CC1 de Microbiologie - CC2 PDF

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LICENCE 2-SV CONTROLE CONTINU DE MICROBIOLOGIE DU VENDREDI 15 MAI 2020 10 h à 11h30 EXERCICE 1 : 1 - Une souche d’Escherichia coli est infectée par un bactériophage lambda A, des plages de lyse claires sont obtenues. 2 - La même souche d’Escherichia coli est infectée par un bactériophage lambda B, un tapis continu de bactérie est obtenu ; 3 - Dernière expérience, la même souche de Escherichia coli est infectée par un bactériophage lambda C, des plages de lyse troubles sont obtenues. a)

Expliquer clairement ces différents résultats en donnant le maximum d’information sur les différents bactériophages utilisés dans ces expériences. b) Donner le phénotype et le génotype des bactériophages.

EXERCICE 2 : Supposez qu’après avoir effectué une expérience dans un tube en U avec deux auxotrophes, vous ayez découvert que la recombinaison n’était pas bloquée par le filtre mais bien absente après traitement avec la désoxyribonucléase. a) Quel processus de transfert de gènes est responsable ? Justifiez votre réponse. b) Pourquoi vaut-il mieux employer des doubles ou triples auxotrophes dans cette expérience ? Justifiez votre réponse. EXERCICE 3 On croise un Hfr his+ gal+ pro+ avec une F- his- gal- pro-. Un croisement interrompu a établi que his+ est le dernier marqueur transféré dans la F-. Les recombinants his+, sélectionnés sur un milieu contenant du galactose (gal) et de la proline (pro), sont analysé pour la présence des allèles gal+ et pro+. Pour chaque classe génomique, on trouve le nombre d’individus que voici : his+ gal+ pro+

960

his+ gal+ pro-

24

his+ gal-pro+

3

his+ gal- pro-

144

a) Quel est l’ordre des gènes ? b) Calculer la distance entre les gènes c) Quelle est la distance entre les deux gènes se trouvant aux extrémités de votre carte génétique ? Justifiez votre réponse. d) Que faites-vous pour sélectionner uniquement les recombinants his+ gal+ pro- des autres recombinants (pour faciliter l’écriture, on considérera que le produit du gène his est His, le produit du gène gal est Gal et le produit gène pro est Pro). Justifiez votre réponse.

EXERCICE 4 : Cinq souche Hfr, A – E, sont obtenues au départ d’une même souche F+. Le tableau ci—dessous reprend les temps d’entrée en minute des cinq premiers marqueurs transférés dans une souche F- par chacune d’elles lors d’une expérience de croisement interrompu. A mal+ (1) strs (11) ser+ (16) ade+ (36) his+ (51)

B ade+ (13) his+ (28) gal+ (38) pro+ (44) met+ (70)

C pro+ (3) met+ (29) xyl+ (32) mal+ (37) strs (47)

D pro+ (10) gal+ (16) his+ (26) ade+ (41) ser+ (61)

E his+ (7) gal+ (17) pro+ (23) met+ (49) xyl+ (52)

a) Dessiner une carte de la souche F-, en indiquant la position de tous les gènes et les distances en minutes qui les séparent ; b) Indiquer le point d’insertion et l’orientation de F dans chaque souche Hfr. c) Pour chacun des Hfr, citez le gène que vous sélectionneriez pour obtenir un maximum de Hfr parmi les exconjugants. EXERCICE 5 : Une colonie d’Escherichia coli constituée de 1 107 bactéries est diluée dans 10 ml de milieu LB (suspension bactérienne A), puis on effectue les dilutions suivantes : -

200 µl de la suspension A sont ajoutés à 1,8 ml de milieu LB (suspension bactérienne B) 200 µl de la suspension B sont ajoutés à 1,8 ml de milieu LB (suspension bactérienne C) 200 µl de la suspension C sont ajoutés à 1,8 ml de milieu LB (suspension D) Et enfin 200 µl de la suspension D sont ajoutés à 1,8 ml de LB (suspension E) 400 µl de la suspension bactérienne E est étalés sur un milieu solide LB/Agar et incubés une nuit à 37°C. a) Pourquoi fait-on toutes ces dilutions ? b) Combien de colonies devrait-on trouver sur le milieu solide LB/Agar ? (vous devez détailler vos calculs) EXERCICE 6 : Décrivez la manière dont vous isoleriez un mutant requérant de l’histidine pour sa croissance et qui soit résistant à l’ampicilline....