0002 Práctica 2 FB 2020-21 PDF

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Guion de la 2º practica de fundamentos de biología...

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!!!!!!PRÁCTICA!2!! !

! EL!USO!DEL!MICROSCOPIO.!ESTUDIO! DE!SUS!PARTES!Y!APLICACIONES! PRÁCTICAS.!CONCEPTOS!BÁSICOS! DEL!USO!DE!LA!FOTOGRAFÍA! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! FUNDAMENTOS!DE!BIOLOGÍA! CURSO!2020/21!

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OBJETIVOS) ! 1.-!Conocer!y!saber!usar!cada!una!de!las!partes!de!un!microscopio.! 2.-!Llegar!a!conseguir!un!buen!enfoque!con!cada!uno!de!los!aumentos.! 3.-!Conocer!algunas!técnicas!para!el!manejo!de!muestras!para!microscopía.! 4.-!Realizar!algunas!fotografías!de!forma!sencilla.! !

MATERIAL) ! Microscopio!óptico! Portaobjetos!y!cubreobjetos! Trozos!de!papel!impresos! Muestra!de!microalgas! !

Pipetas!Pasteur! Tetinas! Móvil!o!cámara!de!fotos! !

DESARROLLO) !

Partes)del)microscopio)óptico) ! 1.-!Sistema!mecánico! ! • Soporte! Es!el!armazón!que!sostiene!al!resto!de!componentes.!Posee!un!peso! considerable!para!mantener!el!centro!de!gravedad!bajo,!lo!que!evita!que! se!mueva!con!facilidad!y!se!pueda!desplazar!equilibradamente.!Consta! de:! § Pie!o!base! § Brazo,!por!donde!se!debe!agarrar!para!moverlo! ! ! ! Oculares! ! ! Cabezal! ! Revólver! ! ! Brazo! ! Objetivos! ! ! Platina! Macrométrico! ! ! Micrométrico! Diafragma! ! Condensador! ! Tuerca! Foco! Pie!o!base! ! ! ! ! !

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Mecanismo!de!enfoque! Con!el!conseguimos!un!enfoque!adecuado!de!nuestra!muestra! § Tornillo!de!enfoque:!Al!hacerlo!girar,!movemos!la!platina! donde!se!encuentra!la!muestra.!El!macrométrico!produce!un! movimiento!tosco!para!lograr!un!enfoque!aproximado.!El! micrométrico!posee!un!movimiento!fino!del!orden!de!0,001! mm!para!llegar!a!un!enfoque!correcto.! Platina! Soporte!horizontal!donde!se!colocan!las!preparaciones!(muestras).! Tiene!un!orificio!circular!por!donde!pasa!la!luz!proveniente!del! condensador.!Suele!tener!un!sistema!de!sujeción!del!portaobjetos.!Se! mueve!en!la!horizontal!mediante!una!tuerca.! Revólver! Permite!el!intercambio!rápido!de!objetivos!mediante!un!movimiento!de! rotación.!Suele!tener!forma!de!semiesfera!con!huecos!donde!van! atornillados!los!objetivos.!En!algunos!microscopios!su!rotación!está! mecanizada.! Cabezal! Contiene!las!lentes!oculares.!Éstas!se!alojan!en!uno!o!dos!tubos!huecos!y! oscuros!dependiendo!de!si!el!microscopio!es!monocular!o!binocular.!En! ocasiones,!existen!microscopios!con!brazos!extensores!y!sus! correspondientes!lentes!para!que!otros!usuarios!puedan!observar!la! muestra.!

! 2.-!Sistema!óptico! ! • Objetivos! Colectan!la!luz!que!incide!sobre!la!muestra!y!proyectan!una!imagen! nítida,!real,!invertida!y!aumentada.!Dos!tipos:! § Objetivos!secos,!el!medio!interpuesto!es!el!aire!que!tiene!un! índice!de!refracción!(n=1)!diferente!al!del!vidrio!(n=1,5).!Los! aumentos!suelen!ser!4X,!10X,!40X!y!60X.! § Objetivos!de!inmersión,!el!medio!interpuesto!es!agua! destilada!(n=1,33)!o!aceite!de!cedro!(n=1,515)!similar!al!del! vidrio.!Se!utilizan!en!aumentos!de!100X.!! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! !

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Oculares! Lentes!convergentes!normalmente!separadas!por!un!diafragma.!Se! encuentran!en!el!cabezal,!aumentan!la!imagen!y!aplanan!y!aclaran!el! campo!óptico.! Condensador! Una!o!varias!lentes!situadas!debajo!de!la!platina,!colocadas!entre!la! fuente!de!luz!y!la!muestra.!Produce!un!aumento!de!la!sección!del!cono! luminoso!formando!una!imagen!más!clara.!

! 2.-!Sistema!de!iluminación! ! • Interruptor! Enciende!la!fuente!de!luz.! • Fuente!de!luz! Luz!solar:!en!microscopios!con!espejos.! Bombillos!de!tungsteno!o!lámparas!halógenas.!Entre!10W!y!100W.! Lámparas!de!arco!eléctrico:!contienen!gases!(mercurio,!xenón,!…)! Láser:!el!de!argón!es!el!más!utilizado! LED:!luz!brillante!y!fría! • Foco! Dirige!los!rayos!de!luz!hacia!el!condensador! • Diafragma! Colocado!debajo!de!la!platina.!Permite!cambios!en!la!apertura!para! conseguir!conos!luminosos!más!estrechos!y!eliminar!la!luz!sobrante.! • Filtros! Cristales!de!diferentes!colores!y!materiales!para!eliminar!el!exceso!de! algún!tipo!o!longitud!de!onda!determinados.! !

Cómo)debemos)proceder)para)la)observación)con)un)microscopio) óptico) ! 1.-!Bajar!la!platina!completamente!sin!forzar!al!llegar!a!la!posición!más!alejada!de! los!objetivos.! 2.-!Colocar!el!objetivo!de!menor!aumento!(normalmente!4X)! 3.-!Colocar!la!muestra!(preparación)!sobre!la!platina!usando!el!sistema!de!sujeción! si!existe.! 4.-!Encender!el!foco!de!luz!del!microscopio! 5.-!Centrar!la!muestra!con!el!foco!de!luz!usando!la!tuerca! 6.-!Mover!el!macrométrico!acercando!la!muestra!tan!cerca!de!los!objetivos!como! sea!posible!sin!llegar!a!chocar!con!ellos! 7.-!Mirar!por!los!oculares!con!los!dos!ojos!abiertos.!Mover!el!macrométrico!de! manera!que!baje!la!platina!hasta!que!veamos!una!imagen!más!o!menos!nítida! 8.-!Mover!ahora!el!micrométrico!para!conseguir!un!enfoque!fino!de!la!imagen.!Si!es! necesario!moveremos!la!muestra!en!la!horizontal!para!centrar!lo!que!deseemos!en! el!objetivo.! 9.-!Una!vez!enfocado!con!el!objetivo!de!menor!aumento!no!volvemos!a!usar!el! macrométrico!a!no!ser!que!perdamos!totalmente!el!enfoque,!momento!en!que! volveremos!al!objetivo!de!menor!aumento!y!empezaremos!desde!el!punto!6.!

10.-!Para!aumentar!la!imagen,!moveremos!el!revolver!hacia!los!objetivos!de!mayor! aumento!que!iremos!enfocando!con!el!micrométrico,!uno!a!uno.!Cada!vez!que! pasemos!a!un!nuevo!objetivo!debemos!escuchar!un!sonido!que!nos!indica!que!el! objetivo!está!en!la!posición!adecuada.! 11.-!Cuando!utilicemos!el!objetivo!100X!notaremos!que!la!muestra!no!se!ve!con! nitidez.!Esto!es!debido!a!que!dicho!objetivo!es!de!inmersión!y!necesitamos!aceite! de!cedro!para!poder!enfocar!con!nitidez.! 12.-!Cuando!terminemos!con!el!microscopio!debemos!dejar!colocado!en!la!posición! de!visualización!el!objetivo!de!menor!aumento!que!tengamos.! !

Definiciones)y)parámetros)que)debemos)conocer)en)microscopía) ! •

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Campo!del!microscopio! El!campo!es!lo!que!vemos!por!el!objetivo.!Es!circular!y!disminuye!a! medida!que!subimos!en!aumentos.!Es!conveniente!colocar!en!el!centro! del!campo!la!zona!de!interés!de!la!muestra!para!no!perderlo!cuando! subamos!en!aumentos.! Aumentos! El!aumento!total!que!permite!un!microscopio!óptico!se!calcula! multiplicando!la!magnificación!que!produce!el!objetivo!por!el!que! produce!el!ocular.!Por!ejemplo,!si!usamos!un!objetivo!de!40X!(40!veces)! y!un!ocular!de!10X!(10!veces),!el!resultado!final!será!de!400X,!o!sea,!que! vemos!la!muestra!aumentada!400!veces.! No!confundir!el!aumento!con!la!resolución.! Profundidad!de!campo! Es!la!zona!que!comprende!desde!el!punto!más!cercano!y!el!más!lejano!de! nuestro!campo!que!sea!aceptable!en!cuanto!a!nitidez,!una!vez!formada! su!imagen!en!el!mismo!plano!de!enfoque.!

! ! ! ! ! ! ! ! ! •

Poder!de!resolución! Es!la!capacidad!de!poder!ver!dos!puntos!que!se!encuentran!muy! próximos!de!forma!separada.! ! Ojo$humano:$0,1-0,2$mm$ Microscopio$óptico:$0,2$µm$ Microscopio$electrónico:$0,2$nm$

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! Se!puede!calcular!teniendo!en!cuenta!la!longitud!de!onda!de!la!luz!(λ)!y! la!apertura!numérica!(AN)!de!nuestros!objetivos,!mediante!la!formula:! PR=!λ/2AN!

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Otro)tipo)de)microscopio)de)utilización)común) ! En!muchas!aplicaciones!en!las!que!es!necesario!mantener!objetos/organismos!en! suspensión!(cultivos!celulares,!muestras!de!fitoplancton,!cultivos!de!microalgas)!se! suele!utilizar!el!denominado!microscopio!invertido.!La!característica!más!relevante! de!este!modelo!es!que!la!fuente!de!luz!se!disipa!por!la!parte!superior!de!la!platina!y! la!óptica!se!sitúa!en!la!parte!inferior!permitiendo!la!observación!de!muestras!en! contenedores!diferentes!al!portaobjetos,!por!ejemplo,!utilizando!placas!de!Petri.!

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La)fotografía)al)microscopio) ) Actualmente,!la!mayoría!de!microscopios!poseen!sistemas!para!acoplar!una! cámara!de!fotos!o!de!vídeo!con!las!que!poder!ver!la!muestra!en!tiempo!real!a! través!de!una!pantalla.!En!algunos!casos,!muchos!sistemas!ya!utilizan!apps!para! poder!ver!en!la!Tablet!o!el!móvil!la!imagen!directamente.!En!nuestro!caso,! podemos!realizar!fotos!de!nuestras!muestras!con!una!cámara!digital!o!cámara!del! móvil!a!través!de!los!oculares.!! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! !

Las)buenas)prácticas)en)microscopía) ! 1.-!No!golpear!ni!mover!bruscamente!el!microscopio! 2.-!No!dejar!puesta!ninguna!muestra!en!la!platina! 3.-!No!tocar!ningún!componente!del!sistema!óptico!con!las!manos! 4.-!Limpiar!adecuada!y!regularmente!las!lentes! 5.-!Apagar!la!fuente!de!luz!al!finalizar!la!observación! 6.-!Colocar!el!objetivo!de!menos!aumento!al!finalizar! 7.-!Trasladarlo!siempre!por!el!brazo,!no!cogerlo!por!ninguna!otra!parte! ! !

Bibliografía:) ! Kremer,!B.P.!(2012).!Manual!de!microscopía.!Ed.!Omega.!! ! http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo 4_8.htm! ! http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/6-optico.php! ! http://www.eumed.net/libros-gratis/ciencia/2013/22/microscopio.html! ! www.wikipedia.org! !...