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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD SECCIÓN GENÉTICA HUMANA, MICROBIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA CLÍNICA TITULACIÓN DE MEDICINA DETERMINACIÓN DE UREA Y ÁCIDO ÚRICO EN PLASMA SANGUÍNEO LOJA – ECUADOR OCTUBRE – ENERO 2019 1. INTRODUCCIÓN Las personas de todas las edades necesitan realizarse exámenes preventiv...

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD SECCIÓN GENÉTICA HUMANA, MICROBIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA CLÍNICA TITULACIÓN DE MEDICINA

DETERMINACIÓN DE UREA Y ÁCIDO ÚRICO EN PLASMA SANGUÍNEO

LOJA – ECUADOR OCTUBRE – ENERO 2019 1. INTRODUCCIÓN Las personas de todas las edades necesitan realizarse exámenes preventivos con regularidad ya que estos se enfocan en su salud general y los riesgos médicos. El objetivo es detectar enfermedades en su etapa inicial; el diagnóstico precoz de patologías permite disminuir, considerablemente, la morbilidad y mortalidad. Existen muchas enfermedades silenciosas que sólo manifiestan molestias en etapas avanzadas, razón suficiente para realizar un chequeo médico preventivo al menos una vez al año. Las pruebas de laboratorio examinan muestras de sangre, orina o tejidos corporales. Estos análisis usan un rango de valores porque lo que se considera normal varía de una persona a otra. Los exámenes de rutina, importantes a realizarse, se basan en la glucosa, colesterol, urea y ácido úrico, entre otros (CHSF, 2017). Urea

La urea es la forma no tóxica del amoníaco que se genera en el organismo a partir de la degradación de proteínas, que provienen tanto de la dieta como del recambio fisiológico. La urea en sangre, es un residuo metabólico, en el cual, se mide la cantidad de proteínas que el cuerpo digiere a través del hígado, esto lo realiza depurando y eliminando aquellas proteínas que son innecesarias (Santos, 2017). La retención de urea en la sangre refleja el malfuncionamiento renal globalmente, es decir, muestra el funcionamiento que están teniendo los riñones, aunque este puede verse afectado por la dieta rica en proteínas, por el funcionamiento hepático y por estados catabólicos e hipovolémicos. Además, en el túbulo renal, la urea acompaña al agua, de modo que, si la diuresis esta elevada, la excreción de agua es mayor y por tanto se eliminará urea (concentración baja); por el contrario, si el sujeto presenta una diuresis baja (deshidratación, hemorragia, insuficiencia cardiaca, insuficiencia renal) aumentará la reabsorción y la concentración de urea en sangre (concentración alta) (Cazar, 2018). Ácido úrico Por otro lado, el ácido úrico es un compuesto que se genera en el organismo como consecuencia de la descomposición de unas sustancias conocidas como purinas, las cuales se producen normalmente en el cuerpo y también se encuentran en algunos alimentos y bebidas. La mayor parte del ácido úrico se disuelve en la sangre y viaja a los riñones, desde donde es excretado a través de la orina; si el cuerpo produce demasiado ácido úrico o no lo elimina en cantidades suficientes, puede causar enfermedades severas (Jaramillo, 2017). Su importancia radica no tanto para medir la función renal ya que, tradicionalmente, se suele asociar el hecho de tener el ácido úrico elevado (hiperuricemia) a la gota, enfermedad que hace que se inflame el dedo gordo del pie, provocando un gran dolor. Sin embargo, ésta es una visión minimalista (Quezada, 2018). En la actualidad, el ácido úrico está considerado como un factor de riesgo cardiovascular por sí sólo, ya que causa una disminución del óxido nítrico, que es fundamental para mantener la elasticidad de los vasos sanguíneos y para la absorción de la glucosa por parte del organismo; esto puede tener una doble consecuencia: causar hipertensión arterial, diabetes tipo 2 y arterioesclerosis, entre otras (Sanitas, 2017). Estos análisis permiten prevenir el desarrollo de enfermedades asociadas a la elevación o disminución de los resultados que se obtenga, razón por la cual es importante mantener un control; en caso de existir enfermedad, los análisis permiten acercarse a la causa central de la misma.

2. OBJETIVOS: 

Objetivo General 



Determinar las concentraciones de urea y ácido úrico mediante un método de análisis enzimático colorimétrico, para relacionar la cuantificación de los datos obtenidos con los datos normales, investigando en datos científicos.

Objetivos específicos

   

Correlacionar los valores obtenidos con las siguientes variables: Género, edad, peso, talla. Relacionar los datos obtenidos con los valores referenciales utilizados por la clase médica en nuestro medio. Identificar las variables que intervienen en el proceso de formación de urea y ácido úrico y las patologías consecuentes a las mismas. Conocer la reacción de síntesis para la producción de urea y ácido úrico respectivamente.

3. MATERIALES

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       

Tubos de ensayo. Tubos vacutainer Micropipetas Puntillas para micropipetas Gradilla Guardianes Toallas de papel Recipientes de plástico

    

Sustancias Plasmo o suero STD: estándar RGT: Reactivo enzimático Suero de control de calidad

Equipo  

Centrifugadora Baño María para laboratorio.

4. PROCEDIMIENTO (METODOLOGÍA) Determinación de ácido úrico. 1. Esperar a que las muestras de suero ya obtenidos en la práctica anterior, se descongelen y que estén maso menos a temperatura ambiente. 2. Preparación de los reactivos: RGT Y STD están listos para su uso. 3. Pipetear en un tubo de ensayo previamente rotulados; el suero, el reactivo y el estándar como e indica a continuación:

Tubo de ensayo

Suero

Reactivo enzimático RGT

Estándar STD

Muestra 1  Melissa A.

10 µl

1000 µl

20 µl

Muestra 2  Andrea C.

10 µl

1000 µl

20 µl

Blanco

10 µl

1000 µl

-------

4. Mezcla muy bien, pipetear y procurar que no queden sustancias en las paredes del tubo de ensayo

5. Incubar por 5 minutos a 37°

6. Leer la absorbancia de las muestras 1 y 2 frente al blanco en el espectrofotómetro, antes de 15 minutos.

Determinación de urea. 1. Esperar a que las muestras de suero ya obtenidos en la práctica anterior, se descongelen y que estén maso menos a temperatura ambiente. 2. Preparación del reactivo enzimático 1a  mezclando 1ml ENZ (enzima ureasa) con 100 ml RGT1 3. Preparación de los reactivos: RGT2 Y STD están listos para su uso. 4. Pipetear en un tubo de ensayo previamente rotulados; el suero, el reactivo y el estándar como e indica a continuación:

Tubo de ensayo Rotulados así

Suero

Reactivo enzimático 1a

Estandar STD

Muestra 1  Melissa A.

10 µl

1000 µl

10 µl

Muestra 2  Andrea C

10 µl

1000 µl

10 µl

Blanco

10 µl

1000 µl

-------

Suero Control

10 µl

1000 µl

10 µl

5. Mezcla muy bien, pipetear y procurar que no queden sustancias en las paredes del tubo de ensayo.

6. Incubar por 5 minutos a 37°

7. Colocar en todos los tubos de ensayo el RGT 2 (reactivo enzimático 2, de la tapa roja)  1000 µl

8. Leer la absorbancia de las muestras 1 y 2 y control frente al blanco en el espectrofotómetro, antes de 60 minutos.

5. RESULTADOS

Mediante la práctica de determinación de ácido úrico en la sangre obtuvimos:

MUESTRA

Ácido úrico mg/dL

Valores referenciales en mujeres

Estado

Melissa Álvarez

5.3 mg/dL

2,4 -5,7 mg/dL

Normal

Andrea Cuenca

7.9 mg/dL

2,4 - 5,7 mg/dL

Elevado

Control

9,3 mg/dL

2,4 - 5,7 mg/dL

Elevado

Mediante la práctica de determinación de urea en la sangre obtuvimos:

MUESTRA

Urea mg/dL

Valores referenciales

Estado

Melissa Álvarez

43.9 mg/dL

10 - 50 mg/dl

Normal

Andrea Cuenca

62.6 mg/dL

10 - 50 mg/dl

Elevado

Control

78.9 mg/dL

10 - 50 mg/dl

Elevado

6. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS Resultados del análisis de acido úrico en la sangre El ácido úrico es un compuesto orgánico formado por carbono, nitrógeno, oxígeno e hidrógeno que se forma cuando el metabolismo desintegra las purinas mediante la acción de la enzima xantina oxidasa. Las purinas son compuestos con nitrógeno que se forman en las células del cuerpo (endógeno) o que entran al cuerpo con los alimentos (exógeno). Casi todo el ácido úrico está disuelto en la sangre que viaja directamente a los riñones. Desde allí se excreta por la orina en forma de sales de sodio o en forma libre. En el análisis realizado a dos voluntarias de sexo femenino, obtuvimos dos valores diferentes de ácido úrico, uno normal y uno elevado. En los resultados de la voluntaria Andrea Cuenca se registró un ácido úrico de 7.9 mg/dL, lo cual significa que el nivel de ácido úrico en la sangre se encuentra elevado. Si el cuerpo produce demasiado ácido úrico o no elimina lo suficiente puede provocar que se desarrolle hiperuricemia, gota y también pueden provocar que se produzcan cálculos renales que podrían bloquear las vías urinarias y causar infecciones renales y/o insuficiencia renal. La enfermedad más asociada al ácido úrico es la gota. La gota es un tipo de artritis que, se debe al depósito, en la articulación y en sus alrededores, de cristales de urato monosódico formados a partir del exceso de ácido úrico contenidos en los fluidos del organismo, que se hallan supersaturados con urato. En consecuencia, el primer requisito bioquímico para que aparezca la gota es una hiperuricemia. Los depósitos de urato monosódico dan el proceso de las características patológicas que permiten establecer el diagnóstico diferencial respecto a otros tipos de artritis y la fase prodrómica de la hiperuricemia; los niveles de ácido úrico también puede elevarse si no se elimina lo suficiente por la orina. En esta prueba cabe destacar que el valor elevado de ácido úrico en la sangre de la voluntaria puede deberse a que la muestra de plasma sanguíneo con la que se trabajó, fue almacenada varias semanas, lo cual pudo alterar los resultados. Sin embargo, la razón principal es la insuficiente excreción por parte del riñón, dejando así residuos en la sangre. Para disminuir o normalizar los niveles del ácido úrico, debemos mantener una dieta exigente para limpiar nuestro organismo, y ejercer análisis periódicos para descartar o prevenir enfermedades graves como las ya mencionadas. Resultados del análisis de urea en la sangre La urea es una sustancia producida por el hígado, y es el producto que se obtiene como desecho del metabolismo de las proteínas. Durante la digestión, las proteínas

son separadas en aminoácidos, los cuales contienen nitrógeno que luego es liberado en forma de ion amonio. El amonio finalmente se une a otras moléculas para producir urea, que posteriormente debe ser filtrada por el riñón, siempre que este se encuentre trabajando correctamente. Normalmente, los riñones filtran la urea de la sangre, pero cuando los riñones no funcionan bien, la cantidad de urea filtrada es menor y aumenta en la sangre y el resultado final será tener urea alta en la sangre, elevando así su concentración. En la práctica realizada a dos voluntarias de sexo femenino, obtuvimos dos valores diferentes de urea, uno normal y uno elevado. En los resultados de la voluntaria Andrea Cuenca se registró una urea de 62.6 mg/dL, lo cual significa que el nivel de urea en la sangre se encuentra elevado, esto puede deberse a diversos factores tales como dietas ricas en proteínas, fallo renal, un fallo cardíaco, al ayuno muy prolongado o a hemorragias. En esta prueba cabe destacar que el valor elevado de urea en la sangre de la voluntaria puede deberse a que la muestra de plasma sanguíneo con la que se trabajó, fue almacenada varias semanas , lo cual pudo alterar los resultados; la causa más probable de este alto nivel de urea sanguínea puede deberse a que la voluntaria, horas antes, consumió poca agua y varios alimentos muy ricos en proteína, lo que provocó que el exceso se almacene en la sangre imposibilitando al riñón excretar todos esos residuos mediante la orina. El aumento de Urea puede producir malestar digestivo (náuseas y vómitos) y cuando los niveles son muy altos, alteraciones en el nivel de conciencia (uremia). Sin embargo, la voluntaria no presentó síntoma alguno, corroborando las razones previamente explicadas. A pesar de que la elevación de la urea pueda ser un hecho pasajero (hasta que el riñón logre excretar los altos niveles de proteína almacenada), no se debe pasar por alto, recomendando nuevos exámenes periódicamente. 7. CONCLUSIONES 

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

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Una elevación de la concentración sérica de urea se interpreta generalmente como una posible disfunción renal, composición de la dieta y el metabolismo proteico, refrigeración de las muestras, o por lo que cualquier alteración en la concentración de soluciones y pipeteo las cuales se traducen en un cambio de los niveles de la urea. La ureasa descompone la urea produciendo dióxido de carbono y amoníaco. Este reacciona en medio alcalino con salicilato e hipoclorito para dar indofenol que se refleja en el color verde. El ácido úrico se produce en respuesta a la descomposición de las purinas , el cual, al llegar a niveles muy elevados, puede afectar gravemente nuestra salud, ocasionando trastornos como la enfermedad de la gota, los cálculos renales, entre otras. La etiología de los niveles elevados de la urea y ácido úrico que resultan en la sobreproducción de estos desechos nitrogenados se debe a la refrigeración de las muestras.

8. RECOMENDACIONES

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Realizar la práctica siguiendo las Normas de Bioseguridad usando los implementos de protección como guantes, bata, entre otros. Revisar la guía de la práctica a realizar en cuanto a la urea y ácido úrico con la finalidad de tener diáfana la teoría y poder realizar un buen trabajo dentro del laboratorio. Tener en cuenta los procesos metabólicos de la urea y ácido úrico para poder argumentar con fundamentos los resultados de la práctica en base a la bioquímica. Manejar correctamente los materiales, tener en cuenta la cantidad exacta de las soluciones a utilizar, tomar adecuadamente el tiempo y la temperatura indicados y realizar el pipeteo con precisión para evitar que la reacción se altere y presente errores en la lectura de los niveles de ácido úrico y urea. Mantener la limpieza y el orden. Los productos químicos derramados tienen que ser recogidos y eliminados inmediatamente, siguiendo los protocolos establecidos.

9. ANEXO

10. FIRMA...