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Bitácora “Precipitación, separación y punto isoeléctrico de proteínas". Bioquímica General...

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS BIOQUÍMICA GENERAL Bitácora de la práctica: “Precipitación, separación y punto isoeléctrico de proteínas” Alvarez Garcia Marely Grupo 4QV2 Sección 3

Introducción En la precipitación se concentra el soluto de una solución convirtiéndolo en sólido mediante la acción de un agente precipitante. Las proteínas se encuentran solvatadas en agua debido a las interacciones entre sus grupos polares y con las moléculas de agua, de esta forma, cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. La precipitación suele ser consecuencia del fenómeno llamado desnaturalización y se dice entonces que la proteína se encuentra desnaturalizada. Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) y químicos (detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica). Como en algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es reversible, es posible precipitar proteínas de manera selectiva mediante cambios en: • • • •

la polaridad del disolvente la fuerza iónica el pH la temperatura

La precipitación se utiliza como método de concentración de proteínas, por lo que, para lograr hacer un análisis completo de estas, se aplican diferentes métodos de separación que nos permitan estudiarlas, tales como: o Salting out. La adición de sales elimina el agua de la proteína hidratada, dejando las regiones hidrofóbicas en libertad de combinarse intermolecularmente. o Precipitación por solventes. Las proteínas se mantienen en solución por la interacción de los grupos hidrofílicos de su superficie con el solvente Si la polaridad del solvente se reduce por la adición de un solvente orgánico menos polar que el agua, la proteína se vuelve menos soluble. o Precipitación por metales pesados. Se disminuye la solubilidad de la proteína por medio de la adición de sales inorgánicas, o modificando el pH de la solución con el fin de desnaturalizarla. o Determinación del punto isoeléctrico. Este proceso se realiza a través de la extracción alcalina seguido de una precipitación isoeléctrica, método en el que se aprovecha la solubilidad de las proteínas la cual es alta a pH alcalinos y baja valores cercanos al punto isoeléctrico. Objetivos ▪

Aplicar los diferentes métodos de precipitación de proteínas que existe.

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Comprender el fundamento de los métodos de precipitación de proteínas.

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▪

Analizar el efecto que produce la modificación de factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las proteínas.

▪

Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, basándose en sus propiedades de solubilidad a diferentes valores de pH.

Metodología I.

Separación de proteínas por precipitación con sales (salting out).

II.

Precipitación por efecto del pH y de solventes.

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III.

Precipitación por metales pesados.

IV.

Determinación del punto isoeléctrico de la insulina.

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