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Practicas de laboratorio de Bioquímica ...

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Universidad Autónoma del Estado de Morelos Facultad de Medicina Manual del Laboratorio de Bioquímica

PRACTICA No. 7 DETERMINACION DE CLORUROS POR EL METODO VOLUMETRICO. INTRODUCCION El cloruro es el anión de mayor concentración en el líquido extracelular, juega un papel muy importante en el control de la osmolaridad de los fluidos orgánicos y aunque no ejerce acción amortiguadora, influye en el mantenimiento del equilibrio ácido-base que se desplaza hacia la alcalosis cuando pierden cloruros hacia la acidosis cuando retienen. El nivel de cloruros en suero se eleva en casos de insuficiencia renal, nefrosis, deshidratación, y administración excesiva de solución salina, y disminuye cuando hay pérdida de contenido gástrico (vómito) manejo inadecuado de diuréticos e insuficiencia suprarrenal. Los iones cloruros presentes en el suero o en la orina se titulan con una solución valorada de nitrato mercúrico, en presencia del indicador difenilcarbozona. Los iones cloruro se combinan con los iones mercúrico Hg 2+ para formar cloruro mercúrico soluble prácticamente no ionizado; cuando todos los iones cloruro han reaccionado con los iones de mercúrico, el exceso de éstos últimos se combinan Con la difeilcarbozona para formar un complejo de color violeta; este señala el punto final de la titulación. REACTIVO

PRODUCTO FINAL

Hg++ + 2 Cl-

Hg Cl2

Hg++ + difenilcarbozona

COMPLEJO

OBJETIVOS Al terminar la práctica el alumno será capaz de: 1. Explicar la importancia y los eventos fisiológicos, bioquímicas que se relacionan en la participación de estos iones en la osmolaridad y el equilibrio electrolítico de los líquidos orgánicos. 2. Conocer la técnica para la obtención de muestras biológicas: sangre, plasma, suero, orina, así como su manejo y realizar diluciones. 3. Aplicar la técnica de titulación para determinar la concentración de cloruros en suero y orina.

Universidad Autónoma del Estado de Morelos Facultad de Medicina Manual del Laboratorio de Bioquímica

MATERIAL Matraz Erlenmeyer de 125 mL. Pipeta graduada en centésima del mL. (0.01 mL) Pipeta de 1 mL. Probeta de 100 mL. Vaso de precipitado de 250 mL. REACTIVOS Solución de nitrato mercúrico 0.015 N (veneno; NO PIPETEAR CON LA BOCA) Solución de difenilcarbozona 1mg/dl NOTA: Toda el agua que se utilice en esta práctica deberá ser AGUA DESIONIZADA, Inclusive la que se use para enjuagar el material de vidrio. MATERIAL BIOLOGICO MUESTRA: Suero o plasma. Traer una muestra de orina de 24 horas (Recolectar orina desde de las 6:00 am de un día anterior al laboratorio hasta el siguiente día que se presenta al laboratorio) MUESTRA: Orina (recolectar en 24 horas, llevar al laboratorio 20 mL. METODOLOGIA EXPERIMENTO I PRUEBA EN SUERO O PLASMA 1.

En un matraz Erlenmeyer de 50 mL (libre de de moléculas de cloro que contiene el agua potable de la llave) poner 0.2 mL de suero o plasma humano.

2.

Agregar 10 mL de agua desionizada para facilitar la titulación y observar mejor el punto viraje del indicador.

3. Añadir cuatro gotas del indicador de difenlcarbozona. Titular muy lentamente, dejando caer gota a gota la solución de nitrato mercúrico desde la pipeta graduada en centésimas de mL, con la mano derecha y con la mano izquierda agitar con movimiento rotatorio el matraz, hasta la aparición del primer color violeta pálido permanente.

EXPERIMENTO II

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II PRUEBA EN ORINA CON DILUCION 1. Realizar una dilución 1:50 utilizar un matraz aforado de 50 mL (un volumen de orina y 49 volumen de agua Desionizada). 2. En un matraz Erlenmeyer de 125 mL poner 2.0 mL de orina con dilución 1:50. 3. Agregar 10 mL de agua desionizada para facilitar la titulación y observar mejor el punto de viraje del indicador. 4. Añadir cuatro gotas del indicador de difenilcarbozana. Titular muy lentamente dejando caer gota a gota la solución de nitrato mercúrico desde la pipeta graduada en centésimas de mL, con la mano derecha y con la izquierda agitar con movimiento rotatorio el matraz, hasta la aparición del primer color violeta pálido permanente. METODO: Un alumno donar una orina muestra deshidratado. (Inicial o pre ). Tomar un litro de agua Una muestra posterior a los 30 minutos. (post) Realizar las muestras de cloruros en orina. RESULTADOS Aplicar los datos en la siguiente fórmula para obtener la concentración de cloruros [Cl-] en equivalentes por litro (Eq/ l). V1 x N1 = V2

N2 =

Lectura de la pipeta x 0.015 N = Eq / l Volumen de la muestra

Cl-

En la orina hay que multiplicar por 50 para tener en cuenta la dilución. El resultado se expresa para fines del equilibrio electrolítica en miliequivalente por litro (mEq / l). También tomar en cuenta el agua que se agrego para una mejor observación que son 10 mL. Cálculos de las muestras obtenidas de su compañero y explicar los resultados obtenidos.

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Y lo normal en: En plasma sanguíneo En orina de 24 horas Bajo una dieta normal

96 a 106 mEq / l 100 a 300 mEq/ l

REPORTE 1.- Realizar los cálculos del experimento I 2.- Realizar los cálculos del experimento II 3.- Dibujar o representar los resultados obtenidos

CUESTIONARIO 1.- ¿Qué nos indica la cantidad de cloruros que es excretan en la orina de 24 horas? 2.-¿Qué relación tienen los cloruros con el sodio y el intercambio de liquido? 3.-¿Los cloruros urinarios son útiles para el apoyo del diagnostico de ? 4.-¿En los siguientes factores biológicos en un paciente se recomienda la observación en peso diario, con anotaciones sobre ingestión, excreciones y turgencias de la piel, el aspecto de la lengua y el de la muestra urinaria qué importancia tiene en los cloruros bioquímicamente? 5.-¿Los cloruros disminuyen en cuales enfermedades? 6.-¿Los cloruros aumentan en cuales enfermedades? 7.-¿Qué relación tiene el sodio y el potasio en los cloruros urinarios?...