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TP Dosages colorimétriques des protéines Par la méthode de Lowry

Gamme étalon 2 mL

Albumine bovine

0,050 g

10 mL d'eau

10 mL d'eau

Solution d'albumine à 5 mg.mL-1

Solution d'albumine à 1 mg.mL -1

0

Tubes

1

Gamme étalon

2

3

4

5

1 mg.mL−1

Ci ( mg.mL−1) Cf (mg.mL−1 )

0

0,1

0,4

0,6

0,8

1,0

V i (mL )

0

0,05

0,2

0,3

0,4

0,5

V solv ( mL)

0,5

0,45

0,3

0,2

0,1

0

V f ( mL) −1

Ci = 1 mg.mL

0,5 à cause de la limite maximale de sensibilité de la méthode.

DO (600 nm)

0,1

Préparer chaque tube en triplicata.

1 [Protéines] (mg.mL-1 )

Tableau de dilution Pur

1/2

1/5

1/10

1/20

1/40

(mL )

0,5

0,25

1

0,05

0,025

0,0125

(µL)

500

250

100

50

25

12,5

0

0,25

4

0,45

0,475

0,4875

Tubes Volume d'extrait

V solv ( mL) V f ( mL)

0,5

Les tubes se feront aussi en triplicata

Dilution en cascade 0,25 mL

Extrait de langoustine

1 mL

10 mL d'eau

2,000 g

10 mL solution d'extrait pur

0,5 mL

0,25 mL d'eau

4 mL d'eau 5 mL solution d'extrait 1/5

0,5 mL solution d'extrait 1/2

0,5 mL

5 mL

2,5 mL

2,5 mL

0,5 mL

2,5 mL d'eau 5 mL solution d'extrait 1/10

2,5 mL d'eau 5 mL solution d'extrait 1/20

0,5 mL

0,5 mL

0,5 mL

Réactif B Δt = 10 mn Dans tous les tubes Réactif de Lowry

Δt = 10 mn

Dans tous les tubes

2,5 mL

DO

2,5 mL d'eau 5 mL solution d'extrait 1/40

0,5 mL...