Reporte 5 - Determinacion de actividad enzimatica. Catalasa en higado, papa y manzana. PDF

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Determinacion de actividad enzimatica. Catalasa en higado, papa y manzana....

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BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LIC. QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I HORARIO MARTES 16:00-18:00 HR. DR. HERNÁNDEZ CARRANZA PAOLA Actividad Enzimática INTEGRANTES GARCIA CUATECO EDUARDO HERRERA POPOCA OSCAR ALEXIS MENDIETA MENDIETA LOURDES ALEJANDRA MENDIOLA HERRERA NADIA PAOLA

Introducción: Las enzimas son moléculas son moléculas que incrementan la velocidad de una reacción y lo hacen disminuyendo la energía de activación, es decir la cantidad de energía que se debe agregar a una reacción para que esta comience. Las coenzimas conjugadas se llaman holoenzimas poseen en su estructura una parte no proteica denominada cofactor y una parte proteica que se denomina apoenzima. Para que estas enzimas actúen como catalizadores es necesario que la apoenzima se una al cofactor. Para catalizar una reacción, una enzima se une a una o más moléculas de reactivo. Estas moléculas son los sustratos de la enzima. En algunas reacciones, un sustrato se rompe en varios productos. En otras, dos sustratos se unen para crear una molécula más grande o para intercambiar partes. De hecho, para cualquier reacción biológica que se te pueda ocurrir, probablemente exista una enzima para acelerarla. La parte de la enzima donde se une el sustrato se llama el sitio activo

La actividad enzimática se puede inhibir y puede hacerse de forma selectiva ya sea para reducir o eliminar la actividad enzimática la inhibición puede darse de dos formas Irreversible y reversible

En

la forma irreversible el inhibidor se une covalentemente a la enzima, casi siempre a un grupo de la cadena lateral de los amino ácidos en el sitio activo por lo que la enzima queda inactiva permanentemente. Mientras que en la forma irreversible el inhibidor puede disociarse de la enzima porque no se une por enlaces covalentes. Esta puede ser competitiva o no-competitiva.

En la Inhibición Competitiva: el inhibidor competitivo es muy similar al sustrato normal de la enzima. Dada esa similitud estructural, este tipo de inhibidor se une reversiblemente al Sitio activo de la enzima.

Para la inhibición No-Competitiva: A diferencia de los inhibidores competitivos, los no competitivos se unen a la enzima en un sitio específico diferente al activo. De esta propiedad se deriva su nombre, pues no compiten con el sustrato para ocupar el sitio activo. Aún más, este tipo de compuestos puede tener una estructura química totalmente diferente a la del sustrato. Se piensa que al unir a la enzima un inhibidor de este tipo, se produce un cambio en su estructura tridimensional que altera la configuración del sitio activo, imposibilitando el reconocimiento del sustrato. Cuando EI se rompe, la enzima adquiere su

conformación activa. conformación activa.

RESULTADOS Intensida

Nad

Poc

Medi

Much

d de

a

a

o

o

burbujeo

X

Xx

Xxx

Xxxxx

Contenido Trozo de manzana NaCN 5% Pb(NO3)5% H2O2 Intensidad de burbujeo

Tubo 1 Sin hervir ----2 ml Xxx

Tubo 2 Hervido ----2 ml Xx

Tubo 3 Sin hervir 5 gotas --2 ml Xx

Tubo 4 Sin hervir --5 gotas 2 ml Xxx

Figura 4: actividad enzimática de la manzana de lado izquierdo en crudo y de lado derecho hervido ambos con agua oxigenada

Figura 1: actividad enzimática de la manzana, del lado izquierdo con cianuro de sodio al 5% y de lado derecho con nitrato de plomo al 5% Contenido Higado de pollo NaCN 5% Pb(NO3) 5% H2O2 Intensidad de burbujeo

Tubo 1 Sin hervir ----2 ml Xxxxx

Tubo 2 Hervido ----2 ml X

Tubo 3 Sin hervir 5 gotas --2 ml Xxx

Tubo 4 Sin hervir --5 gotas 2 ml Xxxx

Figura 5: Se observa la actividad enzimática del hígado de pollo en lado izquierdo esta sin hervir y en el lado derecho se encuentra hervido ambos con agua oxigenada Figura 2: se observa la actividad enzimática del hígado de pollo en el lado izquierdo con cianuro de sodio al 5% y de lado derecho con nitrato de plomo al 5%. Contenido Trozo de papa NaCN 5% Pb(NO3)5% H2O2 Intensidad de burbujeo

Tubo 1 Sin hervir ----2 ml Xx

Tubo 2 Hervido ----2 ml Xx

Tubo 3 Sin hervir 5 gotas --2 ml X

Figura 6: actividad enzimática de la papa de lado izquierdo esta en crudo y de lado derecho hervida ambos con agua oxigenada Figura 3: actividad enzimática de la papa de lado izquierdo con cianuro de sodio al 5% y del lado derecho con nitrato de plomo al 5%. Discusión

Tubo 4 Sin hervir --5 gotas 2 ml Xxxxx

Observando nuestros resultados nos damos cuenta que el tejido que contiene más catalasa es el tejido animal pero cuando este tejido se pone a altas temperaturas pasa lo que conocemos como desnaturalización y es por eso no reacciona con el H2O2 por eso es que no hay precisa de burbujeo. Nos damos cuenta que quien tiene mayor presencia de catalasa es tanto la muestra de papa Pb(NO3)5% y del hígado de pollo con Pb(NO3)5% y H2O2 sin emplear altas temperaturas y contando que se le agrego un inhibor Pb. Como sabemos que los inhibidores son los que inhiben la actividad de la enzima en este caso la catalasa nos percatamos que la papa y manzana tuvo un considerable efecto el inhibidor CN- ya que su burbujeo fue poco o nada. Esto pasa ya que estos ciertos inhibidores como el CN- al unirse con la enzima forma complejos con iones de metales pesados con el grupo porfirínico de hierro y en el caso del inhibidor Pb- que actúa sobre grupos tiol de esta enzima impidiendo su actividad enzimática Cuestionario 1.¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática? todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalización frente al calor. Esto quiere decir que cuando la temperatura es muy elevada, la enzima pierde su estructura terciaria, por lo tanto, su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no puede cumplir su función. Cada enzima tiene una temperatura óptima de actuación. Por debajo y por encima de esta temperatura, la enzima ralentiza la velocidad de la reacción enzimática. El aumento en la velocidad de reacción se produce porque con temperaturas más altas, existen más moléculas de sustrato con suficiente energía para reaccionar; la disminución de la velocidad de la reacción es debida a la desnaturalización de la enzima (la mayoría de las proteínas globulares se desnaturalizan por encima de 60 - 70°C). La enzima sufre un proceso de desnaturalización. Ya que pierde su estructura terciaria, desnaturalizando a su vez al sitio activo y perdiendo así su función. Es lo que sucedió al hervir el tejido de hígado, por eso es que al agregarle el peróxido no hubo burbujeo.

2.¿Qué es el factor Q-10 El coeficiente de temperatura Q10 es el factor mediante el cual la velocidad de una reacción (reacción química) aumenta con un incremento de 10° en la temperatura, medida en grados Celsius. Q10 se define mediante la ecuación. Si se mide la velocidad de la reacción a dos temperaturas cualquiera, se puede ingresar las velocidades y las temperaturas en esta ecuación para hallar el valor de Q10. 3. Escribe el complejo que se forma con el Fe y el CNEl ion ferroso forma un complejo con seis iones cianuro (CN) y es un complejo octaédrico que se llama ferrocianuro. El ion férrico también forma un complejo con seis iones cianuro, el complejo octaédrico formado se llama ferrocianuro y la única diferencia es que el complejo de hierro II tiene un electrón más que el complejo de hierro III. Tanto el ion ferroso como el férrico forman un complejo con los iones de CN, y estos son denominados ferrocianuro, es un compuesto octaédrico. La diferencia radica en el complejo con Hierro II (ferroso) debido a su capacidad de tener un electrón más que el hierro III (férrico).

Conclusión La catalasa en una enzima que están en diferentes productos, como en este caso, hígado de pollo, papa y manzana. Recordando la importancia de esta enzima, que degrada al H2O2, compuesto tóxico para la célula. Al someter a diferentes efectos, como la temperatura, inhibidores tal como Pb y CN-, se observó como esta actividad enzimática disminuyo. Para la temperatura, al ser una proteína se desnaturalizo, por lo que la presencia de burbujas disminuyo interpretando que la actividad también lo hizo. Cuando se agregaron los inhibidores, estos “bloquearon” la actividad de la enzima con su sustrato, por lo cual su burbujeo se disminuyó, recalcando que estos factores afectaron la actividad de cada tejido, tanto el vegetal como el animal. Al ser una proteína, recordamos que estas tienen un pH, temperatura, concentraciones adecuadas en las que sus actividades son favorecidas de acuerdo en el medio que se encuentren. Decimos entonces que la actividad enzimática es conveniente sin agregar ningún inhibidor y sin someter a un aumento de temperatura.

Bibliografía Castro Rivera, Jhon Alexander, Baquero Duarte, Lucia Estrella y Narváez Cuenca,

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Carlos Eduardo. (2006). CATALASA, PEROXIDASA Y POLIFENOLOXIDASA DE PITAHAYA AMARILLA (Acanthocereus pitajaya). Revista Colombiana de Química , 35 (1), 91-100. Obtenido el 26 de octubre de 2020 de http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S012028042006000100009&lng=en&tlng=es. ADELAIDA DÍAZ. (...). LA ESTRUCTURA DE LAS CATALASAS. 2020, de ...

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Sitio web: file:///C:/Users/Nadia/Downloads/2003-2_LA%20ESTRUC_%20de %20las%20catalasas.pdf •

Céspedes Miranda, Ela M, Hernández Lantigua, Ingrid, & Llópiz Janer, Niurka. (1996). Enzimas que participan como barreras fisiológicas para eliminar los radicales libres: II. Catalasa. Revista Cubana de Investigaciones Biomédicas, 15(2) Recuperado en 27 de octubre de 2020, de http://scielo.sld.cu/scielo.php? script=sci_arttext&pid=S0864-03001996000200001&lng=es&tlng=es....