Förklara och hur de verkar? Trypsin är ett proteolytiskt enzym som bryter protein - bindningar mellan adherenta celler, så att de blir solitära. EDTA är ett ämne som binder kalciumjoner. Då kalciumjoner också påverkar proteinbindningar mellan celler och deras vidhäftningsförmåga. Så bidrar även EDTA till att solitära celler erhålls. Tillsammans med varandra så er trypsin och EDTA bäst effekt. 3. Vid beräkning av antal celler används vanligen Bürkerkammare och ofta tillsätts trypanblått till cellsuspensionen. Vad är syftet med att tillsätta trypanblått. Hur verkar det på cellerna och vilka celler kan man räkna efter tillsättning av trypanblått? Syftet med att tillsätta trypanblått är att vid cellräkningen kunna skilja levande celler från döda celler. Trypanblått är ett färgämne som enbart går in i döda celler på grund av dess trasiga membran. De blåfärgade, döda cellerna kan då skiljas från de ofärgade levande cellerna. 1. Eukaryota celler behöver odlas i miljö som efterliknar den ursprungliga. Vad behöver cellerna i odlingsinkubatorn förutom cellodlingsmediet för att kunna leva? Cellerna behöver en steril miljö, rätt temperatur dvs 37 grader, gott om syre, en koldioxid halt på ca 5 - 7,5% för att det är denna koldioxidhaltcellerna ……… Gott om näring till celltillväxten och celldelningen

2. Vad står T25 och T75 för T25 och T75 är odlingskärl (odlingsflaskor) T25 betyder att det är 25 cm2 och T75 betyder att det är 75 cm2 (cellernas tillväxtyta). 3. Till cellodlingsmedium tillsätts fetalt kalvserum (FCS). Vad bidrar FCS med till cellodlingsmediet? tillväxtfaktorer. 4. Vad betyder det att celler har 90% konfluens? Konfluens är en matta av celler som bildas i odlingskärlen. Ju mer celler har tillväxt och delat sig desto högre konfluens. 90% konfluens betyder att cellerna har tillväxt och delat sig mycket i odlings kärlet de finns i. bara 10% tillgänglig tillväxtyta kvar för cellernas, sen är det dags att splitta cellerna till en ny passage. 5. Du har en flaska CHO- celler där cellodlingsmediet har blivit gult. Varför är det gult och kan du använda det i ditt cellodlingsarbete? När det är gult betyder det att det är en låg pH i odlingsmediet. 6. Hur bevaras eukaryota celler under lång tid? 7. När levande celler ska räknas i mikroskop så tillsätts trypanblått. Varför? 8. Vad är en Bürkerkammare? 1. Då du arbetar med celler används uttrycket konfluens förklara vad det innebär, ge även ett praktiskt exempel? Det betyder att celler har täckt av tillväxt yta och bildas en tätt matta av celler då cellerna har tillväxt och bildas en matta tillväxt av de ytan och kan det vara 60% konfluens eller 90%. Celler har profiterat och sätter tätt i tillväxt yta då det är dags att splitta cellerna i en annan tillväxtyta. Ex. 90% har konfluens då växer tätas i 90% av tillväxt ytan. Det som är kvar är 10% av tillväxt yta. 60% har tät matta och som tillväxt av till tillväxtyta och det som är kvar är 40% av tillväxtyta. 2. Vad innebär begreppet primär cellkultur, beskriv även två kännetecken för en primär cellkultur? Det är cellerna som har blivit isolerat direkt från vävnaden genom trypsin, EDTA eller genom att skära ut cellen. Cellen har en begränsad celldelning och har mindre delning och mindre antal passage. Primära kulturceller liknar sin ursprungliga cell, växer långsam. 3. Då man odlar in vitro kan man använda sig av trypsin, förklara när och varför man använder trypsin? Är ett ämne (protein proteas) som används för att bryta ner bindningen som finns mellan proteiner (peptidprotein). Den används när man vill isolera celler eller lossna celler från varandra, men man måste, och för att undvika att cellen ska gå sönder så utsätter man celler för detta ämne i några minuter (4 minuter). 4. Förklara följande begrepp a) Cellinje

Cellodling av olika sorters celler finns som går att köpa till exempel Hela-celler som är en linje odlad från tumörceller i en uteruscancer. En sådan cellinje har automatiskt obegränsad delningsförmåga då den kommer från en tumör. b) Trypanblått Syftet med att tillsätta trypanblått är att vid cellräkningen kunna skilja levande celler från döda celler när man odlar och studerar celltillväxt. Trypanblått är ett färgämne som enbart går in i döda celler på grund av dess trasiga membran. De blåfärgade, döda cellerna kan då skiljas från de ofärgade levande cellerna. c) Bürkerkammare En platt kammare med ett speciellt mått som innehåller en fast volym. Man droppar en droppe av trypanblått som har en blå färg och med hjälp av mikroskop kan man räkna ut de antal cellerna. Den innehåller 9 A rutor och varje kant har trippellinje. Och när man räknar då räknar man från två sidor bara och när man går vidare till andra utan räknar man också från samma sida. 1. Förklara följande begrepp a. Inverterat mikroskop Den objektiv revolver med de olika objektiven sitter under sitt preparatbord, så okularen man har och titta på är kopplade till under preparat bordet. Man ställer sin cellkultur som man har odlat i cellodlingsplattorna och eftersom mikroskopet inte står i LAF bänk, vilket innebär att vi inte kan öppna burken, för om vi öppnar locken så kan dam och andra patogena partiklar kommer ner bland cellen och infektera den. Därför kan vi inte göra det, alltså öppna locken. Därför har vi objektiven under så att vi kan komma så nära cellernas undre delen som möjligt så att man kan titta på hur cellerna ser ut. b. Solitära celler Celler som inte är bundna till varandra eller mot en yta. Dvs fria celler exempelvis röda blodkroppar i blodet. c. Trypsin Är prolytisk enzym som bryter peptidbindningar mellan proteiner och därmed blir de solitära. d. Konfluens av celler Ett procentuellt mått på hur tät förpackat och hur stor yta som cellerna täcker. e. Cellinje Celler som behandlats och blivit till imortiliserade celler. 2. Vid odling av celler utanför kroppen kan man behöva tillsätta antibiotika och eller anti-svampmedel till cellodlingsmediumet, varför kan man behöva göra det? För att bakterie och svampinfektioner inte ska växa i odlingsmediumet. Då det växer orsaker att man måste kassera cellerna.

3. Vid odling av celler har du vanligen en pH-indikator i cellodlingsmediet. pHindikatorn färgar vanligen cellodlinsmediet rött. Varför tillsätts en pH-indikator? Om du odlar celler och mediet börjar få en gulare färg, vad kan det bero på? Och vad gör du då? pH-indikator färgar mediet rött vid fysikalisk pH. Man tillsätter det för att färgskiftningen indikerar ”läget” i mediet. Om mediet blir grumlig och gul kan det bero på en bakterieinfektion. Men om mediet blir gul kan det beror på cellandning. När celler tillväxer ökar cellandningen och H+ joner påverkar pH-indikator vilket leder till att mediet gulnar. Vid detta fallet ska cellerna splittas till ett nytt medium, en my passage. Detta görs genom att först så lossas cellerna med EDTA och eller trypsin, sedan överförs en del av cellkulturen till en passage. 1. Förklara följande begrepp: a. Bürkerkammare Ett hjälpmedel för att kunna räkna ut hur många celler en cellodling innehåller. Den är uppdelad i rutnät och används sedan i ett mikroskop efter att man lagt på en blandning med cellerna i. b. Trypanblått Används för att färga in döda celler då färgämnet går igenom den döda cellens cellmembran. När man sedan räknar cellerna mha bürkerkammare kan man räkna antal levande och döda och sedan räkna ut hur många som lever och dött i cellodlingen. c. Cellodlingsmedium Är den vätska som man odlar cellerna i. den innehåller näring för celler såsom mineraler, glukos, salt, vitaminer, etc.… d. Konfluens Är ett mått i procent man använder för att de hur stor tillväxtyta cellerna tillväxt på i cellodlingsflaskan/kärlet. Ex. 60% konfluenta celler har tillväxt på 60% av ytan i kärlet och 40% finns kvar att tillväxa på. 2. Då man ska splitta celler man lossa de och då är det vanligt att man använder en blandning av trypsin/EDTA. Förklara vad detta är för ämnen och hur dessa två ämnen kan lossa celler. Trypsin är ett proteas som bryter peptidbindningarna mellan cellerna så att de ej sitter ihop länge. EDTA är kalcium kelator som binder med Ca2+ (calciumjoner) som behövs i vissa bindningar mellan celler och yta. För att stabilisera peptidbindningen. Detta görs för att de inte ska sitta ihop med varandra eller ytan i kärlet. 3. Då man vill studera levande celler används vanligen ett speciellt mikroskop, vilket? Varför använder man detta mikroskop? Man använder ett invert mikroskop. Detta för att dess objekt ligger under objektbordet och på så vis kan man undersöka cellerna på nära håll medan de fortfarande ligger i odlingskärlet.

1. Förklara följande begrepp a. Cellodlingsmedium Den vätskacellerna odlas i, innehåller näring (mineraler, vitaminer, salter, glukos, ofta buffrad till fysikaliskt pH). b. 60% konfluenta celler Cellerna täcker 60% av tillväxtytan.

c. Trypanblått Används för att färga in döda celler då färgämnet går igenom den döda cellens cellmembran. När man sedan räknar cellerna mha bürkerkammare kan man räkna antal levande och döda och sedan räkna ut hur många som lever och dött i cellodlingen. d. Bürkerkammare Ett hjälpmedel för att kunna räkna ut hur många celler en cellodling innehåller. Den är uppdelad i rutnät och används sedan i ett mikroskop efter att man lagt på en blandning med cellerna i. e. Splitta celler Man för över en del av sina odlade celler till en ny flaska med odlingsmedium. Adherenta celler lossas först med trypsin och EDTA. 2. Trypsin och EDTA är en kombination av ämnen som är vanliga att använda vid cellodling, förklara när dessa används och vad det är för ämnen samt varför och hur de verkar. 3. Det är vanligt att man köper celler för forskning och i utbildningssyfte. Dessa celler odlar man upp och sedan måste man bevara dessa över längre tid för att kunna ... användas vid behov. Hur kan man bevara en cellkultur över längre tid och vad viktigt att tänka på när man ska börja bevara dessa? Då cellerna ska börja användas efter bevaring, vad bör du tänka på då? (3p) cellerna frysas in långsamt, minskar 1 grad per minut, detta – 80 grader, vis ännu längre förvaring frysas de ner till -190 grader i flytande kväve. Vid infrysning av cellen tillsätts ca 10 - 15% DMSO, en frysprotektant. Vid upptining av cellerna görs detta snabbt till 37 grader oftast genom att hålls det rör de fryst in i, i handen. De bör få vara i 24h efter upptining tills de börjar användas för att ”återhämta sig” och anpassa sig till miljön....